【摘要】：帕金森癥(PD)是一種神經(jīng)退行性疾病,其病理特征是黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元的逐漸喪失和路易氏病理學(xué)。路易氏病理學(xué)指的是α-synuclein的異常聚集,在PD病理生理學(xué)方面扮演著關(guān)鍵角色。帕金森癥發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性給臨床治療帶來了巨大挑戰(zhàn),目前的臨床藥物還不能阻止或延緩神經(jīng)退行性病的進(jìn)程,因此,尋求新的治療方法及治療藥物已迫在眉睫。據(jù)報(bào)道姜黃素、海藻糖等天然化合物對(duì)于突觸核蛋白有抑制作用,然而治療效果并不明顯。白藜蘆醇(RV)作為一種具有多種生物活性的多酚類化合物,具有多種生物學(xué)功能如心臟保護(hù)、抗炎和抗氧化等。新近研究顯示,白藜蘆醇還能預(yù)防多種神經(jīng)退行性疾病及其相關(guān)并發(fā)癥。但是,就白藜蘆醇對(duì)帕金森癥的治療和預(yù)防效果及其機(jī)制尚未完全闡明。基于以上研究背景,本試驗(yàn)分別通過體外、體內(nèi)試驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)于α-synclein的影響。在體外試驗(yàn)中,采用硫磺素?zé)晒?ThT)、透射電子顯微鏡觀察白藜蘆醇對(duì)于α-synclein聚集的影響,進(jìn)一步采用細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞的影響。在體內(nèi)試驗(yàn)中,通過動(dòng)物行為學(xué)研究白藜蘆醇對(duì)動(dòng)物行為協(xié)調(diào)能力以及認(rèn)知水平的調(diào)控作用:運(yùn)用Western blot、Dotblot的手段檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)于轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)總α-synclein和α-synclein寡聚體水平,并且通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)與PD相關(guān)的病理生化變化;利用免疫組織化學(xué)、ELISA的方法驗(yàn)證白藜蘆醇對(duì)炎癥水平和氧化應(yīng)激水平的影響,從而揭示白藜蘆醇治療帕金森癥的機(jī)制。研究結(jié)果如下:(1)通過對(duì)α-synuc 1 ein寡聚體的構(gòu)象和分子水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn),低濃度和高濃度的白藜蘆醇對(duì)于α-synuclein寡聚體都有抑制作用,且高濃度白藜蘆醇濃度抑制寡聚體的聚集效果更加明顯。細(xì)胞水平顯示,α-synuclein對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞有毒性作用,而高劑量的白藜蘆醇顯著增強(qiáng)了細(xì)胞活性;(2)通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、爬竿實(shí)驗(yàn)、抱爪實(shí)驗(yàn)等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇處理的A53T轉(zhuǎn)基因小鼠運(yùn)動(dòng)障礙得到明顯改善;并且在新事物認(rèn)知實(shí)驗(yàn)、Y迷宮實(shí)驗(yàn)也證實(shí)轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知障礙得到有效緩解;(3)通過Western blot、Dot blot試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇可以降低A53T轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)α-synuclein水平,也通過免疫組織化學(xué)手段驗(yàn)證了磷酸化的-αsynuclein減少,而絡(luò)氨酸羥化酶明顯增多;(4)通過EIISA、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,白藜蘆醇抑制了星形膠質(zhì)、小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,降低了小鼠相關(guān)炎性因子及活性氧水平,從而抑制了轉(zhuǎn)基因小鼠的炎癥反應(yīng),降低了氧化應(yīng)激水平。綜合以上研究結(jié)果,闡明了白藜蘆醇治療帕金森癥的作用為:白藜蘆醇有效的降低了 α-synuclein的聚集并且緩解了 α-synuclein聚集引發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞死亡,提高了細(xì)胞存活率;動(dòng)物行為學(xué)研究中顯示,白藜蘆醇改善了轉(zhuǎn)基因小鼠的運(yùn)動(dòng)障礙和認(rèn)知缺陷;同時(shí),白藜蘆醇有效降低了總α-synuclein與寡聚體的水平以及改變了 PD相關(guān)病理生化指標(biāo);并且有效降低了轉(zhuǎn)基因小鼠的炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

