發(fā)布時(shí)間：2020-06-30 04:08

【摘要】：目的木鱉子(Momordica cochinensis(Lour.)Spreng.)為葫蘆科植物木鱉的干燥成熟種子,屬于有毒中藥,臨床應(yīng)用需炮制成霜。本課題旨在優(yōu)化木鱉子霜的最佳炮制工藝,并分析比較木鱉子制霜前后的化學(xué)成分、急性毒性及抗腫瘤藥效的差異,以此探討木鱉子霜的“減毒增效”機(jī)理。方法1木鱉子霜的最佳工藝研究以絲石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯、β-谷甾醇,齊墩果酸含量及脂肪油含量的指標(biāo)歸一值“OD”為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo),采用三因素三水平的Box-Behnken響應(yīng)面法(BBD-RSM)設(shè)計(jì)試驗(yàn),考察烘制時(shí)間、烘制溫度、壓制時(shí)間對(duì)木鱉子霜的炮制工藝影響。2木鱉子制霜前后化學(xué)成分差異研究采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(UPLC-QTOF-MS),通過(guò)時(shí)間依賴型的質(zhì)譜數(shù)據(jù)掃描模式(MS~E)采集木鱉子與木鱉子霜各9批樣品的高精確度的數(shù)據(jù),將Unifil軟件與Progenesis QI軟件分析數(shù)據(jù)結(jié)合,根據(jù)主成分分析(PCA)與正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)比較木鱉子制霜前后的化學(xué)成分差異。3木鱉子制霜前后急性毒性及抗腫瘤藥效比較研究根據(jù)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)方法,以概率單位法(Bliss)計(jì)算木鱉子與木鱉子霜醇提物口服的LD_(50),并于給藥后連續(xù)14 d觀察、記錄各組小鼠的自主活動(dòng)、精神狀況及毒性反應(yīng)、死亡數(shù),實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死小鼠,取肝、腎進(jìn)行病理學(xué)檢查。采用昆明種小鼠腋下接種H_(22)肝癌腹水方式,建立移植性腫瘤模型。將H_(22)荷瘤小鼠分為模型組(無(wú)菌生理鹽水)、陽(yáng)性CTX組(20mg/kg)、陽(yáng)性復(fù)方守宮散組(1.95g/kg)、木鱉子給藥組(1.65g/kg、0.55g/kg)、木鱉子霜給藥組(1.65g/kg、0.55g/kg)及正常組,連續(xù)灌胃給藥10天。觀察荷瘤小鼠的生活狀態(tài)及體質(zhì)量變化,測(cè)定抑瘤率、臟器指數(shù);ELISA法測(cè)定血清中IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α水平;HE染色觀察腫瘤、肝臟組織的病理變化,免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中bax、bcl-2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1木鱉子霜的最佳工藝研究根據(jù)BBD-RSM優(yōu)選出木鱉子霜最佳炮制工藝條件為烘制時(shí)間1.7h、烘制溫度80℃、壓制時(shí)間30min。2木鱉子制霜前后成分差異研究木鱉子鑒定32種成分,木鱉子霜新增9種成分,共41個(gè)化合物。(1)新增9種成分,即oleragenin;Goyaglycoside f;Charantosides A;momordicoside U;3-O-β-D-glucofuranosidurono-6,3-lactone-gypsogenin;Karavilagenins D;daucosterol;Kuguacins K;Kuguacins O。(2)含量顯著差異6種成分,MomordinsⅢ、Neokug uaglucoside、nonadec-10-enoic acid、oleanolic acid木鱉子霜更高;(9Z,11Z,13E)-o ctadeca-9,11,13-trienoic acid、KaravilosidesⅠ木鱉子更高。3木鱉子制霜前后急性毒性及H_(22)抗腫瘤藥效研究3.1木鱉子制霜前后急性毒性研究木鱉子與木鱉子霜各組小鼠均不同程度的出現(xiàn)自發(fā)活動(dòng)減少、困倦、眼瞼半閉,嚴(yán)重的表現(xiàn)強(qiáng)直性抽搐,直至死亡;根據(jù)Bliss法,計(jì)算出木鱉子LD_(50)=16.777g/kg,木鱉子霜LD_(50)=28.560g/kg。木鱉子霜毒性較木鱉子明顯降低;且木鱉子霜組肝、腎組織病變程度較木鱉子組有不同程度的減輕。3.2木鱉子制霜前后的H_(22)荷瘤小鼠抗腫瘤作用研究木鱉子與木鱉子霜各組小鼠均不同程度改善H_(22)荷瘤小鼠一般狀況,提高脾臟、胸腺指數(shù),抑制腫瘤生長(zhǎng),但二者之間無(wú)顯著性差異;均升高血清IL-2、IL-6、IL-12與TNF-α的水平,且木鱉子霜較木鱉子(1.65g/kg)的IL-2、TNF-α水平顯著升高,木鱉子霜較木鱉子(0.55g/kg)的IL-12水平顯著提高;均提高腫瘤組織中bax表達(dá),并抑制bcl-2表達(dá)從而升高bax/bcl-2比值,且木鱉子霜較木鱉子顯著升高;緩解腫瘤及肝臟組織的病理學(xué)變化。結(jié)論本課題以BBD-RSM優(yōu)選的木鱉子霜炮制工藝穩(wěn)定可行,模型預(yù)測(cè)性良好。木鱉子與木鱉子霜化學(xué)成分存在“質(zhì)”、“量”差異;木鱉子霜急性毒性明顯低于木鱉子;而木鱉子霜可能通過(guò)提高IL-2、IL-6、TNF-α因子水平及調(diào)節(jié)凋亡基因bcl-2、bax水平增強(qiáng)其抗腫瘤療效,初步闡明木鱉子霜的“減毒增效”機(jī)理。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283
【圖文】：

