【摘要】：[目的]探討槲皮素、齊墩果酸和淫羊藿苷及其配伍對高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡、p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信號通路的影響。[方法]取新生24h SD大鼠的海馬組織,采用消化法對海馬神經(jīng)元進行分離,密度梯度離心法和差速貼壁法進行純化,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)蛋白免疫熒光法進行純度鑒定。設(shè)置正常組葡萄糖(glucose,Glu)濃度為25mmol/L,高糖組Glu濃度為50mmol/L,p38MAPK 通路抑制劑 SB239063 為 10μmol/L,JNK通路抑制劑 SP600125為 lOμmol/L。在50mmol/L Glu的高糖培養(yǎng)基中,分別加入不同濃度梯度的槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷,利用細胞增殖-毒性檢測試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)摸索各藥物最佳作用濃度及其對高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元相對活性的影響。采用流式細胞儀檢測正常組、高糖組、槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組神經(jīng)元的凋亡。Western Blot檢測各組神經(jīng)元p-p38、p38、p-JNK和JNK蛋白的表達。[結(jié)果]1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,經(jīng)鑒定純度為97.2±1.1%。2.CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對高糖條件下海馬神經(jīng)元相對活性的影響:與正常組相比,高糖組神經(jīng)元相對活性降低(P0.01);與高糖組相比,槲皮素10-5mol/L、齊墩果酸10-6mol/L,淫羊藿苷105mol/L組神經(jīng)元相對活性均升高(P0.01),選為最佳作用濃度。3.流式細胞儀檢測細胞凋亡:與正常組相比,高糖組神經(jīng)元凋亡率增加(P0.01);與高糖組相比,其余各組神經(jīng)元凋亡率均減少(P0.01);槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組組間比較凋亡率無顯著差異(P0.05)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組神經(jīng)元凋亡率均減少(P0.01);分別與槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組神經(jīng)元凋亡率減少(P0.05);槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組組間比較凋亡率無顯著差異(P0.05)。4.Western Blot檢測蛋白表達:與正常組相比,高糖組p-p38/p38比值增加(P0.01);與高糖組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組p-p38/p38比值減少(P0.01),JNK抑制劑組p-p38/p38比值增加(P0.01);與p38MAPK抑制劑組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、JNK抑制劑組p-p38/p38比值增加(P0.01)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-p38/p38比值減少(P0.01)。槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組組間比較無顯著性差異(P0.05)。與正常組相比,高糖組p-JNK/JNK比值增加(P0.01);與高糖組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與JNK抑制劑組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組p-JNK/JNK比值增加(P0.01)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01)。與槲皮素+齊墩果酸組相比,槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值增加(P0.01),槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與槲皮素+淫羊藿苷組相比,齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值增加(P0.01),槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與齊墩果酸+淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01)。[結(jié)論]1.高糖條件下,海馬神經(jīng)元凋亡增加,p-p38/p38、p-JNK/JNK比值較正常組明顯升高,提示高糖環(huán)境可以將p38MAPK和JNK信號通路激活。2.槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷均能夠減少高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元的凋亡,降低p38MAPK和JNK信號通路中p38和JNK蛋白的磷酸化水平。3.與單體相比,槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷相互配伍后能進一步減少高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元的凋亡,降低p38MAPK和JNK信號通路中p38和JNK蛋白的磷酸化水平。[創(chuàng)新點]以單體槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷相互配伍對高糖條件下海馬神經(jīng)元進行干預,并從p38MAPK和JNK信號通路對其進行凋亡機制的研究。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

邐北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院邐碩士研宄生學位論文邐逡逑海馬組織中淀粉樣前體蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ邋ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＡＰＰ）、早老素１邋（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ邋１，逡逑ＰＳ１）的表達，抑制（３－淀粉樣蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐ－ｐｒｏｔｅｉｎ，邋Ａｐ）形成［３６’３７］實現(xiàn)的。淫羊逡逑藿苷具有改善阿爾茨海默�。ǎ粒欤瑁澹椋恚澹颍洌椋螅澹幔螅澹粒模┠Ｐ托∈髮W習記憶能力、調(diào)節(jié)逡逑細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、抑制ｔａｕ蛋白磷酸化及ＡＰ的生成、抗氧化應(yīng)激［３８４１］等能力。逡逑本實驗擬觀察菟絲子、女貞子和淫羊藿提取物及其配伍對高糖環(huán)境下海馬神經(jīng)逡逑元凋亡及Ｐ３８ＭＡＰＫ和ＪＮＫ信號通路的影響，為明確上述藥物配伍后作用及進一步逡逑優(yōu)化臨床處方提供實驗依據(jù)。逡逑

邐北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院邐碩士研宄生學位論文邐逡逑海馬組織中淀粉樣前體蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ邋ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＡＰＰ）、早老素１邋（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ邋１，逡逑ＰＳ１）的表達，抑制（３－淀粉樣蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐ－ｐｒｏｔｅｉｎ，邋Ａｐ）形成［３６’３７］實現(xiàn)的。淫羊逡逑藿苷具有改善阿爾茨海默�。ǎ粒欤瑁澹椋恚澹颍洌椋螅澹幔螅澹粒模┠Ｐ托∈髮W習記憶能力、調(diào)節(jié)逡逑細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、抑制ｔａｕ蛋白磷酸化及ＡＰ的生成、抗氧化應(yīng)激［３８４１］等能力。逡逑本實驗擬觀察菟絲子、女貞子和淫羊藿提取物及其配伍對高糖環(huán)境下海馬神經(jīng)逡逑元凋亡及Ｐ３８ＭＡＰＫ和ＪＮＫ信號通路的影響，為明確上述藥物配伍后作用及進一步逡逑優(yōu)化臨床處方提供實驗依據(jù)。逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2735126