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丹參注射液對胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響及其機(jī)制的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-06-21 05:38
【摘要】:丹參是一味最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》的中草藥,目前臨床上主要用于防治心腦血管疾病~([1-4])。本文旨在探索丹參注射液對胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)增殖和分化的影響及其發(fā)生保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制,為丹參可能成為修復(fù)受損神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)和功能的潛在藥物提供了有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本研究主要內(nèi)容包括以下幾個方面:1.建立細(xì)胞培養(yǎng)平臺:建立胚胎小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)的原代培養(yǎng)、擴(kuò)增、分化以及鑒定等方法,為以下實(shí)驗(yàn)提供條件穩(wěn)定、均一的細(xì)胞模型~([5-7])。2.探索丹參注射液對NSCs增殖和分化的影響:將NSCs分為正常對照組(control)和丹參注射液處理組,采用CCK-8試劑、BrdU試劑、CQ1共聚焦高內(nèi)涵分析系統(tǒng)和RT-PCR技術(shù)分別檢測丹參注射液對NSCs增殖和分化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,丹參注射液不僅可提高NSCs的增殖能力,同時(shí)還可促進(jìn)其向神經(jīng)元方向的分化。3.探索丹參注射液對NSCs產(chǎn)生保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制:將NSCs分成3組,即正常對照組(control)、脂多糖(LPS)氧化損傷組和LPS加丹參注射液處理組進(jìn)行相關(guān)機(jī)制研究。轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示丹參注射液對LPS氧化損傷后的NSCs產(chǎn)生保護(hù)作用與谷胱甘肽代謝、“鐵死亡”等密切相關(guān),其作用機(jī)制可能與清除自由基和阻斷凋亡信號通路相關(guān)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶抑制劑可極大程度抑制丹參注射液對NSCs的保護(hù)作用,該結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了“丹參注射液對NSCs的保護(hù)機(jī)制與谷胱甘肽代謝密切相關(guān)”的結(jié)論。
【學(xué)位授予單位】:南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:R285.5
【圖文】:

神經(jīng)干細(xì)胞,免疫熒光染色,占比


圖 1 免疫熒光染色鑒定神經(jīng)干細(xì)胞Fig.1 Identification of NSCs by immunofluorescence staining2.3.2 CQ1 高內(nèi)涵共聚焦系統(tǒng)檢測 NSCs 分化細(xì)胞比例撤除 bFGF,檢測 NSC 自發(fā)分化 5 天過程中各類細(xì)胞所占百分比變化。結(jié)果顯示,Nestin 陽性細(xì)胞占比迅速下降,24~48h 之間從約 70%下降至不足 10%;而 GFAP、MAP2 和 Oligo2 陽性細(xì)胞占比逐漸增加,其中 GFAP 陽性細(xì)胞最多,所占比例為 52.7%。NSCs spontaneous differentiation+/DAPI(A)

占比,細(xì)胞,星形膠質(zhì)細(xì)胞,干細(xì)胞


圖 2 NSCs 自發(fā)分化后各類細(xì)胞占比變化hanges in the proportion of types of cells after NSCs spontaneous differentiation論干細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)未分化的原始細(xì)胞,在適宜條件下,可分化成神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞等類型。巢蛋白 Nestin 是一種中間絲類型的夠特異性的表達(dá)在神經(jīng)上皮干細(xì)胞上,為神經(jīng)干細(xì)胞的特征性標(biāo)志物;蛋白 Map2 是一種磷蛋白質(zhì),主要存在于神經(jīng)元的胞體、樹突和樹突棘,經(jīng)元特異性標(biāo)志物;髓磷酯髓鞘蛋白 PLP 是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂要膜蛋白之一,可用來標(biāo)記少突膠質(zhì)細(xì)胞;膠質(zhì)纖維酸性蛋白 GFAP 主中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,廣泛用于標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞。究使用免疫熒光染色方法,通過對 Nestin、MAP2,PLP 和 GFAP 這四蛋白進(jìn)行分時(shí)檢測,結(jié)果證明了這批用于實(shí)驗(yàn)的 NSCs 不僅具有干細(xì)胞Hours post without of bFGF(h)

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本文編號:2723605

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