【摘要】：目的:探索巖白菜素對間充質干細胞成骨分化的影響方法:取人間充質干細胞,分為培養(yǎng)液中加入巖白菜素組和不加入巖白菜素組。均進行成骨誘導分化和成脂誘導分化。用染色及檢測成骨和成脂特異性標志物的方法來判斷巖白菜素在體內對間充質干細胞的成骨分化及成脂分化的影響。取健康雄性SD大鼠12只。將大鼠隨機分成兩組:實驗組(n=6)和對照組(假手術組n=6)。使用環(huán)鉆在頂骨中產生4mm的臨界尺寸缺陷。實驗組用50mg/kg體重的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中的巖白菜素進行腹膜內注射,假手術組每周用等量的PBS治療。手術后8周將大鼠在CO2室中處死。收集顱骨用于放射照相和組織學分析,并評估血清的ALP活性。結果:在使用1-100 μM巖白菜素進行預處理后,與對照組相比,實驗組的BMSC中第3天和第5天成骨特異性標志ALP,RUNX2,COL1A1和SIRT1 mRNA水平顯著增加(P0.05)。western blot顯示實驗組的BMSC中第3天和第5天RUNX2,COL1A1和SIRT1的表達水平顯著增加,成脂特異性標記物PPARγ蛋白表達減少(P0.05)。茜素紅μ染色顯示1-100-M巖白菜素處理組中的鈣沉積顯著增加。油紅染色發(fā)現巖白菜素處理組中的脂肪滴顯著減少使用顯微CT分析表明,與手術后8周的假手術組相比,使用巖白菜Bergenin組大鼠的顱骨缺損模型骨形成增加。另外,在Bergenin組的血清中檢測到更高水平的ALP活性。結論:實驗結果提示巖白菜素可以促進骨髓間充質干細胞BMSC的成骨分化并抑制其成脂分化。對大鼠骨缺損的修復有著顯著的促進作用。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

來測定巖白菜素對ＢＭＳＣ增殖的影響。對增值的作用抑制越明顯，說明藥物的細胞逡逑毒作用越強。在使用和不使用巖白菜素預處理的組間沒有觀察到明顯的細胞毒性逡逑作用，表明巖白菜素對ＢＭＳＣ的生長沒有不良影響（圖１）。逡逑ＣＣＫ８逡逑，５．邐州逡逑Ｔ邐□邋０逡逑＾邐□邋０．００１逡逑細邋１＿。－邐ｆ１！邋Ｉ邐□邐００１逡逑ｉ邋ｌｌｌｌｉｉ邋ＩＩｐｉｉ逡逑ＩＳＩ＿邋■■＝二逡逑■邋＿邐■邋■邐□邐１０００逡逑ｏ．ｏ－Ｊ————ＬｂＨ＿ｉＭＬ＿逡逑２４邋ｈ邐７２ｈ逡逑時間逡逑圖１巖白菜素對人骨髓間充質干細胞（ＢＭＳＣｓ）細胞活性的影響逡逑如圖１，使用ＣＣＫ－８檢測巖白菜素對ＢＭＳＣ增殖的影響。實驗重復３次進行，數據用逡逑平均值土標準差表示。加入巖白菜素組的結果與不加入巖白菜素組的結果相比沒逡逑有明顯的細胞毒作用，Ｐ邋＜０．０５。逡逑３．２邐Ｂｅｒｇｅｎｉｎ上調骨特異性標志物的水平逡逑ＡＬＰ活性是ＢＭＳＣ成骨分化的重要標志。在分別使用濃度０．１，１，１０，１００邋ｙＭ的巖逡逑白菜素進行預處理后，檢測培養(yǎng)基中ＡＬＰ活性。與對照俎相比（空白對照和陰性對逡逑８逡逑

逑照），實驗組的ＡＬＰ活性在第３天和第５天增加，說明加入巖白菜素后成骨作用得到逡逑了增強（圖２Ａ）。逡逑為了評估巖白菜素在ＢＭＳＣ成骨分化中的作用，我們使用了定量ＰＣＲ邋（ｑＰＣＲ）逡逑及蛋白免疫印跡（ＷＢ）的方法檢測巖白菜素對成骨特異性基因（包括ＡＬＰ，邋ＲＵＮＸ２逡逑和Ｃ０Ｌ１Ａ１）和蛋白表達的是否有促進作用。ｑＰＣＲ分析顯示，與在培養(yǎng)基中不加逡逑入巖白菜素組相比，加入巖白菜素組（濃度為０．０１，０．１，１，１０，１００）的ＢＭＳＣ在第３天逡逑和第５天時，ＡＬＰ，邋ＲＵＮＸ２和ＣＯＬ１Ａ１的ｍＲＮＡ水平顯著增加，說明巖白菜素促進逡逑了邋ＢＭＳＣ的成骨分化（Ｐ邋＜０．０５；圖２Ｂ）。逡逑蛋白免疫印跡法分析顯示，在成骨誘導分化第３天時，與對照組相比，使用濃逡逑度為１０－１００ＨＭ的Ｂｅｒｇｅｎｉｎ處理組可以檢測到ＲＵＮＸ２表達量的明顯增加。此外，在逡逑將ＢＭＳＣ成骨誘導第５時

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本文編號：2726300