流速 0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm，進(jìn)樣量 5μL。色譜圖見(jiàn)圖 1。圖 1 混合對(duì)照品(A)與木鱉子霜(B)HPLC 圖1.絲石竹皂苷元 3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯 2.β-谷甾醇 3.齊墩果酸Fig 1 HPLC comparison of mixed reference (A) and Momordica Semen cream (B)1.gypsogen-3-O-β-D-gluco pyranoside 2.β-sitosterol 3. oleanolic acidAB123

第一章 基于 BBD-RSM 優(yōu)化木鱉子霜炮制工藝擬合方程均顯示極其顯著的線性關(guān)系。表 1 木鱉子霜中 3 種皂苷成分回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equation and linear range of three saponins in Momordica Semen cream有效成分 回歸方程 線性范圍/μg r P絲石竹皂苷元 3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯Y=201649.25X-4227.7 0.621～3.105 0.99996<0.0001β-谷甾醇 Y=14629.45X - 658.9 0.0692～0.346 0.99997齊墩果酸 Y=8324.05X+2788.7 0.0264～0.132 0.99998A B

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 艾征東;陳立;;木鱉子抗腫瘤的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志;2018年04期

2 智慧;;蒙藥木鱉子研究進(jìn)展[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2015年A2期

3 譚萍;;木鱉子|z[J];飲食科學(xué);2018年07期

4 譚萍;;木鱉子|z[J];益壽寶典;2018年19期

5 烏斯琴;司鄧腦日布;;應(yīng)用炒藥機(jī)炮制蒙藥木鱉子效果好[J];北方藥學(xué);2012年03期

6 肖耀軍;木鱉子與番木鱉的鑒別[J];首都醫(yī)藥;2005年16期

7 張好生,王慶杰,牟忠良;木鱉子 食用醋治療扁平疣40例[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;1999年02期

8 焦新彩,時(shí)淑華;木鱉子軟膏的制備及應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;1997年07期

9 伍國(guó)健;木鱉子治癬有良效[J];新中醫(yī);1994年12期

10 賀喜格圖，包全喜;用炒藥機(jī)制木鱉子效果好[J];中國(guó)中藥雜志;1994年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 趙文杰;王磊;徐飛飛;湯超;;木鱉子種子油不皂化物成分分析[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)應(yīng)用化學(xué)年會(huì)論文集[C];2011年

2 耿藝漫;趙連梅;韓麗娜;單保恩;;木鱉子對(duì)羥基桂皮醛誘導(dǎo)黑素瘤細(xì)胞分化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

3 王一碩;趙麗娜;張振凌;;中藥木鱉子炮制歷史沿革及毒性研究進(jìn)展[A];2010中藥炮制技術(shù)、學(xué)術(shù)交流暨產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇論文集[C];2010年

4 巢志茂;;木鱉子脂肪油不皂化物質(zhì)的化學(xué)成分研究[A];中藥化學(xué)研究與藥物創(chuàng)新——中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥化學(xué)分會(huì)2006年度學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 嵇康;;中藥辯治晚期肝癌臨床療效觀察[A];第二十四次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2015年

6 賀文軍;Lai Yue Chan;劉燕;David J.Craik;殷志琦;譚寧華;;三種苦瓜屬植物中肽類和其他成分的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)天然有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——第一分會(huì)場(chǎng)：天然產(chǎn)物分離和結(jié)構(gòu)鑒定[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 中藥材天地網(wǎng);木鱉子暴漲后將回落[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2018年

2 農(nóng)訓(xùn)學(xué);幾種當(dāng)令種子藥材的采收加工[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

3 范瑛;木鱉子藥用小方[N];民族醫(yī)藥報(bào);2008年

4 宋景平;散結(jié)消腫木鱉子[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

5 農(nóng)訓(xùn)學(xué);木鱉子的采收加工[N];民族醫(yī)藥報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 肖琛聞;木鱉子皂甙及油佐劑混合物的免疫佐劑作用研究[D];浙江大學(xué);2008年

2 Kedsirin Sakwiwatkul;木鱉子皂甙對(duì)口蹄疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究[D];浙江大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 宋燕;木鱉子制霜工藝及炮制“減毒增效”機(jī)理初步研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 胡春苗;木鱉子的鑒別研究與質(zhì)量控制[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2017年

3 蔡婷;改良輔料Ⅰ復(fù)方木鱉子緩釋片的研究[D];廣東藥科大學(xué);2017年

4 潘樂(lè);LC-MS法輔助木鱉子抗腫瘤活性提取物的篩選及研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 陶晨陳;紅花栝樓、木鱉子鯊烯合酶cDNA的克隆及木鱉子鯊烯合酶的原核表達(dá)[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 姜仁輝;木鱉子皂苷分離純化、鑒定及活性研究[D];山東大學(xué);2009年

7 林志燕;中藥木鱉子抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

8 韓麗麗;木鱉子制霜工藝及機(jī)理研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

9 任廣鵬;木鱉子總皂苷測(cè)定、提取及純化研究[D];山東大學(xué);2008年

10 羅江華;木鱉子不同皂甙組分免疫佐劑作用的研究[D];浙江大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2734840