發(fā)布時間：2020-07-14 20:13

【摘要】：華佗再造丸(Huatuo Zaizao Wan,HTZZ)主要用于治療痰瘀阻絡、氣血虧虛型中風恢復期及后遺癥。有患者反映服用該藥還能降低血脂,但臨床上沒有關于華佗再造丸防治高脂血癥的研究報道。因此,本文首次研究華佗再造丸對高脂血癥模型小鼠的作用,以闡明華佗再造丸通過調(diào)節(jié)血脂指標、改變高脂血癥造成的組織病理性改變等防治高脂血癥的作用機制。華佗再造丸屬于國家保密處方,在藥典中僅公開了處方中的部分成分:川芎、吳茱萸、冰片,所以目前沒有華佗再造丸中有效成分含量測定的指導方法和質(zhì)量標準。本文通過測定華佗再造丸的主成分含量,初步探究華佗再造丸中各成分與高脂血癥療效的量效關系,并檢測其成藥質(zhì)量,保證動物實驗的有效性、準確性,保證臨床用藥的療效和安全性。整體研究內(nèi)容共分為以下兩個章節(jié):第一章華佗再造丸治療小鼠高脂血癥的藥效評價研究目的:系統(tǒng)評價華佗再造丸對小鼠高脂血癥的治療作用,并初步探索其作用機制,為華佗再造丸治療高脂血癥的機制和療效提供有力科學證據(jù),給高脂血癥的中醫(yī)藥臨床治療提供更多有效、低副作用的治療手段。方法:本研究以C57BL/6小鼠為研究對象,采用高脂飲食誘導建立小鼠高脂血癥模型,通過灌胃給藥方式每日給與不同劑量的華佗再造丸,動態(tài)監(jiān)控給藥后小鼠生長狀況及血脂水平變化等指標,并采用生化檢測及病理組織形態(tài)學方法檢測小鼠組織細胞形態(tài)學的變化。結果:實驗表明,華佗再造丸給藥干預后可不同程度改善高脂血癥各方面表型,包括:(1)降低小鼠體重增長值。華佗再造丸低劑量組、高劑量組、聯(lián)用組對均能明顯減輕小鼠體重(p0.05)。(2)降低小鼠血脂水平。聯(lián)用組可顯著降低血清中TC(p0.01)、TG(p0.01)及LDL-C(p0.05)水平,顯著升高HDL-C(p0.01)水平;低劑量組明顯降低血清TG(p0.01)、LDL-C(p0.05)水平,顯著升高HDL-C(p0.01)水平;中劑量組明顯降低血清TG(p0.05)、LDL-C(p0.01)水平,顯著升高HDL-C(p0.01)水平;高劑量組可明顯降低血清TC(p0.01)、TG(p0.01)及LDL-C(p0.05)水平,顯著升高HDL-C(p0.01)水平。(3)降低空腹血糖。高劑量組和聯(lián)用組空腹血糖有明顯降低(p0.05)。(4)提高葡萄糖耐量。高劑量組能明顯提高糖耐量(p0.05)。(5)提高胰島素敏感性。各給藥組的胰島素敏感性均升高,其中聯(lián)用組有明顯差異(p0.05)。(6)降低肝臟中TC、TG、MDA含量以及提高SOD活性。低劑量組小鼠肝臟中的TC、TG、MDA含量明顯降低(p0.05),中劑量組TC含量明顯降低(p0.05),高劑量組TC(p0.01)、TG(p0.05)、MDA(p0.05)含量降低,聯(lián)用組TG、MDA明顯降低(p0.05)。(7)降低附睪脂肪指數(shù)。高劑量組和聯(lián)用組明顯降低附睪指數(shù)(p0.05)。(8)降低附睪脂肪脂滴面積。高劑量組、低劑量組、聯(lián)用組均能顯著性降低附睪脂肪脂滴面積(p0.01)。(9)降低肝脂肪脂滴面積,保護小鼠肝細胞結構。各給藥組的脂滴明顯變小,肝組織較為完整,其中中劑量組(p0.05)及聯(lián)用組(p0.01)有顯著差異。結論:華佗再造丸可通過降低C57BL/6小鼠體內(nèi)TC、TG、LDL-C、MDA水平,提高HDL-C水平,和SOD活性,降低體重和脂肪細胞大小,減少肝臟脂肪沉積,提高糖耐量和胰島素敏感性,以達到治療高脂血癥的作用。持續(xù)給藥干預能預防和治療高脂血癥及高脂血癥誘發(fā)的肥胖、脂肪肝及胰島素抵抗等疾病。本研究結果進一步擴大了華佗再造丸的適應癥范圍,為腦卒中并高血脂癥患者提供了更精準的治療方案,也為高脂血癥和心腦血管疾病患者提供了更多的治療方法。第二章華佗再造丸主成分含量測定目的:對華佗再造丸主成分進行含量測定,初步探究華佗再造丸中各成分與高脂血癥療效的量效關系,并且檢測成藥質(zhì)量,保證動物實驗的有效性、準確性,及臨床用藥的療效和安全性。方法:運用高效液相色譜法(HPLC)同時對華佗再造丸中川芎及吳茱萸的主要成分阿魏酸(Ferulic Acid,簡稱FA)、吳茱萸堿(Evodiamine,簡稱Evo)和吳茱萸次堿(Rutaecarpine,簡稱Rut)進行含量測定,通過氣相色譜法(GC)對華佗再造丸中冰片的主要成分龍腦(Borneol,簡稱Bor)進行含量測定。結果:檢測的10批華佗再造丸(180807、180813、180825、180826、180827、180828、180829、180830、180831、180901)中FA平均含量為101.168μg/g,RSD=12.09%;Evo平均含量為66.522μg/g,RSD=15.66%;Rut平均含量為36.647μg/g,RSD=6.11%;Bor平均含量為27.811μg/g,RSD=16.88%。結論:實驗結果顯示,10批華佗再造丸中阿魏酸平均含量最高,其次吳茱萸堿。由此推測華佗再造丸對高脂血癥的療效可能主要與阿魏酸、吳茱萸堿的含量有關。且不同批次的華佗再造丸中阿魏酸、吳茱萸堿、吳茱萸次堿和龍腦含量有所差異,但差異不大,說明華佗再造丸成藥質(zhì)量穩(wěn)定。在本實驗擬定色譜條件下,待檢測成分與其他成分可達到完全分離,且精確度高、重復性好、穩(wěn)定性好、回收率在合理范圍內(nèi),證明在該提取方法及色譜條件下系統(tǒng)適用性好,可作為華佗再造丸成藥質(zhì)量控制的方法。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1. 造模第 8 周正常組（NCD）與高脂血癥模型組（HFD）的體重和血脂水平(x SD，n=9)，（A）小鼠體重、（B）小鼠血脂，#p<0.05、##p<0.01 表示與正常組較有明顯差異3.2. 華佗再造丸對小鼠體重的影響給藥周期 8 周，同一周內(nèi)比較高脂模型組與正常組的體重水平變化情況，結果明高脂模型組的體重有明顯增加（p<0.01）。同一周內(nèi)比較給藥組與高脂模型組的重水平變化情況，結果表明華佗再造丸低劑量組、高劑量組、聯(lián)用組對均能明顯減小鼠體重（p<0.05），效果最好的是聯(lián)用組。比較同組小鼠給藥 0~8 周內(nèi)的體重變化，計算每周體重差ΔW（ΔW=W-W0周）結果表明華佗再造丸低劑量組（ΔWmax= -2.990 1.425、p>0.05）、中劑量組（ΔWma-0.391 5.468、p>0.05）、高劑量組（ΔWmax= -5.734 2.459、p<0.01）、聯(lián)用組（ΔWma-4.713 2.425、p<0.01）在給藥期間對小鼠體重均有不同程度的降低作用，其中高劑組和聯(lián)用組的體重變化有統(tǒng)計學意義。結果見表 1-2。

