【摘要】：中藥玄參為玄參科玄參屬植物玄參(Scrophulaia ningpoensis Hemsl.)的干燥根。別名元參、墨參、浙玄參等,主要分布于我國(guó)的長(zhǎng)江流域,現(xiàn)多為栽培品。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為中品。李時(shí)珍釋其名曰:“玄,黑色也”,其莖似人參,故得參名。玄參性微寒,味甘、苦、咸,歸肺、脾、腎經(jīng),清熱涼血,滋陰降火,解毒散結(jié)。用于熱入營(yíng)血,溫毒發(fā)斑,熱病傷陰,舌絳煩渴,津傷便秘,骨蒸勞嗽,目赤,咽痛,白喉,vB疬,癰腫瘡毒。然而,產(chǎn)地、采收、加工、“發(fā)汗”方法等因素對(duì)玄參藥材有效成分造成一定的影響,導(dǎo)致藥材質(zhì)量參差不齊。如何在藥材生產(chǎn)過程中,保證玄參藥材的優(yōu)質(zhì)和質(zhì)量均一已成為其生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵問題。本課題通過對(duì)玄參藥材中多元功效成分的系統(tǒng)分析,比較不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間、不同加工方法和不同“發(fā)汗”條件玄參中各功效成分的變化;采用UFLC-TripleTOF-MS/MS技術(shù)對(duì)玄參進(jìn)行植物代謝組學(xué)研究,分析、比較不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間、不同加工方法及不同“發(fā)汗”條件玄參化學(xué)成分及其差異,篩選、鑒定差異化學(xué)成分,并找出其量的變化規(guī)律;采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)對(duì)玄參“發(fā)汗”過程中不同階段的樣品進(jìn)行測(cè)定,分析比較玄參“發(fā)汗”過程中不同階段微生物群落結(jié)構(gòu)變化;結(jié)合菌種分離純化技術(shù)得到玄參中內(nèi)生菌種,并采用超快速液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UFLC-Triple TOF-MS/MS)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)對(duì)不同菌種接種玄參及“發(fā)汗”玄參與滅菌后烘干玄參化學(xué)成分的差異性進(jìn)行分析。課題研究?jī)?nèi)容主要包括以下幾個(gè)方面:1、文獻(xiàn)研究系統(tǒng)查閱玄參國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)其進(jìn)行文獻(xiàn)綜述研究。2、玄參多元指標(biāo)成分的分析采用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間、不同加工方法和不同“發(fā)汗”條件玄參中指標(biāo)成分進(jìn)行比較分析,并采用灰色關(guān)聯(lián)度、TOPSIS和DTOPSIS等對(duì)玄參中指標(biāo)成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。建立了UFLC-QTRAP-MS/MS同時(shí)測(cè)定環(huán)烯醚萜苷(哈巴苷、哈巴俄苷、梓醇、桃葉珊瑚苷)、苯丙素苷(毛蕊花糖苷、安格洛苷C)、有機(jī)酸(肉桂酸、咖啡酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、對(duì)甲氧基肉桂酸、反式丁烯二酸)12種多元功效成分的方法;建立UFLC-QTRAP-MS/MS同時(shí)測(cè)定玄參中10種核苷類成分的方法;建立了UFLC-QTRAP-MS/MS同時(shí)測(cè)定環(huán)烯醚萜苷、苯丙素苷、有機(jī)酸、核苷、氨基酸39種化學(xué)成分進(jìn)行分析。采用ICP-MS測(cè)定不同產(chǎn)地和不同采收時(shí)間玄參中24種無(wú)機(jī)元素。結(jié)果顯示:不同采收時(shí)間玄參中各成分呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化;不同產(chǎn)地及商品藥材、不同加工和不同“發(fā)汗”條件各成分差異明顯。3、玄參UFLC-Triple TOF-MS/MS植物代謝組學(xué)分析建立UFLC-Triple TOF-MS/MS結(jié)合多元分析技術(shù),對(duì)不同產(chǎn)地、采收時(shí)間、加工方法、“發(fā)汗”條件玄參中化學(xué)成分組成進(jìn)行分析。根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù),結(jié)合軟件數(shù)據(jù)庫(kù)和相關(guān)文獻(xiàn)搜索進(jìn)行成分鑒別;采用PCA、PLS-DA和OPLS-DA找出不同產(chǎn)地、采收時(shí)間、加工方法、“發(fā)汗”條件中差異化學(xué)成分及其變化規(guī)律。結(jié)果顯示:不同產(chǎn)地玄參中化學(xué)成分組成均差異顯著,進(jìn)一步OPLS-DA分析篩選出11個(gè)共有差異成分；不同采收時(shí)間中篩選出10個(gè)共有差異成分,且呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)變化的趨勢(shì);不同加工方法玄參中篩選出12個(gè)共有差異成分,且呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化;不同“發(fā)汗”條件玄參中化學(xué)成分差異顯著,篩選出8個(gè)化學(xué)成分為共有差異成分。4、玄參“發(fā)汗”過程中微生物群落結(jié)構(gòu)分析及其對(duì)化學(xué)轉(zhuǎn)化的影響本實(shí)驗(yàn)采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)對(duì)玄參“發(fā)汗”過程中不同階段的樣品進(jìn)行測(cè)定,分析比較玄參“發(fā)汗”過程中不同階段微生物群落結(jié)構(gòu)變化。結(jié)合菌種分離純化技術(shù)得到玄參中內(nèi)生菌種,并采用超快速液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UFLC-Triple TOF-MS/MS)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)對(duì)不同菌種接種玄參及“發(fā)汗”玄參與滅菌后烘干玄參化學(xué)成分的差異性進(jìn)行分析。通過二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜分析,對(duì)其質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行峰匹配、峰對(duì)齊、濾噪處理等進(jìn)行特征峰提取;用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理;根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜精確質(zhì)荷比和二級(jí)質(zhì)譜碎片信息,結(jié)合軟件數(shù)據(jù)庫(kù)搜索及相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行成分鑒定。結(jié)果顯示:不同菌種接種玄參樣品與滅菌后直接烘干玄參樣品間的化學(xué)組成得到有效區(qū)分;初步篩選并鑒定出4號(hào)真菌接種玄參及“發(fā)汗”玄參與滅菌后烘干玄參樣品間29個(gè)共有差異化學(xué)成分,本研究分析各菌種與化學(xué)成分之間的聯(lián)系,可為探討玄參藥材的品質(zhì)形成機(jī)制及確定與“發(fā)汗”相關(guān)內(nèi)生菌菌種提供基礎(chǔ)資料,系統(tǒng)科學(xué)地探索玄參“發(fā)汗”對(duì)化學(xué)轉(zhuǎn)化與生物轉(zhuǎn)化的影響。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

