【摘要】：本課題旨在藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上,采用RP-HPLC法同時(shí)測定指標(biāo)性成分鹽酸青藤堿與鹽酸川芎嗪的血藥濃度,研究CQ復(fù)方主要成分鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪的藥代動(dòng)力學(xué)特征;并通過考察CQ復(fù)方在正常大鼠及骨癌痛模型大鼠血漿中的藥代動(dòng)力學(xué)過程,比較正常和疼痛病理狀態(tài)下的藥代動(dòng)力學(xué)特征差異,為臨床應(yīng)用CQ復(fù)方治療癌痛提供更多有價(jià)值的借鑒信息;明確CQ復(fù)方中主要成分鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪的體內(nèi)相互作用關(guān)系,為揭示CQ復(fù)方作用機(jī)制和臨床給藥方案提供依據(jù)。建立鹽酸青藤堿與鹽酸川芎嗪在大鼠血漿中含量測定的RP-HPLC分析方法。本實(shí)驗(yàn)選用內(nèi)標(biāo)法,以茶堿作為內(nèi)標(biāo)。色譜條件為:色譜柱Extend-C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm,Agilent,USA)。流動(dòng)相:A:B為PBS緩沖液(0.1%三乙胺調(diào)pH9.4~9.5):甲醇;梯度洗脫(0min,40%B;4min,45%B;12min,55%B;15min,40%B);流速0.8mL·min~(-1);柱溫30℃;265nm、280nm紫外雙波長檢測。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,該方法精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和回收率等均符合相關(guān)規(guī)定。血漿中鹽酸青藤堿在0.05~10μg·mL~(-1)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,線性回歸方程為y=0.2914x-0.0099(R~2=0.9978),取(10μg·mL~(-1)、1.25μg·mL~(-1)、0.625μg·mL~(-1))三個(gè)濃度測提取回收率為100.08%、99.51%、104.94%,日內(nèi)精密度為3.25%、3.59%、3.92%,日間精密度分別為3.98%、6.74%、5.72%,室內(nèi)8h穩(wěn)定性分別為9.98%、7.72%、4.46%;鹽酸川芎嗪在0.025~10μg·mL~(-1)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,線性回歸方程為y=0.8615x+0.169(R~2=0.9985),取(10μg·mL~(-1)、1.25μg·mL~(-1)、0.625μg·mL~(-1))三個(gè)濃度測提取回收率為99.67%、100.43%、97.85%,日內(nèi)精密度為3.66%、3.83%、6.49%,日間精密度分別為4.13%、5.08%、5.23%,室溫8h穩(wěn)定性分別為10.27%、7.27%、5.01%。本文建立的RP-HPLC方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確,適用于鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪在生理和病理狀態(tài)下大鼠體內(nèi)血漿藥物濃度測定和藥代動(dòng)力學(xué)的研究。建立骨癌痛大鼠模型。將適應(yīng)性刺激篩選合格的大鼠分為假手術(shù)組和模型組,取5uL 4.7*10~4個(gè)/uL的Walker 256腹水癌細(xì)胞注入大鼠脛骨骨髓腔內(nèi),Von Frey hairs評價(jià)大鼠機(jī)械痛閾值。成模大鼠腹腔注射CQ復(fù)方高劑量(40mg·kg~(-1)),記錄給藥前后0min、30min、60min、90min、120min、180min、240min、360min時(shí)間點(diǎn)的機(jī)械痛閾值,評價(jià)CQ復(fù)方在大鼠體內(nèi)藥效學(xué)行為。造模后第9~11天刺激大鼠患側(cè)足肢評價(jià)機(jī)械痛閾值,連續(xù)三天機(jī)械痛閾值≤8g視為造模成功。骨癌痛模型大鼠機(jī)械痛閾值由術(shù)前(22.85±5.36)g降至術(shù)后(6.57±2.22)g,術(shù)后9~12天維持在(6.57±2.22)g~(6.85±1.57)g,假手術(shù)組手術(shù)前后無明顯變化;給藥后30min模型組大鼠機(jī)械痛閾值顯著上升,在30min~180min鎮(zhèn)痛作用顯著。