【摘要】：目的:我們的前期實(shí)驗(yàn)已證明芒果甙(mangiferin,MA)可上調(diào)小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cells,MNCs)中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cells,Bregs)和白細(xì)胞介素10(interleukin 10,IL-10)水平,本次研究在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探究MA上調(diào)Bregs和IL-10的分子機(jī)制,為MA運(yùn)用于慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)防治提供分子依據(jù)。方法:通過(guò)頸椎脫臼法處死雄性BALB/c小鼠后,用紅細(xì)胞裂解液分離出小鼠脾臟MNCs。首先檢驗(yàn)MA是否可以激活JAK2-STAT3、ERK、及TLR4-MyD88三條信號(hào)通路,在此部分研究中,實(shí)驗(yàn)分組如下:(1)DMSO對(duì)照組;(2)實(shí)驗(yàn)組:用不同濃度MA(50uM、100uM、150uM、200uM)干預(yù)小鼠脾臟MNCs,用Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、ERK、p-ERK、TLR4、MyD88等分子的蛋白表達(dá)量,用RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中TLR4的轉(zhuǎn)錄水平。然后,分別在抑制劑存在的條件下,驗(yàn)證MA激活以上信號(hào)通路是否影響B(tài)regs增殖分化和IL-10的分泌,實(shí)驗(yàn)分組如下:(1)DMSO對(duì)照組;(2)200uM MA組;(3)200uM MA+抑制劑組(JAK2激活抑制劑AG490,或STAT3激活抑制劑HO3867,或ERK激活抑制劑U0126),在證明抑制劑有效的前提下,用ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-10的濃度,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞中Bregs的比例。結(jié)果:1、MA通過(guò)激活JAK2-STAT3信號(hào)通路促進(jìn)IL-10表達(dá),但Bregs的增殖分化不受該信號(hào)通路影響:(1)MA激活JAK2-STAT3信號(hào)通路。與對(duì)照組相比,MA呈劑量依賴(lài)性促進(jìn)p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá),尤以200uM MA組增高最明顯(P=0.000,P=0.008),但不影響JAK2、STAT3的蛋白表達(dá)(P0.05)。(2)AG490、HO3867可抑制MA對(duì)JAK2-STAT3信號(hào)通路的激活作用。Western blot結(jié)果顯示,與MA組相比,MA+抑制劑組(AG490或HO3867)p-JAK2、p-STAT3的蛋白表達(dá)量顯著減少(AG490:P_(p-JAK2)=0.043,P_(p-STAT3)=0.016;HO3867:P_(p-STAT3)=0.001)。(3)AG490、HO3867抑制MA上調(diào)MNCs中IL-10表達(dá)的作用。ELISA結(jié)果顯示,與MA組相比,MA+抑制劑組(AG490或HO3867)IL-10的濃度明顯降低(AG490:P=0.0057;HO3867:P=0.0333),但流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示兩組Bregs水平并無(wú)差異(P0.05)。2、MA通過(guò)激活ERK信號(hào)通路促進(jìn)小鼠MNCs中負(fù)性調(diào)節(jié)因子IL-10的蛋白表達(dá)水平,但Bregs的增殖分化不受該通路影響:(1)MA上調(diào)ERK通路水平。與對(duì)照組相比,各組MA均可顯著提高p-ERK的蛋白水平(P=0.045、0.016、0.103、0.047),但不影響ERK的蛋白表達(dá)(P0.05)。(2)U0126抑制MA對(duì)ERK的磷酸化。Western blot結(jié)果顯示,與MA組相比,MA+U0126組p-ERK蛋白表達(dá)量顯著減少(P=0.0079)。(3)U0126抑制MA對(duì)MNCs細(xì)胞IL-10分泌的促進(jìn)作用。ELISA結(jié)果顯示,與MA組相比,MA+U0126組IL-10的水平明顯降低(P=0.0046),但流式細(xì)胞術(shù)顯示的Bregs水平兩組之間并無(wú)差異(P0.05)。3、MA可能通過(guò)激活TLR4-MyD88信號(hào)通路,促進(jìn)小鼠MNCs中Bregs增殖和IL-10產(chǎn)生:(1)RT-PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,MA明顯上調(diào)了MNCs中TLR4的轉(zhuǎn)錄水平(P=0.042、0.114、0.02、0.031);Western blot結(jié)果也顯示,MA可促進(jìn)MNCs表達(dá)TLR4(P=0.049、0.09、0.003、0.001)、MyD88(P_(100uM)=0.036)。結(jié)論:本研究對(duì)既往實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了補(bǔ)充和延伸,證實(shí)MA通過(guò)激活JAK2-STAT3和ERK兩條信號(hào)通路上調(diào)小鼠脾臟MNCs中IL-10的表達(dá),這為MA可能發(fā)揮的抗cGVHD作用提供了分子依據(jù);然而,本次研究并未發(fā)現(xiàn)MA促進(jìn)Bregs增殖的分子機(jī)制,以及芒果甙的體內(nèi)活性等一系列問(wèn)題也有待進(jìn)一步深入研究,以期為cGVHD的防治提供新的治療方案。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

