【摘要】：目的:探討艾片(左旋龍腦)、天然冰片(右旋龍腦)、冰片(合成龍腦)、蘇合香、安息香五味開竅藥的神經(jīng)血管單元(NVU)保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制,以闡釋開竅藥開竅醒神功效的科學(xué)內(nèi)涵;同時(shí)比較五味開竅藥的藥效強(qiáng)弱,為臨床組方選藥提供參考。方法:(1)采用線栓法制備永久性大腦中動(dòng)脈栓塞(pMCAO)大鼠模型,記錄各組大鼠從麻醉到蘇醒的時(shí)間,并參照Longa評(píng)分法對(duì)大鼠神經(jīng)功能損傷進(jìn)行評(píng)分。(2)采用干濕重法測定pMCAO模型大鼠腦含水量、腦指數(shù)及腦水腫率。(3)采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法對(duì)pMCAO模型大鼠腦組織進(jìn)行染色觀察腦組織梗死情況,并測計(jì)算腦梗死率。(4)采用蘇木精-伊紅(HE)染色法觀察pMCAO模型大鼠缺血半暗帶腦組織細(xì)胞形態(tài),并計(jì)算神經(jīng)元變性細(xì)胞指數(shù)(DCI)。(5)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定pMCAO模型大鼠血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量。(6)采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR(RT-PCR)法、免疫印跡法(WB)法、免疫組織化學(xué)法測定pMCAO大鼠模型缺血半暗帶腦組織中Wnt3a、β連環(huán)蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、大腸腺瘤樣息肉蛋白(APC)、緊密連接蛋白5(Claudin-5)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表達(dá)。(7)采用透射電鏡觀察pMCAO大鼠缺血半暗帶腦組織中神經(jīng)元以及血腦屏障超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:(1)三種冰片能顯著延長模型大鼠麻醉后蘇醒時(shí)間(P0.01),蘇合香與安息香對(duì)蘇醒時(shí)間無明顯影響;艾片與安息香能顯著降低模型大鼠術(shù)后24 h的神經(jīng)行為評(píng)分(P0.05),天然冰片與冰片有降低行為評(píng)分的趨勢。(2)艾片、冰片、蘇合香、安息香能顯著降低模型大鼠缺血側(cè)腦含水量、Δ含水量、Δ腦指數(shù)(P0.01);艾片、冰片、安息香能顯著降低模型大鼠腦水腫率(P0.01)。(3)TTC染色結(jié)果顯示,造模后腦組織可見明顯的蒼白梗死區(qū),開竅藥對(duì)腦梗死有不同程度的改善作用,艾片、冰片、蘇合香、安息香能顯著降低模型大鼠腦梗死率(P0.01)。(4)HE染色結(jié)果顯示,造模后大鼠缺血半暗帶腦組織出現(xiàn)明顯病理學(xué)變化,表現(xiàn)為神經(jīng)組織壞死、液化,形成篩網(wǎng)狀病灶,與周圍組織有較明顯分界,五味開竅藥可不同程度改善腦組織病理學(xué)變化。艾片、冰片、蘇合香、安息香可顯著降低模型大鼠缺血腦組織神經(jīng)細(xì)胞DCI(P0.01)。(5)五味開竅藥均能顯著升高模型大鼠血清中VEGF的含量,顯著降低模型大鼠血清中TNF-α的含量(P0.05或P0.01),對(duì)NGF及IL-1β無明顯影響。(6)總體來看,開竅藥有升高pMCAO模型大鼠缺血半暗帶腦組織中Wnt3a蛋白、β-catenin mRNA、Dsh1 mRNA、GSK-3βmRNA與蛋白、Claudin5 mRNA與蛋白、Bax mRNA與蛋白、Bcl-2 mRNA與蛋白表達(dá)的作用趨勢,有降低Wnt3a mRNA、β-catenin蛋白、LEF1 mRNA、APC mRNA與蛋白、Caspase-3 mRNA與蛋白表達(dá)以及Bax與Bcl-2表達(dá)比值的作用趨勢。(7)透射電鏡結(jié)果顯示,模型組大鼠缺血半暗帶腦組織神經(jīng)元的細(xì)胞核溶解、雙層核膜結(jié)構(gòu)不連貫、細(xì)胞漿內(nèi)細(xì)胞器溶解消失,胞漿呈空泡狀,毛細(xì)血管壁層次增厚,內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜和膠質(zhì)細(xì)胞之間的突起之間的間隙增寬,而五味開竅藥能不同程度改善模型大鼠腦組織神經(jīng)元和BBB的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)論:五味開竅藥有促進(jìn)pMCAO模型大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)、降低腦含水量及腦梗死率、減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用,可能是開竅藥發(fā)揮“開竅醒神”功效的主要藥效學(xué)基礎(chǔ)。五味開竅藥的藥效作用強(qiáng)弱依次為艾片冰片安息香蘇合香天然冰片,提示臨床在選用開竅藥組方治療腦缺血相關(guān)疾病時(shí)首推艾片。開竅藥通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)微血管新生以及保護(hù)BBB而保護(hù)神經(jīng)血管單元,這可能是其綜合表達(dá)“開竅醒神”的主要生物學(xué)機(jī)制。五味開竅藥的NVU保護(hù)機(jī)制聚類不同可能與開竅藥的寒熱藥性差異有關(guān)。冰片、天然冰片的抑制細(xì)胞凋亡可能與其寒涼藥性有關(guān),而蘇合香與安息香的促微血管新生及保護(hù)BBB可能與其溫?zé)崴幮杂嘘P(guān)。本研究以NVU為切入點(diǎn)探討開竅藥的腦保護(hù)作用及機(jī)制,研究思路具有中醫(yī)藥整體觀特色,研究借助了RT-PCR、免疫印跡及免疫組化等分子生物學(xué)手段,并結(jié)合了透射電鏡等光學(xué)成像技術(shù),研究手段具有集成創(chuàng)新,研究結(jié)果提示艾片改善腦缺血藥效最優(yōu),為臨床有效合理使用開竅藥提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【圖文】：

