【摘要】：本課題通過建立AngⅡ誘導(dǎo)的心肌成纖維細胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的模型,應(yīng)用不同濃度的四妙勇安湯干預(yù),觀察其對AngⅡ誘導(dǎo)的CFs增殖及TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,探討四妙勇安湯對CFs增殖的影響及調(diào)控機制。分離新生大鼠CFs并進行原代培養(yǎng)及鑒定,應(yīng)用AngⅡ(10~(-6)mol·L~(-1))建立CFs增殖模型,應(yīng)用不同濃度四妙勇安湯醇沉藥液進行CFs增殖的干預(yù),將傳代培養(yǎng)的CFs按實驗需求分為A、B、C、D、E五組。即A組:不加入AngⅡ及四妙勇安湯的醇沉藥液處理;B組:僅加入AngⅡ處理,但不加四妙勇安湯的醇沉藥液;C組:加入AngⅡ處理,并加入含30%四妙勇安湯的醇沉藥液進行干預(yù);D組:加入AngⅡ處理,且加入含20%四妙勇安湯的醇沉藥液干預(yù);E組:加入AngⅡ處理,和含10%四妙勇安湯的醇沉藥液干預(yù)。采用MTT比色法檢測各組CFs增殖情況,ELISA測各組細胞中TGF-β1表達水平,Western blot法檢測Smad3在各組中的活化水平,從而觀察四妙勇安湯對AngⅡ誘導(dǎo)的新生大鼠CFs增殖及TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。MTT比色法檢測各組CFs存活力:A組OD值為(0.341±0.012),B組OD值為(0.531±0.016),C組OD值為(0.465±0.045),D組OD值為(0.488±0.020),E組OD值為(0.492±0.017)。B與A組比較,OD值明顯升高,說明B組CFs活細胞的數(shù)量明顯增加,即AngⅡ誘導(dǎo)心肌成纖維細胞的增殖造模成功。C組、D組、E組與B組比較,OD值均明顯降低,說明含四妙勇安湯各組能降低AngⅡ誘導(dǎo)增殖模型各孔的OD值,即四妙勇安湯各組能降低AngⅡ誘導(dǎo)的心肌成纖維細胞增殖,經(jīng)單因素方差分析,B組與A組比較,差異具有顯著性(P0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義;C組、D組、E組與B組比較,差異具有顯著性(P0.05),亦有統(tǒng)計學(xué)意義;C組與E組比較,OD值明顯降低,說明C組較E組CFs數(shù)量相差明顯,經(jīng)單因素方差分析,兩組比較具有顯著性差異(P0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義。ELISA法測各組CFs中TGF-β1表達水平:A組TGF-β1含量為(87.68±3.93)pg/ml,B組TGF-β1含量(122.99±4.86)pg/ml,C組TGF-β1含量(101.72±4.74)pg/ml,D組TGF-β1含量為(108.73±8.28)pg/ml,E組TGF-β1含量(114.33±7.86)pg/ml。B組TGF-β1含量較A組升高,而在E、C、D各組中TGF-β1含量均較B組降低,經(jīng)單因素方差分析,A組與B組相比較,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組、D組、E組與B組相比較差異均具有顯著性,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組較E組和D組TGF-β1含量降低,經(jīng)單因素方差分析,具有顯著性差異(P0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義,E組和D組相比較,無顯著性差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western blot檢測Smad3在各組CFs中表達水平:A組Smad3/GAPDH比值為(0.301±0.021),B組Smad3/GAPDH比值為(0.804±0.030),C組Smad3/GAPDH比值為(0.522±0.014),D組Smad3/GAPDH比值為(0.534±0.013),E組Smad3/GAPDH比值為(0.547±0.064)。B組Smad3/GAPDH比值較A組升高,說明B組Smad3表達水平高于A組,即造模成功,C組、D組、E組較B組Smad3/GAPDH比值均降低,說明四妙勇安湯各組能降低Smad3表達,經(jīng)單因素方差分析,B組與A組相比較,差異具有顯著性,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組、D組、E組與B組相比較,差異具有顯著性,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組、D組、E組相比較,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。綜上所述,AngⅡ(10~(-6)mol·L~(-1))可以誘導(dǎo)CFs增殖。在AngⅡ誘導(dǎo)的CFs增殖模型中加入四妙勇安湯藥物干預(yù)處理后可抑制CFs增殖。本實驗中四妙勇安湯抑制CFs增殖情況隨設(shè)定濃度梯度升高而增強,即30%濃度抑制CFs增殖作用最強,但是否為最佳藥效濃度還有待進一步研究。此外證實四妙勇安湯可降低TGF-β1及Smad3的表達,其機制可能通過調(diào)控TGF-β1/Smad3信號通路抑制CFs增殖。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2724159