血糖濃度(mmol/L)曲線下面積分組時間/min0 15 30 60 90 120NCD 4.163±0.689 2.913±0.569 2.438±0.267 2.200±0.000 2.200±0.000 2.200±0.000 294.800±41.600HFD 6.750±2.823 5.550±2.423 3.725±1.705 2.888±0.960 2.825±0.966 2.800±0.975 431.100±37.500#LH5.671±1.384 4.714±1.649 2.886±1.033 2.429±0.605 2.243±0.113 2.200±0.000 351.300±56.710MH7.038±1.284 5.250±1.204 3.263±0.955 2.500±0.454 2.438±0.346 2.438±0.407 389.600±70.380HH5.140±0.948 4.260±1.799 2.820±0.701 2.320±0.217 2.200±0.000 2.200±0.000 334.500±51.400CH4.580±0.701 3.460±1.117 2.260±0.134 2.200±0.000 2.220±0.045 2.200±0.000 302.700±25.800*Sim 3.860±0.921 3.060±0.508 2.260±0.134 2.200±0.000 2.220±0.045 2.200±0.000 290.660±26.000*#p<0.05 表示與正常組比較有顯著差異，*p<0.05 表示與高脂模型組比較有顯著差異

圖 1-3.各組藥物對小鼠肝臟中各物質(zhì)活性的影響(x SD，n=9)，（A）TC、（B）TG、（C）MDA、（D）SOD，#p< 0.05 表示與正常組比較有顯著差異，*p<0.05、**p<0.01表示與高脂模型組比較有顯著差異3.6. 華佗再造丸對小鼠肝指數(shù)和附睪脂肪指數(shù)的影響（肝指數(shù)=肝臟重量/體重*100%；附睪脂肪指數(shù)=附睪脂肪重量/體重*100%）。與正常組相比，高脂模型組肝指數(shù)明顯降低（p<0.05），附睪指數(shù)顯著升高（p<0.01）。與高脂模型組比較，各組肝指數(shù)都有升高，但無顯著性差異；低劑量組、高劑量組、聯(lián)用組降低附睪指數(shù)，高劑量組和聯(lián)用組附睪指數(shù)明顯降低（p<0.05）。結果見表 1-7、圖 1-4。

【參考文獻】

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本文編號：2755435