結(jié)果表明,CQ復(fù)方對骨癌痛具有干預(yù)作用,給藥后骨癌痛大鼠藥效學(xué)行為與體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)具有相似性。因此,本文對CQ復(fù)方在正常和骨癌痛模型大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行探討,并分析CQ復(fù)方主要成分鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪配伍的合理性及可能原因,了解血藥濃度-時(shí)間變化規(guī)律,為揭示CQ復(fù)方作用機(jī)制和臨床用藥方案提供依據(jù)。以建立的RP-HPLC法為基礎(chǔ),比較CQ復(fù)方在正常大鼠及骨癌痛大鼠模型血漿中藥代動(dòng)力學(xué)特征的差異,為其配伍合理性提供依據(jù)。正常大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)后水合氯醛麻醉,頸靜脈、股靜脈插入采血管,術(shù)后穿好馬甲固定,禁食12h,第二天清晨通過股靜脈管按體重給藥CQ復(fù)方高劑量組(40mg·kg~(-1))、CQ復(fù)方中劑量組(20mg·kg~(-1))、CQ復(fù)方低劑量組(10mg·kg~(-1)),鹽酸青藤堿組(40mg·kg~(-1))和鹽酸川芎嗪組(40mg·kg~(-1)),給藥體積1mg·mL~(-1);骨癌痛模型大鼠按造模方法造模成功后,頸靜脈插管,術(shù)后馬甲固定,于第二天清晨腹腔注射給藥,給藥體積1mg·mL~(-1)。應(yīng)用全自動(dòng)采血儀在動(dòng)物清醒狀態(tài)下0min、5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min、720min、1440min時(shí)間點(diǎn)內(nèi)完成連續(xù)取血。給藥CQ復(fù)方高劑量(40mg·kg~(-1)),與正常大鼠相比,模型組大鼠血漿中CQ復(fù)方內(nèi)鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪的血漿濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC_((0-t)))均顯著上升,分別為(1320.462±354.313~1843.749±545.568)、(3811.300±2889.793~8406.780±2995.543);達(dá)峰濃度(C_(max))顯著升高,分別為(10.278±2.655~11.822±2.293)、(22.481±1.253~36.570±4.039),血漿清除率(CL_z/F)下降(0.031±0.009~0.023±0.006)、(0.014±0.006~0.005±0.002),說明CQ復(fù)方在骨癌痛病理?xiàng)l件下吸收程度加快,體內(nèi)清除率降低,血漿藥物達(dá)峰濃度升高。CQ復(fù)方在骨癌痛大鼠和正常大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)方面具有一定差異,骨癌痛病理?xiàng)l件可能改變其在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程。給藥CQ復(fù)方不同劑量和鹽酸青藤堿、鹽酸川芎嗪,觀察CQ復(fù)方在正常大鼠體內(nèi)的代謝情況,探究CQ復(fù)方配伍依據(jù)。結(jié)果表明,鹽酸青藤堿在CQ復(fù)方高中低劑量下各時(shí)間點(diǎn)的AUC_((0-t))分別為(1320.462±354.313)、(1460.592±815.747)、(55.036±92.344),C_(max)分別為(10.278±2.655)、(7.609±5.654)、(1.884±0.492);鹽酸川芎嗪在CQ復(fù)方高中低劑量下各時(shí)間點(diǎn)的AUC_((0-t))分別為(3811.300±2889.793)、(3911.579±776.192)、(83.248±713.548),C_(max)分別為(22.481±1.253)、(11.395±1.544)、(5.091±1.182),說明CQ復(fù)方的血藥濃度呈劑量依賴性,隨給藥劑量的減少和時(shí)間的延長而下降。