【摘要】：植物內生真菌作為微生物天然藥物的重要來源之一,因其次級代謝產物結構新穎、活性多樣而引起研究者們的廣泛關注。本文圍繞著植物內生真菌及其次級代謝產物開展了以下工作:(1)以傳統藥用植物三七作為內生真菌的分離對象,經分離純化、菌種鑒定和活性篩選,挑選出具有研究價值的目標菌株;(2)采用“OSMAC”策略和化學表觀遺傳修飾策略對該目標菌株進行生物合成潛能的挖掘;(3)對分離得到的單體化合物進行生物活性的研究。(1)利用組織塊表面消毒法從新鮮的三七植物中分離得到17株內生真菌,分別進行18S rDNA序列的分子生物學鑒定和小規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。待發(fā)酵培養(yǎng)結束后分別提取其次級代謝產物進行抗菌活性的篩選,結果發(fā)現1株翹孢霉屬真菌Emericella sp.XL-029具有顯著的抗菌活性,因此將該目標活性菌株作為下一步生物合成潛能挖掘的研究對象。(2)本部分首先采用“OSMAC”策略中改變培養(yǎng)方式和培養(yǎng)基組成對該目標菌株的次級代謝產物多樣性進行篩選,結果發(fā)現該菌株在固體大米葡萄糖培養(yǎng)基和液體MEB培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)后誘導產生的代謝產物較為豐富。分別使用這兩種培養(yǎng)基對其進行擴大發(fā)酵培養(yǎng)及代謝產物提取。最終從其大米固體擴大發(fā)酵代謝產物中分離并鑒定了14個單體化合物,其中包括6個新化合物;液體MEB擴大發(fā)酵代謝產物中分離并鑒定了12個化合物,其中包括3個新化合物。接下來我們對翹孢霉屬真菌Emericella sp.XL-029進行了化學表觀遺傳修飾策略的篩選,由于篩選結果不佳,故未進行下一步的擴大培養(yǎng)發(fā)酵。(3)最后,我們對分離得到的部分單體化合物開展了抗人類致病性細菌、抗植物病原真菌和抗腫瘤細胞毒生物活性實驗的研究�？辜毦钚詫嶒炑芯堪l(fā)現化合物10對蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)有明顯的抑制活性(MIC為6.3μg/mL);抗植物病原真菌實驗研究發(fā)現化合物10對馬鈴薯黃萎病菌(V.dahliae Kleb)和草莓黑斑病菌(H.maydis)有明顯的抑制活性(MIC為6.3μg/ml和3.1μg/mL);抗腫瘤活性實驗研究發(fā)現化合物4對高轉移肝癌細胞株生長有較強的抑制活性(IC_(50)為9.8μM),且對高轉移肝癌細胞的遷移、侵襲及粘附均有較好的抑制作用,該化合物4為開發(fā)腫瘤細胞生長及遷移的抑制劑提供了選擇。
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

圖 2.1 翹孢霉屬真菌 XL-029 粗提物抗細菌活性結果Figure 2.1 The results of Emericella sp. XL-029 crude extract antibacterial activity

圖 2.1 翹孢霉屬真菌 XL-029 粗提物抗細菌活性結果Figure 2.1 The results of Emericella sp. XL-029 crude extract antibacterial activity

【參考文獻】

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1 張偉;陳敏;邵長倫;王長云;;化學表觀遺傳修飾方法在真菌次級代謝產物研究中的應用[J];中國海洋藥物;2014年05期

2 張曉冬,李若瑜,王文莉,王端禮;微量法檢測念珠菌對三唑類藥物敏感性與交叉耐藥性[J];中華醫(yī)學檢驗雜志;1998年02期

本文編號：2719511