醇按摩爾比為１：１時(shí)，在視野中，小的長(zhǎng)絲狀纖維比較少，小的纖維或者短鏈狀寡聚體比較逡逑多。當(dāng)ｃｃ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ與白叕蘆醇按摩爾比為１：５時(shí)，在視野中，小的纖維或者短鏈狀寡聚體較逡逑少，大部分以單體的形式存在（圖２－１Ｂ）。ａ－ｓｙｎｕｄｅｉｎ與ｄ藜蘆醇按摩爾比為１：５時(shí)，抑制效逡逑果明顯，結(jié)果顯示透射電鏡的結(jié)果和ＴｈＴ的結(jié)果趨勢(shì)一致。逡逑２．４．３細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)（ＭＴＴ）檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)于ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞的保護(hù)作用逡逑我們己經(jīng)證明白藜蘆醇對(duì)于淀粉樣蛋白的抑制情況，進(jìn)一步驗(yàn)證這種抑制效果對(duì)于細(xì)胞逡逑毒性的影響，這里我們采用ＭＴＴ的方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果如圖（２－１邋Ｃ）顯示，當(dāng)細(xì)胞與ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ逡逑共孵育的情況下，細(xì)胞活性降低了邋３８．０４％，我們得出的結(jié)論與之前文獻(xiàn)報(bào)道一致，即ａ－逡逑ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ寡聚體是最具有細(xì)胞毒性的，當(dāng)加入１０邋ｎＭ的白藜蘆醇時(shí)，細(xì)胞的活性率升高至逡逑７０％，但是與對(duì)照組無明顯差異，當(dāng)加入５０ｐＭ的白藜蘆醇時(shí)，細(xì)胞的活性與ｏｉ－ｓｙｎｕｄｅｉｎ組逡逑相比升高了丨９．７３％，與對(duì)照組有顯著差異。我們同樣發(fā)現(xiàn)，隨著白藜蘆醇對(duì)于ａ－ｓｙｍｉｄｅｉｎ逡逑的抑制

Ａ５３Ｔ轉(zhuǎn)基因小鼠是科學(xué)研宄中常用的ＰＤ轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，可以間接反應(yīng)帕金森癥患逡逑者的各項(xiàng)行為能力指標(biāo)。本論文采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)Ａ５３Ｔ轉(zhuǎn)基因小鼠的影響，結(jié)逡逑果如圖３－２所示：與ＷＴ－Ｖｅｈ和ＷＴ－ＲＶ組小鼠相比，Ａ５３丁轉(zhuǎn)基因小鼠運(yùn)動(dòng)的總路程更長(zhǎng)逡逑（圖３－２Ａ），速度更快（圖３－２Ｂ），站立次數(shù)更頻繁（圖３－２Ｃ），說明Ａ５３Ｔ轉(zhuǎn)基因小鼠比ＷＴ－Ｖｅｈ逡逑和ＷＴ－ＲＶ組小鼠更活躍，這與先前報(bào)道一致而治療組小鼠在總路程、速度和站立次數(shù)逡逑方面都顯著減少（圖３－２Ａ－Ｃ），證明白藜蘆醇可以改善ＰＤ小鼠在新異環(huán)境中的自主行為。逡逑進(jìn)一步采用爬桿試驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)Ａ５３Ｔ轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)作協(xié)調(diào)性和平衡性的影響。己逡逑有研宄表明ＰＤ小鼠發(fā)病后，后肢呈抱緊的癥狀。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ａ５３Ｔ轉(zhuǎn)基因小鼠爬回籠逡逑１４逡逑

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本文編號(hào)：2721891