【摘要】：目的探討參麥注射液對(duì)哮喘模型大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)中瞬時(shí)受體電位通道蛋白A1(TRPA1)表達(dá)的影響及其對(duì)哮喘大鼠ASMCs增殖調(diào)節(jié)作用的可能機(jī)制。方法將30只6周齡雄性SPF級(jí)SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組:對(duì)照組、哮喘組和參麥注射液治療組,每組10只。哮喘組和參麥注射液治療組應(yīng)用卵蛋白建立哮喘模型,參麥注射液治療組造模的同時(shí)腹腔內(nèi)每天注射2 ml參麥注射液,末次激發(fā)后留取肺組織及尾靜脈血。通過(guò)HE染色檢測(cè)各組大鼠氣道結(jié)構(gòu)的變化,并計(jì)算管壁面積WA)/管腔內(nèi)周長(zhǎng)(Pi)、支氣管平滑肌面積(S)/Pi、支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)(N)/Pi;通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光鑒定ASMCs;通過(guò)RT-PCR檢測(cè)TRPA1和PCNA m RNA的表達(dá);通過(guò)Western blotting檢測(cè)TRPA1蛋白的表達(dá);通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)PCNA蛋白的表達(dá);通過(guò)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)ASMCs內(nèi)Ca2+濃度;通過(guò)CCK-8法檢測(cè)各組大鼠ASMCs增殖情況;通過(guò)ELISA檢測(cè)大鼠尾靜脈血中IL-4、IL-5、IL-13的水平。使用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,多組間的比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t法。結(jié)果與對(duì)照組相比,哮喘組的大鼠氣道發(fā)生重塑,氣管的WA/Pi、S/Pi、N/Pi明顯增高(均P0.05)。與哮喘組相比,參麥注射液治療組的大鼠氣道重塑被抑制,氣管的WA/Pi、S/Pi、N/Pi顯著降低(均P0.05)。與對(duì)照組相比,哮喘組大鼠ASMCs中TRPA1、PCNA的m RNA和蛋白的表達(dá)增加,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加,增殖增加,尾靜脈血中IL-4、IL-5、IL-13的水平增高(均P0.05)。與哮喘組大鼠相比,參麥注射液治療組ASMCs中的TRPA1、PCNA的m RNA和蛋白的表達(dá)明顯減少,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度減少,增殖減少,尾靜脈血中IL-4、IL-5、IL-13的水平降低(均P0.05)。結(jié)論參麥注射液可能通過(guò)抑制對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度和IL-4、IL-5、IL-13有調(diào)節(jié)作用的TRPA1通道的表達(dá)來(lái)防治哮喘中ASMCs的過(guò)度增殖。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的 OD 值計(jì)算樣品濃度，乘以稀釋倍數(shù)得到樣品的實(shí)際濃度。（十）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。服從正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ± s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。以 P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果一、氣道平滑肌細(xì)胞的鑒定原代培養(yǎng)的細(xì)胞在相差纖維鏡下呈明顯的“峰谷樣”生長(zhǎng)；經(jīng)免疫組化染色后α-actin 陽(yáng)性表達(dá)；免疫熒光染色后，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)綠色熒光的肌絲，且細(xì)胞呈典型的梭狀。經(jīng)鑒定，培養(yǎng)的細(xì)胞為氣道平滑肌細(xì)胞。見(jiàn)圖 1。

二、氣道重塑的形態(tài)變化（一）HE 染色結(jié)果對(duì)照組大鼠氣道黏膜完整，管腔光滑，未見(jiàn)損傷及增生。支氣管哮喘組大鼠氣道可見(jiàn)大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)黏膜下層，氣道壁和支氣管平滑肌的厚度明顯增加，氣道發(fā)生重塑。而 SMI 治療組，氣道重塑明顯減少，且支氣管的形態(tài)結(jié)構(gòu)接近正常（見(jiàn)圖 2）。

和 PCNA mRNA 的表達(dá)哮喘組大鼠 ASMCs 中 TRPA1 和 PCN意義（P<0.05）；與哮喘組相比，SMI mRNA 的表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義道平滑肌組織 TRPA1、PCNA

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2747700