【摘要】：目的:第一部分:分別用《傷寒論》原量原法及現(xiàn)代用量煎煮小青龍湯,確定古法及現(xiàn)代煎煮時間;第二部分:復(fù)制大鼠寒飲哮喘模型,在9g細(xì)辛配伍及現(xiàn)代臨床藥物用量的基礎(chǔ)上,從病理及代謝組學(xué)方面探討不同煎煮時間對小青龍湯治療哮喘的療效影響差異,并進(jìn)一步分析其作用機(jī)制;第三部分:實(shí)驗(yàn)總結(jié)及結(jié)果分析。方法:第一部分:查閱文獻(xiàn),確定小青龍湯古今劑量及煎煮加水量換算方法,經(jīng)換算后,按《傷寒論》記載的方法煎煮,共測六次求平均值,確定煎煮時間;結(jié)合古今劑量比值確定現(xiàn)代加水量,用相同方法煎煮,確定現(xiàn)代煎煮時間;第二部分:將48只SD大鼠隨機(jī)分為正常組,模型組,西藥對照組,15分鐘小青龍湯組,25分鐘小青龍湯組,35分鐘小青龍湯組,45分鐘小青龍湯組,55分鐘小青龍湯組。除正常組外,其余組按致敏和激發(fā)兩步并結(jié)合中醫(yī)證型復(fù)制大鼠寒飲哮喘模型,在激發(fā)哮喘的同時,除正常組外,其余組進(jìn)行寒冷刺激并在冰水混合物中游泳,實(shí)驗(yàn)中喂食冰水和寒冷食物,之后正常組和模型組用生理鹽水灌胃,西藥組用氨茶堿灌胃,其余各組用不同時間的小青龍湯水煎液灌胃。激發(fā)2周結(jié)束后開腹,腹主動脈采血并采集肺組織,血液離心后取血清-80℃保存,之后行LC/MS檢測,肺組織固定后作病理切片觀察,并分別分析其結(jié)果;第三部分:通過PCA及OPLS-DA分析LC/MS檢測結(jié)果,研究不同煎煮時間對小青龍湯治療哮喘的療效影響的機(jī)制,并綜合分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果:1.按原法原量煎煮后確定小青龍湯的煎煮時間為45分鐘;按估計劑量比值折算后煎煮確定現(xiàn)代煎煮時間為35分鐘;2.從肺組織病理結(jié)果和LC/MS檢測綜合分析,本實(shí)驗(yàn)哮喘模型建立成功,并且與其他組相比,35分鐘組小青龍湯的PCA結(jié)果更接近于正常組,療效最好;3.找到大鼠血清中與小青龍湯治療哮喘相關(guān)的14種潛在標(biāo)志物,西藥組及不同小青龍湯組通過調(diào)節(jié)標(biāo)志物的含量發(fā)揮作用,這些標(biāo)志物涉及糖基化磷脂�；嫉纳锖铣伞⑶手惖拇x、溶血磷脂酸的代謝、甘油磷脂的代謝四條代謝通路四條代謝通路,對代謝通路分析后發(fā)現(xiàn),小青龍湯主要是通過回調(diào)標(biāo)志物的含量,以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用于哮喘的炎癥、支氣管收縮和氣道重塑等環(huán)節(jié),說明了小青龍湯的療效機(jī)理。結(jié)論:1.經(jīng)實(shí)物測量,小青龍湯的原法原量煎煮時間為45分鐘,據(jù)現(xiàn)代用量煎煮時間為35分鐘,二者對小青龍湯療效影響有差異;2.在成功建立哮喘模型的基礎(chǔ)上,與其它組相比,35分鐘的小青龍湯治療最好,說明現(xiàn)代煎煮時間更符合臨床用藥實(shí)際;3.基于LC/MS檢測,分析小青龍湯治療哮喘的潛在血清標(biāo)志物及其涉及的代謝通路,發(fā)現(xiàn)小青龍湯通過回調(diào)血清中的標(biāo)志物以控制炎癥,支氣管平滑肌收縮和氣道重塑,脂質(zhì)代謝在其調(diào)節(jié)作用中占重要地位,說明小青龍湯治療哮喘的作用機(jī)制與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R289.5;R285.5
【圖文】：

