“當(dāng)歸類”藥材的等級質(zhì)量和品種鑒定研究

發(fā)布時間：2020-06-22 03:14

【摘要】：中藥當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根,具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效。當(dāng)歸的商品等級體現(xiàn)了當(dāng)歸的質(zhì)量優(yōu)劣,但已知化學(xué)成分含量難以有效地評價不同等級當(dāng)歸藥材的質(zhì)量。此外,在國際市場上,中國當(dāng)歸、日本當(dāng)歸(A.acutiloba Kitagava和A.acutiloba Kitagava var.sugiyamae Hikino)、韓國當(dāng)歸(A.gigas Nakai)、歐當(dāng)歸(Levisticum officinale Koch.)和圓當(dāng)歸(A.archangelica L.)(本文將這五種藥材統(tǒng)稱為“當(dāng)歸類”藥材)均存在不同程度的混淆混用情況。為此,本論文對不同等級中國當(dāng)歸之間的化學(xué)成分和補血活性進行了比較,研究中國當(dāng)歸等級與化學(xué)成分、補血活性之間的相關(guān)性;并運用DNA條形碼和顯微鑒別技術(shù)對“當(dāng)歸類”藥材進行鑒定和比較;以期為中國當(dāng)歸提供商品等級的劃分依據(jù),為“當(dāng)歸類”藥材的合理利用提供依據(jù)。主要研究內(nèi)容包括以下三方面:第一,比較了不同大小中國當(dāng)歸的藥效成分和補血活性:從甘肅、云南和四川收集了7份中國當(dāng)歸藥材,根據(jù)單支重量,分為一等(50~70 g)、二等(25~40 g)、三等(10~20 g)、四等(6~9 g)和五等(1~5 g),共計22份樣品。采用HPLC法測定了這些樣品中藁本內(nèi)酯、游離阿魏酸和總阿魏酸的含量,用3,5-二硝基水楊酸法測定了多糖的含量;以升高紅細胞數(shù)為指標(biāo),用環(huán)孢素A標(biāo)定補血活性,測定了這些樣品的補血活性強度;并運用秩相關(guān)分析分別統(tǒng)計不同大小中國當(dāng)歸藥材的藥效成分含量、補血活性指數(shù)與當(dāng)歸等級之間的相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明,在不同等級中國當(dāng)歸中,(1)補血活性由強至弱的順序為:一等(33.79 U?g~(-1),n=2)、二等(25.98 U?g~(-1),n=6)、三等(23.90 U?g~(-1),n=5)、四等(21.60 U?g~(-1),n=5)、五等(15.38 U?g~(-1),n=4),說明補血活性指數(shù)與中國當(dāng)歸大小之間呈顯著的正秩和相關(guān),能夠評價不同大小當(dāng)歸藥材的質(zhì)量,作為其等級劃分的依據(jù);(2)總阿魏酸含量由高到低的順序為:一等(1.27 mg?g~(-1),n=2)、二等(1.21 mg?g~(-1),n=6)、三等(1.15 mg?g~(-1),n=5)、五等(1.06 mg?g~(-1),n=4)和四等(1.04 mg?g~(-1),n=5),總阿魏酸含量與中國當(dāng)歸大小之間有一定的相關(guān)性,但秩相關(guān)分析的結(jié)果表明兩者之間的相關(guān)性不強;(3)游離阿魏酸含量由高到低的順序為一等(0.55 mg?g~(-1),n=2)、三等(0.34 mg?g~(-1),n=5)、二等(0.28 mg?g~(-1),n=6)、五等(0.17 mg?g~(-1),n=4)和四等(0.16 mg?g~(-1),n=5),游離阿魏酸含量與中國當(dāng)歸大小之間具有一定的相關(guān)性。