發(fā)布時間：2020-06-21 05:38

【摘要】：丹參是一味最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》的中草藥,目前臨床上主要用于防治心腦血管疾病~([1-4])。本文旨在探索丹參注射液對胎鼠大腦皮質神經(jīng)干細胞(NSCs)增殖和分化的影響及其發(fā)生保護作用的相關機制,為丹參可能成為修復受損神經(jīng)組織結構和功能的潛在藥物提供了有效的實驗數(shù)據(jù)。本研究主要內容包括以下幾個方面:1.建立細胞培養(yǎng)平臺:建立胚胎小鼠大腦皮質神經(jīng)干細胞(NSCs)的原代培養(yǎng)、擴增、分化以及鑒定等方法,為以下實驗提供條件穩(wěn)定、均一的細胞模型~([5-7])。2.探索丹參注射液對NSCs增殖和分化的影響:將NSCs分為正常對照組(control)和丹參注射液處理組,采用CCK-8試劑、BrdU試劑、CQ1共聚焦高內涵分析系統(tǒng)和RT-PCR技術分別檢測丹參注射液對NSCs增殖和分化的影響。實驗結果顯示,丹參注射液不僅可提高NSCs的增殖能力,同時還可促進其向神經(jīng)元方向的分化。3.探索丹參注射液對NSCs產(chǎn)生保護作用的相關機制:將NSCs分成3組,即正常對照組(control)、脂多糖(LPS)氧化損傷組和LPS加丹參注射液處理組進行相關機制研究。轉錄組測序結果顯示丹參注射液對LPS氧化損傷后的NSCs產(chǎn)生保護作用與谷胱甘肽代謝、“鐵死亡”等密切相關,其作用機制可能與清除自由基和阻斷凋亡信號通路相關。實驗發(fā)現(xiàn),谷胱甘肽轉移酶抑制劑可極大程度抑制丹參注射液對NSCs的保護作用,該結果進一步驗證了“丹參注射液對NSCs的保護機制與谷胱甘肽代謝密切相關”的結論。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 免疫熒光染色鑒定神經(jīng)干細胞Fig.1 Identification of NSCs by immunofluorescence staining2.3.2 CQ1 高內涵共聚焦系統(tǒng)檢測 NSCs 分化細胞比例撤除 bFGF，檢測 NSC 自發(fā)分化 5 天過程中各類細胞所占百分比變化。結果顯示，Nestin 陽性細胞占比迅速下降，24~48h 之間從約 70%下降至不足 10%；而 GFAP、MAP2 和 Oligo2 陽性細胞占比逐漸增加，其中 GFAP 陽性細胞最多，所占比例為 52.7%。NSCs spontaneous differentiation+/DAPI（A）

圖 2 NSCs 自發(fā)分化后各類細胞占比變化hanges in the proportion of types of cells after NSCs spontaneous differentiation論干細胞是神經(jīng)系統(tǒng)內未分化的原始細胞，在適宜條件下，可分化成神經(jīng)膠質細胞和星形膠質細胞等類型。巢蛋白 Nestin 是一種中間絲類型的夠特異性的表達在神經(jīng)上皮干細胞上，為神經(jīng)干細胞的特征性標志物；蛋白 Map2 是一種磷蛋白質，主要存在于神經(jīng)元的胞體、樹突和樹突棘，經(jīng)元特異性標志物；髓磷酯髓鞘蛋白 PLP 是構成中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂要膜蛋白之一，可用來標記少突膠質細胞；膠質纖維酸性蛋白 GFAP 主中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質細胞，廣泛用于標記星形膠質細胞。究使用免疫熒光染色方法，通過對 Nestin、MAP2，PLP 和 GFAP 這四蛋白進行分時檢測，結果證明了這批用于實驗的 NSCs 不僅具有干細胞Hours post without of bFGF（h）

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本文編號：2723605