12圖 1-5-1 HE 染色觀察各組大鼠肺組織病理變化（40×10）A：正常組 B：模型組 C：西藥對照組 D：15 分鐘小青龍湯組 E：25 分鐘小青龍湯組 F:35 分鐘小青龍湯組 G：45 分鐘小青龍湯組 H：55 分鐘小青龍湯組由圖 2-5-1 可以看出，正常組大鼠病理切片基本正常，無明顯炎細(xì)胞浸潤。支氣管周圍可見淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞浸潤，氣道粘膜下組織水腫，支氣管纖毛胞脫落，杯狀細(xì)胞增生明顯；西藥對照組中仍有少量吞噬細(xì)胞浸潤；15 分鐘小湯組仍有支氣管平滑肌痙攣，無明顯炎性細(xì)胞浸潤；25 分鐘小青龍湯組有明顯巴細(xì)胞浸潤；35 分鐘小青龍湯組無炎性細(xì)胞浸潤，支氣管結(jié)構(gòu)及氣道均正常；鐘小青龍湯組除有少量炎性細(xì)胞浸潤外，其它基本正常；55 分鐘小青龍湯組有炎性細(xì)胞浸潤。通過對比發(fā)現(xiàn)，模型組病理出現(xiàn)哮喘的病理改變，15、25、45、55 分鐘小干預(yù)后，肺組織的炎性浸潤和支氣管結(jié)構(gòu)均有所好轉(zhuǎn)，但未完全消失；而 35

12圖 1-5-1 HE 染色觀察各組大鼠肺組織病理變化（40×10）A：正常組 B：模型組 C：西藥對照組 D：15 分鐘小青龍湯組 E：25 分鐘小青龍湯組 F:35 分鐘小青龍湯組 G：45 分鐘小青龍湯組 H：55 分鐘小青龍湯組由圖 2-5-1 可以看出，正常組大鼠病理切片基本正常，無明顯炎細(xì)胞浸潤。支氣管周圍可見淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞浸潤，氣道粘膜下組織水腫，支氣管纖毛胞脫落，杯狀細(xì)胞增生明顯；西藥對照組中仍有少量吞噬細(xì)胞浸潤；15 分鐘小湯組仍有支氣管平滑肌痙攣，無明顯炎性細(xì)胞浸潤；25 分鐘小青龍湯組有明顯巴細(xì)胞浸潤；35 分鐘小青龍湯組無炎性細(xì)胞浸潤，支氣管結(jié)構(gòu)及氣道均正常；鐘小青龍湯組除有少量炎性細(xì)胞浸潤外，其它基本正常；55 分鐘小青龍湯組有炎性細(xì)胞浸潤。通過對比發(fā)現(xiàn)，模型組病理出現(xiàn)哮喘的病理改變，15、25、45、55 分鐘小干預(yù)后，肺組織的炎性浸潤和支氣管結(jié)構(gòu)均有所好轉(zhuǎn)，但未完全消失；而 35

果表明該方法重復(fù)性高，穩(wěn)定性好，可滿足大批量樣本的代謝組學(xué)研究需求。2.4.2 不同煎煮時間的小青龍湯對哮喘大鼠血漿代謝輪廓異常的調(diào)控作用用 SIMCA 軟件對正常組、模型對照組和 35 分鐘小青龍湯組大鼠血清代謝輪廓進(jìn)行 PCA 分析得分圖見圖 2-4-1(A)，可見模型組和正常組在 t[1]方向區(qū)分明顯，說明正常組和模型組血清輪廓存在顯著差異，與病理研究結(jié)果相一致。小青龍湯組（35分鐘）偏離模型組，靠近正常組，說明小青龍湯可以有效改變哮喘大鼠血清代謝輪廓。同時，并通過排列實(shí)驗(yàn)(Permutation Test）對模型進(jìn)行驗(yàn)證，見圖 4-2-1（B），回歸線斜率較大并且與縱軸截距小于零，說明該數(shù)學(xué)模型成立，可用于各組的代謝輪廓差異分析。A B

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2751701