【摘要】：目的:通過觀察清腦益元湯對急性腦缺血損傷大鼠MBP、NF200表達的影響,探究清腦益元湯對缺血性腦損傷神經(jīng)元保護作用的部分機制。方法:選用健康雄性SD大鼠192只,采用隨機數(shù)字表法分為空白組(12只),假手術(shù)組(60只),缺血模型組(60只),清腦益元湯組(60只),除空白組外,各組均在造模后5個不同處死時間點1d、3d、7d、14d、28d分為5個亞組,每組12只�？瞻捉M正常喂養(yǎng),自由飲食;假手術(shù)組參照MCAO術(shù)造模,術(shù)中插入約8mm魚線,不足以阻斷大腦中動脈血流,術(shù)后予等體積的蒸餾水灌胃,直至各處死時間點;缺血模型組在術(shù)前7日連續(xù)灌胃等量的蒸餾水,行MCAO術(shù)后,繼續(xù)灌胃蒸餾水,直至各處死取樣時間點;清腦益元湯組術(shù)前7日灌胃等體積的清腦益元湯,術(shù)后繼續(xù)灌胃清腦益元湯直至各處死取樣時間點。采用Longa的5分制法對大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀進行評分,并在MCAO術(shù)后第1d、3d、7d、14d、28d各時間節(jié)點取腦組織樣本,TTC染色觀察缺血側(cè)腦組織梗死范圍,HE染色鏡下觀察缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元的病理形態(tài)變化,采用RT-PCR檢測缺血側(cè)腦組織MBP mRNA表達水平,Western-blot檢測NF200蛋白表達水平。結(jié)果:(1)神經(jīng)功能缺損評分:空白組和假手術(shù)組大鼠的神經(jīng)功能評分為0分;缺血模型組和清腦益元湯組大鼠在術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀,與缺血模型組相比,清腦益元湯組在各個時間節(jié)點的神經(jīng)功能缺損評分減輕(P0.05)。(2)TTC染色觀察腦梗死范圍:空白組和假手術(shù)組未見灰白色的梗死灶;缺血模型組和清腦益元湯組均可見灰白色的大小不等缺血梗死灶;與缺血模型組相比,清腦益元湯組大鼠腦梗死范圍縮小。(3)HE染色結(jié)果:空白組和假手術(shù)組神經(jīng)元形態(tài)正常,結(jié)構(gòu)清楚完整,無病理性改變。缺血模型組神經(jīng)細胞壞死和凋亡明顯增多,并有中性粒細胞浸潤,樹突及軸突明顯減少,細胞核畸形最后消失,胞質(zhì)內(nèi)形成微空泡,可見巢團狀壞死。與缺血模型組對比,清腦益元湯組神經(jīng)細胞壞死減少,排列欠整齊,缺血區(qū)水腫明顯,中性粒細胞浸潤,小部分區(qū)域核固縮深染,細胞核消失,胞質(zhì)內(nèi)未見微空泡形成及巢團狀壞死,整體病理改變較缺血模型組減輕。(4)RT-PCR檢測結(jié)果:空白組和假手術(shù)組腦組織的MBP mRNA表達水平在同一時間點比較無明顯差異(P0.05);與假手術(shù)組相比,缺血模型組MBP mRNA表達水平在各時間點明顯下降(P0.01);與缺血模型組同一時間點比較,清腦益元湯組MBP mRNA表達水平明顯升高(P0.05)。(5)Western-blot檢測結(jié)果:空白組和假手術(shù)組腦組織的NF200表達水平在同一時間點比較均無明顯差異(P0.05);與假手術(shù)組相比,缺血模型組NF200表達水平在各時間點明顯下降(P0.01);與缺血模型組比較,清腦益元湯組NF200表達水平在各個時間節(jié)點均明顯升高(P0.05)。結(jié)論:清腦益元湯對腦缺血損傷后大鼠的神經(jīng)保護作用可能與調(diào)節(jié)MBP、NF200表達有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

2. 實驗方法2.1 動物分組將本次實驗各組大鼠染色標標編號，采用隨機數(shù)字表法分為四組:空白組 12 只，假手術(shù)組、缺血模型組、清腦益元湯組每組各 60 只，各組均在造模后根據(jù)不同的處死取樣時間點進一步分為 1d、3d、7d、14d、28d，5 個亞組，每個亞組 12 只，在實驗中造模失敗的大鼠予及時補充，保證各組數(shù)量一致，比較具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.2 動物造模方法

頸內(nèi)動脈由后向前依次為大腦后動脈、脈絡(luò)膜動脈、大腦中動脈、大腦前動脈，大腦中動脈為頸內(nèi)動脈的終粉分支之一，延伸后分為前后兩支，主要供應(yīng)大腦半球的背外側(cè)面及大腦腹側(cè)面的血流，見圖2。大鼠圖 2、大鼠腦結(jié)構(gòu)解剖圖大鼠腦中動脈梗阻模型（MCAO），采用文獻標錄的操作方法[2]對大鼠進行腦缺血損傷實驗造模，具體上下操作：①術(shù)前禁食不禁水，各組分別使用 3.5%水合水水溶液 1ml/100g對大鼠進行腹腔注射麻醉并標標號，麻醉后仰面固定。剔除頸部鼠毛，無無消毒，行頸部正中切口，充分暴露視野，確認右側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內(nèi)動脈(ICA)走向，夾封 CCA，結(jié)扎 ECA。②準備規(guī)格為 0.55mm 靜脈輸液針

與假手術(shù)組比較，差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與缺血模型組相比，清腦益元湯組大鼠在各個時間點的神經(jīng)功能缺損評分減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表8、圖3。表 8、各組大鼠在不同時間點神經(jīng)功能缺損評分比較（分）( X ± S，n=10)組別 1d 3d 7d 14d 28d空白組 0 0 0 0 0假手術(shù)組 0 0 0 0 0缺血模型組 2.76±0.34△2.65±0.31△2.52±0.26△2.42±0.22△2.31±0.18△清腦益元組 2.12±0.22▲1.97±0.19▲1.86±0.17▲1.72±0.13▲1.66±0.11▲注：與假手術(shù)組比較：△P＜0.01；與缺血模型組比較：▲P＜0.05。圖 3、各組大鼠在不同時間點神經(jīng)功能缺損評分圖

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本文編號：2755033