Wnt/β-catenin信號(hào)通路示意

吐溫+模型組給予同體積 5 %吐溫 80 溶液，吐溫+CMC+模型組給予同體積 5 %吐溫 80+0.2 %羧甲基纖維素鈉溶液，其余各給藥組給予同體積相應(yīng)藥液（給藥劑量見表1），連續(xù)灌胃 3 d。末次給藥 30 min 后，對(duì)大鼠進(jìn)行 pMCAO 手術(shù)，具體方法參照 Zea Longa方法[12]加以改進(jìn)：大鼠稱重后，按體重采用 10 %水合氯醛(0.3 mL／100g)腹腔注射進(jìn)行麻醉，大鼠翻正反射消失后將其仰臥于手術(shù)臺(tái)，四肢固定。從大鼠頸部正中切開，依次分離左側(cè)頸總動(dòng)脈（Common carotid artery， CCA）、頸外動(dòng)脈（External carotid artery，ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（Internal carotid artery， ICA）。然后將 CCA 近心端和 ECA 遠(yuǎn)心端用手術(shù)線結(jié)扎。在 ICA 近心端準(zhǔn)備手術(shù)線，遠(yuǎn)心端用動(dòng)脈夾夾閉血管，CCA 切口，插入直徑為 0.286mm 的魚線，松開動(dòng)脈夾，魚線向 ICA 插入 18~20mm 進(jìn)入 ICA，穿過大腦中動(dòng)脈（Middle cerebral artery，MCA）起始端至大腦前動(dòng)脈（Anterior cerebral artery，ACA）近端。固定魚線并記錄時(shí)間，該時(shí)間為大腦局灶性缺血開始的時(shí)間。逐層縫合切口，碘伏消毒，回籠飼養(yǎng)并觀察。假手術(shù)組僅將大鼠皮膚切開并進(jìn)行血管剝離，但不插入魚線，其余操作同其它組。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭虎占;;中藥合理應(yīng)用 第16講 開竅藥的合理應(yīng)用[J];中國臨床醫(yī)生;2009年09期

2 宋曉靜;;論中藥開竅藥的臨床應(yīng)用及藥理作用[J];中外醫(yī)療;2009年17期

3 沈慶法;;中藥的臨床選用 第十五講 開竅藥的選用[J];中國農(nóng)村醫(yī)學(xué);1990年09期

4 張如賓;劉永鳳;;試探開竅藥在眼科臨床的運(yùn)用[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1985年04期

5 張如賓;;開竅藥臨床應(yīng)用初探[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1983年03期

6 高巖;開竅藥的臨床應(yīng)用[J];中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

7 蘇明廉;;第八講 開竅藥、平肝藥、安神藥問答[J];山東中醫(yī)雜志;1983年02期

8 劉煜德;黃小洵;孫丹邈;;開竅藥對(duì)血腦屏障作用研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2007年06期

9 鐘贛生;常用中藥功用鑒別 安神藥與開竅藥[J];中國臨床醫(yī)生;2000年03期

10 王南卜;張芹欣;寧百樂;羅來育;方永奇;;4種開竅藥促進(jìn)替莫唑胺進(jìn)入U(xiǎn)251細(xì)胞及減低耐藥性的對(duì)比研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2017年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 王丹丹;王建;彭穎;王茜;馬驍;唐丹霞;夏厚林;曾南;;四味開竅藥的揮發(fā)性成分對(duì)缺血缺氧PC12細(xì)胞及Ca~(2+)的影響[A];第四屆全國臨床中藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 韓仲博 原全國中醫(yī)腦病專業(yè)委員會(huì)副主任;中醫(yī)的開竅藥能治療哪些腦病[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 文靜;開竅藥對(duì)永久性局灶性腦缺血模型大鼠神經(jīng)血管單元的保護(hù)機(jī)制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 劉巖;開竅藥對(duì)血腦屏障與腦細(xì)胞功能及其機(jī)制的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 張博;冰片等開竅藥對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的睡眠時(shí)間與睡眠時(shí)相的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 王曉林;明清時(shí)期治療老年性癡呆組方用藥規(guī)律的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

3 涂凌;安神藥及開竅藥對(duì)小鼠外周血淋巴細(xì)胞DNA的損傷研究[D];沈陽藥科大學(xué);2008年

4 楊凌;《太平惠民和劑局方》兒科方配伍規(guī)律研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2726087