【摘要】：目的通過(guò)對(duì)甘肅野生與栽培烏拉爾甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物以及甘草水煎液、總皂苷、總黃酮化痰和止咳作用的比較研究,觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮止咳化痰作用的差異,探討甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主在止咳化痰方面是否具有相同的藥理活性,為發(fā)現(xiàn)甘草藥用資源提供新思路。方法1.采用超聲提取法分別從野生、栽培甘草中提取總黃酮和總皂苷,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其含量;再利用萃取法分別從野生、栽培甘草提取液中分離出粗總黃酮和粗總皂苷,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其純度。2.采用小鼠氣管酚紅排泌量法,以酚紅排泌量測(cè)定甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物及甘草水煎液、總黃酮、總皂苷的排痰量。采用建立痰濁阻肺大鼠模型,以大鼠一般情況變化、肺功能、肺組織病理變化、炎性因子TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23等為指標(biāo),觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮對(duì)痰濁阻肺型大鼠的干預(yù)和化痰作用的差異。3.采用小鼠氨水引咳法和大鼠機(jī)械刺激引咳法,以小鼠半數(shù)引咳時(shí)間(ET50)、R值和大鼠90 min內(nèi)咳嗽次數(shù)等為指標(biāo),觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮止咳作用的差異。4.采用BLAST同源性比較法并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)對(duì)具有止咳或化痰作用的甘草內(nèi)生菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果1.檢測(cè)結(jié)果表明,野生甘草總皂苷含量為5.23mg·g-1,總黃酮含量為16.28mg·g-1;栽培甘草總皂苷含量為3.20mg·g-1,總黃酮含量為6.81mg·g-1。野生甘草粗總皂苷含量434.64mg·g-1,純度為43.36%,粗總黃酮含量750.48mg·g-1,純度為75.05%;栽培甘草粗總皂苷含量445.88mg·g-1,純度為45.59%,粗總黃酮718.45mg·g-1,純度為71.85%。2.化痰實(shí)驗(yàn)表明,JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB060、JTZB063均能增加正常小鼠氣管酚紅排泌量(P0.05或0.01),化痰作用與甘草水煎液、總黃酮、總皂苷組相當(dāng)。痰濁阻肺實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與模型組比較,JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063組大鼠的肺功能檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)均有所上升,TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23含量均降低(P0.05或P0.01),且對(duì)痰濁阻肺型大鼠的干預(yù)作用相當(dāng)于宿主甘草水煎液、總黃酮、總皂苷。JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063組大鼠肺組織可見(jiàn)支氣管上皮較模型組完整,纖毛增多,支氣管管壁略有增厚,粘膜下炎細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組有所改善,肺泡腔輕度擴(kuò)大,肺間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。3.止咳實(shí)驗(yàn)表明,甘草內(nèi)生菌JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063均能抑制機(jī)械刺激大鼠的90min內(nèi)咳嗽次數(shù),具有止咳作用(P0.01或P0.05),且止咳作用與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮作用相似。各內(nèi)生菌組均能延長(zhǎng)氨水引咳小鼠ET50,JTZB005、JTZB006、JTZB014、JTZB020、JTZB043、JTZB060、JTZB063具有顯著作用(R150%),JTYB006、JTZB058有一定作用(R130%)。4.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JYZB058、JTZB060、JTZB063均為Bacteria;Firmicutes;Bacilli;Bacillales;Bacillaceae;Bacillus,即甘草內(nèi)生細(xì)菌;厚壁菌門(mén);芽孢桿菌綱;芽孢桿菌目;芽孢桿菌科;芽孢桿菌屬。結(jié)論1.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063等5株甘草內(nèi)生菌具有與宿主相同的化痰藥理活性,且對(duì)痰濁阻肺型大鼠肺功能和肺組織具有較好的改善作用。2.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063等6株甘草內(nèi)生菌具有與宿主相同的止咳藥理活性,且在一定環(huán)境下止咳作用優(yōu)于或等同于其宿主水煎液、或總皂苷、或總黃酮。3.綜合本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果,TYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB063等4株甘草內(nèi)生菌與其宿主甘草具有相同的止咳和化痰藥理活性,提示在止咳化痰作用方面,JTYB029可替代野生甘草,JTZB005、JTZB006、JTZB063可替代栽培甘草。4.具有止咳或化痰作用的7株甘草內(nèi)生菌(JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB058、JTZB060、JTZB063)均為芽孢桿菌屬。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285.5
【圖文】：

甘草內(nèi)生菌與宿主不同提取物化痰止咳作用研究考察曲線苷對(duì)照品溶液 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分甲醇溶劑將體積補(bǔ)至 3.0 mL，搖勻，再加 10% NaOH%甲醇溶液定容，以 70%甲醇溶液為空白，在 410 nm量（mg）為橫坐標(biāo) X，以吸光度 OD 值為縱坐標(biāo) Y 繪mg）與吸光度之間的回歸方程為： Y=1.2071X+0.014181mg 線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖 1。

圖 1 甘草苷標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線對(duì)照品溶液 0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35mL 于干燥密加入 5%香草醛-冰醋酸溶液0.25 mL，搖勻，再加入高氯浴中反應(yīng) 20 min，取出立即冰水浴冷卻至室溫，用 70%長(zhǎng)處測(cè)定其 OD 值，并以甘草酸銨質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[7]，得到甘草酸銨質(zhì)量（mg）與吸光度之.0427，r=0.9987，甘草酸銨在 0.0631～0.2209mg 線性關(guān)

甘草內(nèi)生菌與宿主不同提取物化痰止咳作用研究 548 nm。紅標(biāo)準(zhǔn)溶液4.2”下配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液在紫外分光光度計(jì)上于 548 nm 處測(cè)定液為空白，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定 3 次求平均值。以酚紅濃度 X（μ度 Y 為縱坐標(biāo)建立回歸方程 Y=0.4X+0.0631（r=0.99945），酚紅內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)圖 3。

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本文編號(hào)：2753875