比較鹽酸青藤堿單獨(dú)給藥和同劑量下CQ復(fù)方給藥,鹽酸青藤堿組和CQ復(fù)方高劑量組內(nèi)鹽酸青藤堿的體內(nèi)滯留時(shí)間(MRT_((0-t)))分別為(109.782±24.886)、(264.480±104.511),體內(nèi)半衰期(t_(1/2z))分別為(84.103±28.204)、(212.037±49.991),表觀分布容積(V_z/F)分別為(3.950±1.173)、(9.164±2.341),達(dá)峰時(shí)間(T_(max))分別為(5±0)、(9±5.477),說明鹽酸川芎嗪和鹽酸青藤堿配伍能延長鹽酸青藤堿在體內(nèi)的滯留時(shí)間,增大表觀容積分布,使其能迅速分布在體內(nèi),減少暴露量,延長鹽酸青藤堿的半衰期和其在體內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間;兩個(gè)給藥組內(nèi)鹽酸青藤堿的C_(max)分別為(13.071±1.091)、(10.278±2.655),AUC_((0-t))分別為(1207.511±170.577)、(1320.462±354.313),CL_z/F分別為(0.034±0.005)、(0.031±0.009),鹽酸川芎嗪在延長鹽酸青藤堿在體內(nèi)的滯留時(shí)間,且對吸收程度和清除率不產(chǎn)生太大影響。比較鹽酸川芎嗪單獨(dú)給藥和同劑量下CQ復(fù)方給藥,鹽酸川芎嗪組和CQ復(fù)方高劑量組內(nèi)鹽酸川芎嗪的AUC_((0-t))分別為(2100.059±313.204)、(3811.300±2889.793),C_(max)分別為(10.053±1.396)、(22.481±1.253),T_(max)分別為(12±10.954)、(9±5.477),MRT_((0-t))分別為(191.250±48.867)、(111.248±133.563),說明鹽酸青藤堿配伍鹽酸川芎嗪能增強(qiáng)鹽酸川芎嗪在體內(nèi)的吸收,增加達(dá)峰濃度、縮短達(dá)峰時(shí)間,而對其體內(nèi)滯留時(shí)間無影響。V_z/F分別為(3.264±1.440)、(1.556±0.468),CL_z/F分別為(0.019±0.003)、(0.014±0.006),說明鹽酸青藤堿能在不影響體內(nèi)滯留時(shí)間的情況下降低鹽酸川芎嗪的表觀容積分布和血漿清除率,減緩其擴(kuò)散的時(shí)長和被清除的速率,使其作用更長效、持久。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CQ復(fù)方在體內(nèi)代謝過程復(fù)雜,若要反映藥物的真實(shí)代謝情況,則不能只考察其在正常大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程,因此本文分別研究了CQ復(fù)方在正常和骨癌痛模型大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征,及復(fù)方配伍的合理性,為指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

10圖 1-1 HPLC 圖譜 A：空白血漿 B：空白血漿加內(nèi)標(biāo) C：空白血漿加內(nèi)標(biāo)加鹽酸青藤堿D：空白血漿加內(nèi)標(biāo)加鹽酸川芎嗪 E：QC 樣品Fig. 1-1 HPLC Chromatograms A:blank plamsa B: Blank plasma plus internal standard C:The blank plasma plus internal standard and the Sinomenine HCLD: Blank plasma plus internal standard and the Ligustrazine HCL E: QC sample1.2.6 線性范圍按照 1.2.2 方法，配制系列 QC 樣品，使血漿中鹽酸青藤堿和鹽酸川芎嗪分別為 10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125，0.15625，0.075，0.05，0.025μg·mL-1，

進(jìn)行 HPLC 分析，并根據(jù)分析結(jié)果建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。鹽酸青藤堿線性關(guān)系：以鹽酸青藤堿血漿中濃度為橫坐標(biāo)，對照品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，做回歸方程，見圖 1-2。結(jié)果顯示，鹽酸青藤堿在 0.05~10μg·mL-1濃度范圍內(nèi),線性關(guān)系良好，y=0.2914x-0.0099（R2=0.9978），最低定量限為 0.05μg·mL-1。川芎嗪線性關(guān)系：以鹽酸川芎嗪血漿中濃度為橫坐標(biāo)，鹽酸川芎嗪峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，做回歸方程，見圖 1-3。結(jié)果顯示，鹽酸川芎嗪在0.025~10μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，y=0.8615x+0.169（R2=0.9985），最低定量限為 0.025μg·mL-1。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2730617