邐第二章玄參不同產(chǎn)地及商品藥材的質(zhì)量分析主成分分析也稱為主分量分析，旨在利用降維的思路將原來(lái)變量重新組一組新的互相無(wú)關(guān)的幾個(gè)綜合變量，同時(shí)根據(jù)實(shí)際情況從中選取幾個(gè)較少的變量，盡可能多的反映原來(lái)變量信息的統(tǒng)計(jì)方法［２５］。采用ＰＣＡ多變量模式方法對(duì)４個(gè)產(chǎn)地玄參樣品進(jìn)行降維分析。圖２－５－２為４個(gè)產(chǎn)地玄參ＰＣＡ分析的點(diǎn)圖（ｔｌ：邋４２．９％；邋ｔ２：邋２７．４％），從圖２－５－２中可以看出，不同產(chǎn)地玄參的組在ＰＣＡ軸上呈逐步變化的趨勢(shì)，可以看出４個(gè)產(chǎn)地玄參樣品分布在不同區(qū)分類結(jié)果較為理想，說(shuō)明４個(gè)產(chǎn)地的玄參樣品的化學(xué)成分存在明顯差異。從圖可以看出湖南龍山的樣品和四川巴中及浙江磐安的樣品距離較近，說(shuō)明這三個(gè)地的玄參樣品組內(nèi)的均一性較好，即化學(xué)成分組成接近，而湖北恩施的樣品距其它三組的樣品較遠(yuǎn)，說(shuō)明湖北恩施與其他三個(gè)產(chǎn)地玄參樣品的差異較大。逡逑

圖２－５－３湖北恩施（Ａ）和湖南龍山（Ｂ）的玄參樣品的ＯＰＬＳ－ＤＡ得分圖（ａ）和ＶＩＰ逡逑得分圖（ｂ）逡逑Ｆｉｇ．邋２－５－３邋ＯＰＬＳ－ＤＡ邋ｓｃｏｒｅｓ邋ｐｌｏｔ邋（ａ）邋ａｎｄ邋ｖａｒｉａｂｌｅ邋ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ邋ｐｌｏｔ邋（ｂ）邋ｏｆ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｆｒｏｍ逡逑Ｈｕｂｅｉ邋Ｅｎｓｈｉ邋（Ａ）邋ａｎｄ邋Ｈｕｎａｎ邋Ｌｏｎｇｓｈａｎ（Ｂ）逡逑對(duì)湖北恩施和四川巴中的玄參樣品進(jìn)行ＯＰＬＳ－ＤＡ分析，兩個(gè)產(chǎn)地的玄參樣逡逑品，在其散點(diǎn)圖中兩者可以明顯區(qū)分（圖２－５－４ａ）。模型驗(yàn)證顯示其有效可靠逡逑（７？２；Ｋ＝０．９９８，０＝０．９９１）。同樣兩個(gè)產(chǎn)地的ＶＩＰ得分圖（圖２－５－４ｂ）顯示共有逡逑１３０個(gè)特征峰的ＶＩＰ值大于１。逡逑▲逡逑０ＳＳ邋－邐▲逡逑４ａ邐０Ｓ８－邐４邐４ｂ逡逑邐０ＳＳ－邐灄逡逑４Ｃ邐－邐Ｉ逡逑〈

本文編號(hào)：2747078