【摘要】：研究背景:視神經(jīng)損傷是一類以視網(wǎng)膜節(jié)細胞(retinal ganglion cells,RGCs)進行性凋亡及視神經(jīng)萎縮為主要病理特征并最終致盲的眼部疾病。目前,臨床最常用的糖皮質(zhì)激素、神經(jīng)節(jié)苷脂、維生素E等對視神經(jīng)損傷有良好的療效,但也伴有不同程度并發(fā)癥和毒副作用,且療效尚有待提高。近年來有報道稱某些中藥或其提取物具有改善眼部血流,延長神經(jīng)元存活時間,促進軸突生長等作用,療效可能優(yōu)于傳統(tǒng)的視神經(jīng)損傷治療藥,3,4-二羥基苯甲酸甲酯(methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)就是其中之一。MDHB是從植物馬蘭、白花蛇舌草中提取的單體。前期實驗表明MDHB能在體外對抗β淀粉樣蛋白(Aβ)的神經(jīng)毒性,保護皮質(zhì)神經(jīng)元;能通過抗氧化、抗凋亡,提高線粒體膜電位對小鼠視網(wǎng)膜節(jié)細胞株(RGC-5細胞株)產(chǎn)生保護作用。目前尚無MDHB在體內(nèi)對RGCs具有保護作用的研究報道。目的:研究MDHB對N-甲基-D天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)誘導(dǎo)的大鼠RGCs是否具有保護作用并探討其機制。方法:采用成年SD大鼠,實驗分為6組:空白對照組、模型對照組、陽性藥對照組(美金剛,10mg/kg)、MDHB低劑量組(25mg/kg)、MDHB中劑量組(50mg/kg)、MDHB高劑量組(100mg/kg)。在水合氯醛麻醉下大鼠玻璃體后注射NMDA以造成RGCs損傷模型,同時,除空白對照組和模型對照組腹腔注射生理鹽水外,其余各組分別腹腔注射相應(yīng)的藥物,連續(xù)5天。用黑白箱檢測大鼠視覺行為變化,采用視網(wǎng)膜電圖(ERG)記錄大鼠視覺電生理變化,使用節(jié)細胞特異性抗體Brn-3a標(biāo)記節(jié)細胞(免疫組化法)測定節(jié)細胞密度,通過Western-blot檢測凋亡通路相關(guān)蛋白如Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3和激活細胞或促進細胞存活的Akt、BDNF表達情況。并實驗觀察MDHB腹腔注射能否透過血眼屏障(blood ocular barrier,BOB)。結(jié)果:1.MDHB能夠迅速透過血眼屏障到達視網(wǎng)膜,腹腔注射2min后通過HPLC即可在視網(wǎng)膜檢測到藥物。2.黑白箱測試結(jié)果表明,與模型組比較,MDHB低劑量(25mg/kg)組、中劑量(50mg/kg)組均能夠改善大鼠視覺行為能力(P0.01);HE染色與免疫組化結(jié)果顯示MDHB中劑量(50mg/kg)組能夠維持存活RGCs的密度(P0.05);ERG實驗結(jié)果顯示MDHB可以增加RGCs對光反應(yīng)的強度(P0.05)。3.Western blot結(jié)果顯示,與模型組比較,MDHB中劑量(50mg/kg)、MDHB高劑量(100mg/kg)組Bax/Bcl-2、Celaved caspase-3/Caspase-3比值減少(P0.05)、p-Akt/Akt比值增大(P0.05)。結(jié)論:MDHB能夠緩解NMDA所致的視網(wǎng)膜節(jié)細胞損傷,改善實驗動物的視覺行為,其機制可能與MDHB的抗凋亡和神經(jīng)營養(yǎng)作用有關(guān)。MDHB有可能成為新型的視神經(jīng)損傷治療藥。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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4 孫t煷

本文編號：2733611