【摘要】：心肌缺血性疾病給人們的生命安全和生活質(zhì)量帶來很大的危害。長期心肌缺血得不到改善會帶來永久性心臟損傷。西醫(yī)對心肌缺血疾病的治療主要依靠藥物干預(yù)和外科手術(shù)的方法,而外科手術(shù)對患者的創(chuàng)傷較大,存在較高的風(fēng)險性。中藥憑借其性質(zhì)溫和及毒副作用低的優(yōu)勢,越來越受到廣大患者的青睞。葛根素對治療心肌缺血具有顯著的作用,但是由于葛根素水不溶性從而導(dǎo)致口服葛根素的生物利用率低,限制了葛根素在治療心肌缺血方面的應(yīng)用。因此,通過對脂質(zhì)體進(jìn)行修飾,利用靶向遞送方式直接將葛根素富集在心肌缺血的細(xì)胞中,可以較大程度的提升葛根素的生物利用度。本研究利用薄膜分散法經(jīng)超聲水化處理制得空白脂質(zhì)體(LIP)和葛根素脂質(zhì)體(Pue-LIP)。通過4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)分別處理DSPE-PEG2000-MAL和抗cTnI抗體,經(jīng)過12h的孵育得到Anti-cTnI Ab-PEG2000-DSPE連接物后和空白脂質(zhì)體孵育得到抗心肌肌鈣蛋白修飾的脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-LIP),再通過將Anti-cTnI Ab-PEG2000-DSPE與所制備的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行孵育得到抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-Pue-LIP)。通過透射電鏡(TEM)觀察所制備的脂質(zhì)體形態(tài)、采用激光粒度儀檢測脂質(zhì)體的粒徑和Zeta電位,并計算包封率、載藥量及藥物釋放。MTT法評價脂質(zhì)體毒性。MST評價LIP和Anti-cTnI Ab-LIP與cTnI抗原的相互作用情況,以此評價抗體與抗原靶向結(jié)合能力。流式細(xì)胞儀和活細(xì)胞工作站檢測心肌細(xì)胞對抗體修飾的脂質(zhì)體的攝取情況。小動物活體成像技術(shù)檢測脂質(zhì)體在大鼠心臟部位的攝取強(qiáng)度。采取構(gòu)建大鼠心肌缺血模型的方法,用TTC染色大鼠心臟評判大鼠心肌缺血模型是否成功建立。通過大鼠心電圖的分析和小動物超聲成像技術(shù)對Anti-cTnI Ab-Pue-LIP的藥物效果進(jìn)行評價。電鏡觀察所制備的脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-Pue-LIP)為規(guī)則的圓球形。激光粒度儀檢測結(jié)果表明,Anti-cTnI Ab-Pue-LIP粒徑均勻分布且平均粒徑均在100-120 nm之間,脂質(zhì)體帶負(fù)電,電荷量在-33.4±0.79 mV左右。Anti-cTnI Ab-Pue-LIP包封率為72.7±1.47%,載藥量為 2.12±0.21%。在 8h 時測得的 Anti-cTnI Ab-LIP、Anti-cTnI Ab-Pue-LIP的釋放度分別為47.72±2.37%和46.79±2.46%。小動物活體成像實驗結(jié)果表明Anti-cTnI Ab-LIP體內(nèi)熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。MTT實驗結(jié)果顯示將藥物用脂質(zhì)體包載后能有效的降低藥物對細(xì)胞的毒性。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明心肌細(xì)胞對Anti-cTnI Ab-LIP攝取能力為普通脂質(zhì)體的3.6倍�；罴�(xì)胞工作站結(jié)果顯示Anti-cTnI Ab-LIP能成功富集在心肌細(xì)胞。MST檢驗結(jié)果表明Anti-cTnI Ab-LIP與心肌缺血標(biāo)記物心肌肌鈣蛋白(cTnI)的結(jié)合能力更強(qiáng),Kd值為116.3±46.35nM。小動物超聲成像顯示Anti-cTnI Ab-Pue-LIP能有效緩解由心肌缺血引起的左室末期容積增大現(xiàn)象;大鼠心電圖結(jié)果顯示Anti-cTnI Ab-Pue-LIP能改善心肌缺血大鼠的心電波動,使其趨向于正常大鼠的心電圖。以上結(jié)果表明采用薄膜分散法并用超聲處理制得脂質(zhì)體體系穩(wěn)定、粒徑較小、分散均勻且包封率理想。經(jīng)過抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體對藥物的釋放沒有明顯影響。Pue-LIP和Anti-cTnI Ab-Pue-LIP對細(xì)胞的毒性更小。Anti-cTnI Ab-LIP的靶向性更優(yōu)良能成功富集于缺血心肌細(xì)胞中。Anti-cTnI Ab-Pue-LIP對心肌缺血的具有良好的治療效果。因此抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體是對心肌缺血性疾病有良好治療效果的靶向給藥系統(tǒng)。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R283.6
【圖文】：