20圖 1. MA 激活小鼠脾臟 MNCs 中 JAK2-STAT3 信號(hào)通路注：小鼠脾臟 MNCs 在 DMSO 組及不同濃度 MA（50uM、100uM、150uM、200uM）組的條件下培養(yǎng) 72h，用 Western Blot 法檢測(cè)細(xì)胞中 JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平，MA 組 p-JAK2、p-STAT3 的蛋白表達(dá)水平均明顯升高，而JAK2、STAT3 的表達(dá)水平較對(duì)照組無(wú)明顯變化。*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001,MA v.s. DMSO

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文圖 2. JAK2 激活抑制劑 AG490 可抑制 MA 對(duì) JAK2-STAT3 的激活作用注：小鼠脾臟 MNCs 分別在 DMSO、200uM MA、及 200uM MA+50uM AG490條件下體外培養(yǎng) 72h，用 Western Blot 法檢測(cè)細(xì)胞中 JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平。 *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, MA v.s. DMSO,MA+AG490 v.s. MA

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林周孟;何春拉;孟曉靜;;芒果甙抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

2 余勝民,鐘鳴;芒果甙藥理研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;1999年03期

3 洪永福;韓公羽;周卓倫;吳美樞;;不同采集期知母根莖中芒果甙含量變化的初步研究[J];中草藥;1985年04期

4 黃華藝,鐘鳴,孟剛,農(nóng)朝贊,趙世元,余勝民,黃琳蕓;芒果甙對(duì)大鼠腦組織過(guò)氧化脂質(zhì)損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;1999年04期

5 洪永福,韓公羽,郭學(xué)敏;西陵知母中新芒果甙的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1997年06期

6 黃華藝,鐘鳴,孟剛,農(nóng)朝贊,趙世元,朱紅梅,張青青,趙志謹(jǐn);芒果甙對(duì)大鼠血液過(guò)氧化脂質(zhì)代謝的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;1999年02期

7 陸存蘊(yùn);;治療慢性支氣管炎藥物芒果甙鑒定會(huì)報(bào)道[J];醫(yī)藥工業(yè);1976年01期

8 王強(qiáng),孫有略;知母中芒果甙的含量測(cè)定[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年06期

9 洪永福;不同采集期知母根莖中芒果甙含量變化的初步研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1985年05期

10 ;治療慢性氣管炎——芒果甙[J];上海化工;1976年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前8條

1 程鵬;黃艷平;梁顏;楊杰;鄧東紅;;芒果甙對(duì)血小板聚集和釋放功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì)第十三屆全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議暨“血栓栓塞性疾病（血栓與止血）基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展”論文摘要匯編及學(xué)習(xí)班講義[C];2011年

2 彭志剛;丁丁;賴(lài)永榕;;芒果甙對(duì)柔紅霉素致大鼠心肌細(xì)胞過(guò)氧損傷的保護(hù)作用[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

3 李文魁;陳志良;彭勇;梁少偉;梁曦云;潘景歧;;用2D NMR研究�；〈E酮甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)[A];第十屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];1998年

4 彭志剛;丁丁;賴(lài)永榕;;芒果甙對(duì)淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和侵襲的影響[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

5 彭志剛;姚奕斌;賴(lài)永榕;;芒果甙對(duì)白血病HL-60細(xì)胞周期的影響及其作用機(jī)制的研究[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 彭志剛;羅軍;賴(lài)永榕;盧玉榮;宋善俊;;芒果甙對(duì)K562細(xì)胞增殖及凋亡相關(guān)分子表達(dá)影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 彭志剛;羅軍;賴(lài)永榕;盧玉英;宋善俊;;芒果甙對(duì)白血病K562細(xì)胞端粒酶hTERT mRNA表達(dá)及其酶活性影響作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

8 彭志剛;羅軍;賴(lài)永榕;盧玉英;宋善俊;;芒果甙對(duì)白血病K562細(xì)胞周期分布和CyclinA、CyclinB1表達(dá)影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 特派記者 楊樂(lè);南寧自主創(chuàng)新產(chǎn)品高交會(huì)放異彩[N];南寧日?qǐng)?bào);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 秦智智;芒果甙通過(guò)激活JAK2-STAT3及ERK通路上調(diào)小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-10表達(dá)的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 梁顏;芒果甙對(duì)血小板4因子，血漿β球蛋白釋放以及血小板聚集率的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 石澤延;芒果甙在保護(hù)柔紅霉素致大鼠心肌細(xì)胞毒性中鐵代謝的改變其機(jī)制的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

4 戴航;扁桃葉有效化學(xué)成分及藥理研究[D];廣西大學(xué);2003年

5 余邦偉;芒果甙對(duì)柔紅霉素中毒心肌細(xì)胞SERCA2α、PLB表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2739164