發(fā)布時間：2020-06-30 01:53

【摘要】：胡椒(Piperis Fructus)為常用中藥,含胡椒堿、胡椒脂堿、胡椒新堿等。胡椒堿化學結(jié)構(gòu)屬于桂皮酰胺類。已有研究證明,這類化合物具有治療腦缺血、抗炎、鎮(zhèn)靜等作用,但它難溶于水,在體循環(huán)中容易被代謝,吸收效率低,難以發(fā)揮良好的治療效果。使用脂質(zhì)體包裹胡椒堿能夠突破胡椒堿在體內(nèi)作用的限制,脂質(zhì)體由封閉的雙層囊泡組成,可以保護藥物不受外界環(huán)境的影響,穩(wěn)定的脂質(zhì)雙層可以抵抗血漿蛋白的侵襲和減少藥物泄漏,避免藥物降解,降低不良反應,延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間。脂質(zhì)體由于其納米尺寸,釋放持續(xù)性,良好生物相容性和生物降解性等獨特的性質(zhì),被廣泛用于生物醫(yī)學研究中,特別是在納米醫(yī)學中作為活性物質(zhì)的載體,改變了許多疾病的治療方法。RDP(rabies virus glycoprotein-derived peptide,RDP)為狂犬病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)的衍生肽。通過改造RVG位于第189~214位及第330~357位具有嗜神經(jīng)性作用的的肽段,獲得可以靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)、無免疫原性的RVG衍生肽段RDP,這種衍生肽保留了RVG的嗜神經(jīng)性,在體外和體內(nèi)均顯示出靶向神經(jīng)細胞的作用,具有將外源大分子化合物轉(zhuǎn)運入腦的潛在功能。通過利用RVG衍生物一系列性質(zhì),能夠?qū)⑺幬镙斔偷街袠猩窠?jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)治療一系列腦部疾病。大腦中動脈缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型是研究腦缺血病理學的常見動物模型。本課題通過將具有治療腦缺血作用的胡椒堿包裹在脂質(zhì)體內(nèi),選取多肽RDP作為配體靶向腦組織,制備了具有腦靶向作用的長循環(huán)胡椒堿脂質(zhì)體,并檢測了普通胡椒堿脂質(zhì)體和RDP介導的胡椒堿脂質(zhì)體的粒徑大小及Zeta電勢、包封率(encapsulation efficiency,EE%)和穩(wěn)定性等基本理化性質(zhì)。通過實驗結(jié)果可知,RDP修飾后的胡椒堿脂質(zhì)體(RDP-Piperine-Liposomes,RDP-PIP-L)平均粒徑為(115.39±4.29)nm,包封率為(81.84±1.84)%,普通胡椒堿脂質(zhì)體(Piperine-Liposomes,PIP-L)平均粒徑(87.05±1.76)nm,包封率為(81.17±0.46)%,且重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好。體外釋放實驗考察了PIP-L和RDP-PIP-L的釋藥情況,通過實驗結(jié)果可知,RDP-PIP-L相比PIP-L具有更好的緩釋作用。采用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),向SD大鼠尾靜脈注射PIP-L、RDP-PIP-L,于0.25、0.5、1、2、4、6、10、12、24h分別取出大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦,檢測胡椒堿在六個組織中的分布,通過實驗結(jié)果可知,PIP-L和RDP-PIP-L在各組織臟器中的分布具有明顯的差異,同時,RDP-PIP-L表現(xiàn)出優(yōu)異的靶向腦組織的能力。使用RDP介導的胡椒堿脂質(zhì)體治療雄性SD大鼠的腦缺血,術后1小時給藥,給藥量30 mg/kg,每日2次,連續(xù)2天,尾靜脈注射。觀察到模型組SD大鼠腦缺血平均體積為48.57%,PIP-L組SD大鼠腦缺血平均體積為39.42%,RDP-PIP-L組SD大鼠腦缺血平均體積為16.17%。結(jié)果表明,RDP-PIP-L與PIP-L相比能夠有效減少腦缺血體積,表現(xiàn)出明顯的治療作用。從結(jié)果來看,發(fā)現(xiàn)RDP介導的胡椒堿脂質(zhì)體更有利于減輕MCAO大鼠腦缺血癥狀,顯著提高了腦缺血大鼠的認知能力,減小了大腦梗死體積和含水量,降低了丙二醛濃度,通過上調(diào)谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶水平,以及抑制缺血大腦中活性氧的產(chǎn)生,提高了抗氧化能力。總之,本課題研究了RDP介導的胡椒堿脂質(zhì)體對大鼠腦缺血的神經(jīng)保護作用和潛在機制。胡椒已被確定為具有神經(jīng)保護功能的天然藥物。因此,該課題可能為胡椒堿的新劑型治療缺血性腦損傷提供新的見解。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R283.6;R285.5
【圖文】：

第 2 章 胡椒堿體外含量的測定及包封率方法的建立2.3.2 標準曲線的繪制將一系列濃度為 0.5、1、10、20、50、80、100 μg/mL 胡椒堿標準溶液，H法進樣測定，如表 2-1 與如圖 2-2，橫坐標為胡椒堿濃度（c），縱坐標為峰面積（A 對 c 模擬線性方程，得：y = 76627x  56842，R2= 0.9969，P<0.0001；結(jié)果顯表 2-1Tab 2-1 Result of determination piperine standard curvec/(μg/mL) 0.5 1 10 20 50 80 100A 36812 66178 680468 1413267 3592117 6404377 7446853

西南大學碩士學位論結(jié)果堿脂質(zhì)體制備方法考察結(jié)果E%為指標，考察薄膜水化法、乙醇注入法、凍融法三種制備封率，結(jié)果如表 3-1，圖 3-1 所示表 3-1 胡椒堿脂質(zhì)體三種制備方法包封率的實驗結(jié)果(n=3)Tab 3-1 The EE% of piperine liposome in three methods（n=3）乙醇注入法 薄膜水化法 凍融法 37.41±1.05 68.06±1.55 41.372.81 2.28 4

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本文編號：2734680