哈爾濱商業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文進(jìn)展及成果逡逑栛逡逑植物，生長在陰濕的環(huán)境中，須根多，塊根深生，呈紡色長硬毛，發(fā)達(dá)的側(cè)根向四周伸展，相互纏繞成根網(wǎng)狀。絨毛，呈菱片卵圓形或闊卵圓形狀�；ǔ实巫霞t色，黃色粗硬長毛。其根、藤莖、葉、花和種子均可入藥。其葛根黃酮含量豐富，所以葛根的藥用價值很高。葛根要成分，此外，葛根中還含有為數(shù)不多的黃酮衍生物、素等。葛根素是植物葛根的主要有效成分。逡逑

圖１－２脂質(zhì)體修飾載藥示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｌｉｐｏｓｏｍｅ逡逑１邋＿３＿２脂質(zhì)體實現(xiàn)心肌勒向性的作用機(jī)理逡逑脂質(zhì)體（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）是一種人工合成的類細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，其基本構(gòu)造和理化性質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)逡逑相似，所以脂質(zhì)體又稱為人工生物膜。逡逑有相關(guān)科學(xué)實驗得出結(jié)論，粒徑范圍在２００ｎｍ以上的脂質(zhì)體很容易被血清調(diào)理素吸附，從而逡逑被吞噬性細(xì)胞吞噬；脂質(zhì)體粒徑范圍在５０ｎｍ－１００ｎｍ之間的脂質(zhì)體則可以避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所吞逡逑噬。根據(jù)機(jī)體對不同粒徑的脂質(zhì)體的吸收程度不同的特點，就為脂質(zhì)體靶向心肌細(xì)胞提供了理論基逡逑礎(chǔ)。依據(jù)相關(guān)研究，脂質(zhì)體粒徑范圍在１０ｎｍ－１５０ｎｍ之間的可以在心肌細(xì)胞組織集聚，脂質(zhì)體粒徑逡逑在ｌｌＯｎｍ左右的最容易在心肌細(xì)胞組織停留并蓄積。脂質(zhì)體吞噬也會受到脂質(zhì)體表面電荷量的影逡逑響，與帶中性電荷的脂質(zhì)體對比，帶正電的脂質(zhì)體與負(fù)電的脂質(zhì)體與吞噬性細(xì)胞結(jié)合更加容易，從逡逑而能起到降低藥物在血液中的半衰期的作用。逡逑由于各方面的原因我國居民受到心腦血管疾病的困擾，由于心腦血管疾病的組織特異性很低所逡逑以治療的過程給人們帶來了極大的痛苦。患者需要加大藥物劑量和濃度來達(dá)到治療的目的，這就必逡逑

、據(jù)對所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行評價。并對抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行了穩(wěn)定性檢測以及長逡逑穩(wěn)定性檢測。測量了抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體的包封率和載藥量，并且對葛根素脂質(zhì)體逡逑抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行了藥物釋放方面的對比和評價。逡逑（３）細(xì)胞水平對所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行研宄：重點對葛根素脂質(zhì)體和抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素逡逑質(zhì)體進(jìn)行了細(xì)胞毒性的檢測，評價相關(guān)脂質(zhì)體的安全性。通過ＭＳＴ檢驗所制備的脂質(zhì)體與ｃＴｎｌ逡逑原親和能力評價所制備脂質(zhì)體的靶向效果。通過流式細(xì)胞術(shù)和活細(xì)胞工作站檢測評價心肌細(xì)胞對逡逑制備的脂質(zhì)體的攝取情況。逡逑（４）動物水平對所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行研究：通過對脂質(zhì)體和抗ｃＴｎｌ抗體修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行熒逡逑標(biāo)記，通過建立大鼠心肌缺血模型并注射經(jīng)過熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體通小動物活體成像技術(shù)，考察脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)的分布以及熒光強(qiáng)度對脂質(zhì)體的靶向性進(jìn)行評價。逡逑（５）相關(guān)載藥脂質(zhì)體藥效評價：通過構(gòu)建大鼠心肌缺血模型并對所建立的模型進(jìn)行檢驗，生物機(jī)能實驗系統(tǒng)對給藥大鼠心電圖的前后變化、利用小動物超聲儀檢測心肌缺血大鼠給藥前后逡逑變化來評價所制備的靶向脂質(zhì)體的藥物療效。逡逑—Ｎｏｉｒｎａｉ邐￣￣、ＬｅｓｉｏｎＭｏｃａｒｄｉａｌ邋ｒｅｌｅａｓｅＣａｒｄｉａｃ邋ｔｒｏｏｎｉｎ邋１１逡逑

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本文編號：2755308