但游離阿魏酸的量與當(dāng)歸貯藏時間和加工方法引起成分變化有關(guān),并且只是中國當(dāng)歸中總阿魏酸的小部分,故不宜作為中國當(dāng)歸大小等級劃分的依據(jù);(4)多糖含量由高到低的順序為:四等(85.59 mg?g~(-1),n=5)、五等(81.94 mg?g~(-1),n=4)、二等(75.50mg?g~(-1),n=6)、三等(72.99 mg?g~(-1),n=5)和一等(66.31 mg?g~(-1),n=2),多糖含量與中國當(dāng)歸大小之間有一定負相關(guān)性,但秩相關(guān)分析的結(jié)果表明兩者之間的相關(guān)性不強;(5)藁本內(nèi)酯含量由高到低的順序為:一等(13.05 mg?g~(-1),n=2)、二等(12.91 mg?g~(-1),n=6)、五等(12.36 mg?g~(-1),n=4)、三等(11.05 mg?g~(-1),n=5)和四等(10.80 mg?g~(-1),n=5),藁本內(nèi)酯含量與中國當(dāng)歸大小之間的相關(guān)性不強。第二,運用DNA條形碼分子技術(shù)鑒定“當(dāng)歸類”藥材:分別從中國、日本、韓國、奧地利、波蘭和德國等地收集了41份“當(dāng)歸類”藥材樣品。首次運用ITS1、ITS2、psbA-trnH以及rbcL序列對這些“當(dāng)歸類”藥材進行比較和鑒別。藥材樣品的DNA提取后,分別對上述四個序列進行擴增、測序、拼接、校對,變異位點分析,遺傳距離的計算以及Neighbor-Joining(NJ)樹的構(gòu)建等分析。結(jié)果表明:(1)中國當(dāng)歸與歐當(dāng)歸在基于ITS1、ITS2和psbA-trnH序列構(gòu)建的3個NJ樹上均聚為一大支,再各自聚為一小支,而rbcL序列基本一致,無變異位點,NJ樹無法區(qū)分。(2)韓國當(dāng)歸、日本當(dāng)歸和圓當(dāng)歸在四個NJ樹上均聚為一大支,再各自聚為一小支。其中,在基于ITS1和ITS2序列NJ樹中,日本當(dāng)歸和圓當(dāng)歸分別達到了52%的中度支持率和91%高度支持率。(3)貯藏年限較長的“當(dāng)歸類”藥材的ITS1和rbcL序列的提取率分別為82.9%和80.5%,低于ITS2和psbA-trnH序列100%和95.1%的提取率。由此可見,ITS1、ITS2和psbA-trnH序列可以鑒定“當(dāng)歸類”藥材,而rbcL不適于“當(dāng)歸類”藥材的鑒定;“當(dāng)歸類”藥材DNA條形碼鑒定的適用性強弱依次為ITS2、psbA-trnH、ITS1。中國當(dāng)歸和歐當(dāng)歸的植物親緣關(guān)系接近,而日本當(dāng)歸和圓當(dāng)歸的植物親緣關(guān)系接近。隨著“當(dāng)歸類”藥材貯藏時間的延長,DNA逐漸發(fā)生降解,較長的ITS序列和rbcL序列在藥材中難以保持完整,而相對較短的ITS2和psbA-trnH序列容易完整保存。第三,運用顯微技術(shù)鑒別“當(dāng)歸類”藥材:對34份從中國、日本、韓國、奧地利、波蘭和德國等地收集的“當(dāng)歸類”藥材樣品進行了顯微鑒別,并運用顯微半定量法測定了淀粉粒常數(shù);結(jié)合本課題組前期測定的“當(dāng)歸類”藥材多糖含量的數(shù)據(jù),研究淀粉粒常數(shù)與多糖含量的相關(guān)性。結(jié)果表明,(1)“當(dāng)歸類”藥材的顯微特征為紡錘狀薄壁細胞、導(dǎo)管、木栓細胞、淀粉粒等。其中,最具有鑒別意義的特征是淀粉粒類型、形態(tài)和大小,以及韓國當(dāng)歸沿長軸作不規(guī)則方向交錯排列的薄壁細胞。(2)“當(dāng)歸類”藥材淀粉粒常數(shù)的平均值由高到低順序為:圓當(dāng)歸(2.17×10~9個/mg,n=7),歐當(dāng)歸(1.19×10~9個/mg,n=5),日本當(dāng)歸(9.17×10~8個/mg,n=11),中國當(dāng)歸(1.49×10~3個/mg,n=5)和韓國當(dāng)歸(7.68×10~2個/mg,n=6);(3)“當(dāng)歸類”藥材淀粉粒常數(shù)與多糖含量的Kendall和Spearman相關(guān)系數(shù)分別為0.533(P0.01)和0.640(P0.01)。由此可見,根據(jù)淀粉粒的性狀和數(shù)量可鑒別“當(dāng)歸類”藥材;這些藥材的淀粉粒常數(shù)與多糖含量之間具有顯著的正秩和相關(guān)。此外,還對植物類中藥的DNA條形碼研究進展進行了綜述。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R282.5
【圖文】：

藥材,不同等級,樣品