發(fā)布時(shí)間：2020-06-25 02:48

【摘要】：陽(yáng)荷系姜科姜屬多年生草本植物Zingiber striolatum Diels,因其食藥同源,可直接烹飪食用,含有豐富的膳食纖維、蛋白質(zhì)、必須氨基酸等,越來(lái)越多學(xué)者開(kāi)始研究陽(yáng)荷,研究發(fā)現(xiàn)陽(yáng)荷具有降血糖、抑菌、治療痛經(jīng)等作用,但是相關(guān)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)理目前尚不明確。目前陽(yáng)荷的應(yīng)用領(lǐng)域還相對(duì)較窄,尤其是對(duì)其生物活性方面的研究和應(yīng)用。為了更好的利用陽(yáng)荷的天然資源,本研究以陽(yáng)荷為原料,優(yōu)化了陽(yáng)荷乙醇提取物、揮發(fā)性成分的提取工藝,分析了陽(yáng)荷揮發(fā)性成分的化學(xué)組成,對(duì)陽(yáng)荷的乙酸乙酯萃取物進(jìn)行了簡(jiǎn)單的分離純化,對(duì)陽(yáng)荷乙醇提取物及各極性部位的體外抗糖尿病活性進(jìn)行了篩選,并初步探討了陽(yáng)荷乙醇提取物及各極性部位對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型糖代謝的作用機(jī)制,最后研究了陽(yáng)荷乙醇提取物及各極性部位的體外抑菌活性。(1)采用正交實(shí)驗(yàn)法,以總黃酮的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),以乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間為考察因素,考察因素對(duì)陽(yáng)荷總黃酮含量的影響,綜合考慮確定了陽(yáng)荷乙醇提取物制備的最佳制備工藝為70%乙醇,料液比1:12,回流提取2 h。(2)對(duì)陽(yáng)荷揮發(fā)性成分的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化并鑒定陽(yáng)荷揮發(fā)性成分的化學(xué)組成,為陽(yáng)荷的開(kāi)發(fā)利用提試驗(yàn)依據(jù)。采用單因素試驗(yàn)、多因素多水平正交試驗(yàn)方法和超聲輔助蒸餾法提取法提取陽(yáng)荷揮發(fā)性成分,以陽(yáng)荷揮發(fā)性成分提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo),分別研究超聲時(shí)間、蒸餾時(shí)間和料液比對(duì)陽(yáng)荷揮發(fā)性成分提取率的影響,以氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectormetry,GC-MS)結(jié)合NIST4.0質(zhì)譜庫(kù)分析揮發(fā)性成分的化學(xué)組成及種類(lèi),用峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含量。陽(yáng)荷揮發(fā)性成分的最佳提取工藝是超聲60 min、蒸餾時(shí)間4 h,料液比1:3 g/ml,提取率達(dá)到0.0368%;鑒定出17個(gè)主要化學(xué)成分,占揮發(fā)性成分總量的85.074%,其中烯烴類(lèi)有8種,含量最高的3個(gè)成分是棕櫚酸(30.508%),β-水芹烯(12.359%)和芥酸酰胺(7.376%)。(3)陽(yáng)荷洗凈烘干,打粉過(guò)60目篩,得到陽(yáng)荷粉末。70%乙醇,料液比1:12,回流提取2h,得到陽(yáng)荷乙醇提取物(E001),依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取E001,得到石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶物(F004)。用硅膠柱層析結(jié)合薄層色譜法分離純化F002,首次自陽(yáng)荷中分離鑒定得到主要化學(xué)成分胸腺嘧啶核苷。(4)以高濃度葡萄糖培養(yǎng)基為誘導(dǎo)因素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗細(xì)胞模型,通過(guò)葡萄糖氧化酶法檢測(cè)陽(yáng)荷乙醇提取物及各極性部位對(duì)胰島素抵抗細(xì)胞模型的葡萄糖消耗量,四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明陽(yáng)荷乙醇提取物具有明顯的降糖活性,用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)分析胰島素信號(hào)通路的蛋白表達(dá)的影響:與空白對(duì)照組相比,當(dāng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中葡萄糖濃度為40 mmol/L時(shí)吸光度的差值最大,所以選40 mmol/L的葡萄糖培養(yǎng)基來(lái)建立胰島素抵抗細(xì)胞模型;陽(yáng)荷乙醇提取物葡萄糖消耗量明顯高于其他極性部位和空白對(duì)照組,但低于陽(yáng)性對(duì)照組;細(xì)胞存活率基本上可以保持在85%左右,細(xì)胞毒性較小;陽(yáng)荷乙醇提取物對(duì)IRS-1、IRβ、P-IRS-1和GLUT2蛋白的表達(dá)水平具有一定的增強(qiáng)效果。(5)用濾紙片對(duì)乙醇提取物及不同極性萃取物進(jìn)行抑菌活性測(cè)定,有抑菌活性的部位進(jìn)一步測(cè)定其最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示E001、F001、F002、F003、F004對(duì)金黃色葡萄球菌效果明顯,MIC值在3.125~25 mg/mL之間,MBC值為25 mg/mL,其中石油醚萃取物和乙酸乙酯對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性最優(yōu);陽(yáng)荷乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)枯草芽孢桿菌有較強(qiáng)的抑菌效果,MIC值在3.125~25 mg/mL之間,MBC值為25 mg/mL,其中乙酸乙酯萃取物對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌活性最優(yōu);陽(yáng)荷乙醇提取物和石油醚萃取物對(duì)大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌均有抑菌效果,石油醚萃取物抑菌活性較優(yōu);陽(yáng)荷乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物對(duì)蘇云金芽孢桿菌沒(méi)有抑菌作用。
【學(xué)位授予單位】：武漢工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R284
【圖文】：

圖 2-1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig. 2-1 Rutin standard curve.2.2.4 單因素實(shí)驗(yàn).2.2.4.1 乙醇濃度對(duì)陽(yáng)荷提取物總黃酮含量的考察[40]

圖 2-3 料液比對(duì)陽(yáng)荷乙醇提取物總黃酮含量的影響ect of the liquid ratio on the Zingiber striolatum Diels' total f時(shí)間對(duì)陽(yáng)荷提取物總黃酮含量的影響示，提取時(shí)間的增加影響著陽(yáng)荷乙醇提取

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本文編號(hào)：2728748