【摘要】：目的:本研究在廣藿香油質(zhì)量檢查的過程中發(fā)現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)儲存條件下分別儲存一年和十年的兩份同源的廣藿香油樣品的成分存在差異。其中,在儲存時間達(dá)十年的樣品中存在一種含量較多的未知成分,而該成分在另一樣品中并不存在。應(yīng)用精餾-柱層析法分離純化該成分并進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,確認(rèn)該成分為環(huán)氧廣藿香烯。關(guān)于環(huán)氧廣藿香烯的研究報道并不多,主要集中在化學(xué)合成領(lǐng)域,鮮見藥理活性方面的研究,這在一定程度上限制了環(huán)氧廣藿香烯的實際應(yīng)用。本研究致力于開發(fā)環(huán)氧廣藿香烯的藥理活性。首先,基于環(huán)氧廣藿香烯屬于厑類化合物(具有典型的五元環(huán)與七元環(huán)駢合而成的芳香骨架),而厑類化合物往往具有良好的抗炎活性,因此,本研究擬探究環(huán)氧廣藿香烯的體內(nèi)外抗炎活性。此外,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明廣藿香烯具有良好的抗胃潰瘍活性,鑒于環(huán)氧廣藿香烯的化學(xué)結(jié)構(gòu)與廣藿香烯相似,本研究也探究其潛在的胃粘膜保護(hù)作用。方法:1.環(huán)氧廣藿香烯的體外抗炎活性研究本研究應(yīng)用LPS刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞模型評價環(huán)氧廣藿香烯的體外抗炎活性。通過測定TNF-α,IL-1β,IL-12和MCP-1等促炎細(xì)胞因子的含量和mRNA水平以及檢測COX-2和iNOS信號通路的表達(dá)衡量環(huán)氧廣藿香烯的抗炎作用。2.環(huán)氧廣藿香烯的體內(nèi)抗炎活性研究本研究主要通過二甲苯致小鼠耳腫脹模型,醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管滲透性增強模型和角叉菜膠致小鼠足腫脹模型來評估環(huán)氧廣藿香烯的體內(nèi)抗炎活性,并進(jìn)一步利用角叉菜膠致小鼠足腫脹模型探究環(huán)氧廣藿香烯的體內(nèi)抗炎機制。測定小鼠足組織中TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-4,IL-10,PGE2和NO等抗炎/促炎細(xì)胞因子的含量,同時檢測COX-2和iNOS蛋白及mRNA表達(dá)量。此外,本研究還應(yīng)用免疫印跡法分析NF-κB信號傳導(dǎo)途徑的相關(guān)蛋白表達(dá)。3.環(huán)氧廣藿香烯的胃保護(hù)作用研究本研究采用乙醇誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍模型。首先,結(jié)合肉眼觀察和組織學(xué)評價宏觀評價環(huán)氧廣藿香烯的胃粘膜保護(hù)活性。然后從炎癥反應(yīng),氧化應(yīng)激反應(yīng),細(xì)胞凋亡和胃粘膜防御作用闡明環(huán)氧廣藿香烯抗胃潰瘍的作用機制。具體而言,檢測TNF-α,IL-1β,IL-10和NF-κB通路相關(guān)蛋白以評價環(huán)氧廣藿香烯在胃組織中的抗炎活性;檢測GSH,SOD,CAT和MDA以評價環(huán)氧廣藿香烯在胃組織中的抗氧化活性;檢測Caspase-3,Fas和Fasl以評價環(huán)氧廣藿香烯在胃組織中的抗凋亡活性;檢測PGE_2和NO水平以評價環(huán)氧廣藿香烯對胃粘膜防御能力的增強作用。結(jié)果:1.環(huán)氧廣藿香烯的體外抗炎作用評價實驗結(jié)果顯示,環(huán)氧廣藿香烯可顯著抑制TNF-α,IL-1β,IL-12和MCP-1等促炎細(xì)胞因子的蛋白和mRNA表達(dá)且呈劑量依賴性關(guān)系。此外,Real-time PCR結(jié)果也表明環(huán)氧廣藿香烯能夠明顯減少iNOS和COX-2 mRNA表達(dá)量,從而降低RAW264.7細(xì)胞中NO和PGE_2的含量。2.環(huán)氧廣藿香烯的體內(nèi)抗炎活性評價實驗結(jié)果表明,環(huán)氧廣藿香烯的半數(shù)致死量大于10 g/kg,表明其具有較高的安全性。同時,環(huán)氧廣藿香烯能顯著抑制二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹,降低醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增強以及抑制角叉菜膠誘發(fā)的小鼠足腫脹。在抗炎機制研究方面,環(huán)氧廣藿香烯顯著地降低了足組織中TNF-α,IL-1β和IL-6等促炎細(xì)胞因子的水平,但同時能使抗炎細(xì)胞因子如IL-4和IL-10的含量增加。此外,環(huán)氧廣藿香烯能明顯下調(diào)COX-2和iNOS信號通路的表達(dá)。免疫印跡結(jié)果表明,環(huán)氧廣藿香烯還能通過抑制IKKβ和IκBα的磷酸化控制炎癥過程中NF-κB(p50和p65)從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移。3.環(huán)氧廣藿香烯的胃粘膜保護(hù)作用評價實驗結(jié)果顯示,環(huán)氧廣藿香烯能有效減少乙醇所致胃潰瘍的潰瘍面積,該實驗結(jié)果與組織學(xué)評價結(jié)果一致。在闡明其胃保護(hù)作用機制方面,環(huán)氧廣藿香烯有顯著的抗炎活性,能逆轉(zhuǎn)胃潰瘍組織中促炎和抗炎細(xì)胞因子之間的失衡狀態(tài)和調(diào)節(jié)NF-κB通路中p-IκBα,IκBα,p-p65和p65等指標(biāo)的蛋白表達(dá)。此外,環(huán)氧廣藿香烯能明顯增加GSH,SOD和CAT等抗氧化酶的表達(dá)并下調(diào)MDA的含量,這表明它對胃潰瘍組織中存在的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有顯著的抑制作用。同時,免疫組織化學(xué)分析結(jié)果也表明環(huán)氧廣藿香烯具有較強的抗凋亡活性,能下調(diào)caspase-3,Fas和Fasl等凋亡蛋白的表達(dá)。最后,本研究還證明環(huán)氧廣藿香烯可以恢復(fù)潰瘍組織中PGE_2和NO的正常含量以增強胃粘膜對攻擊因子的防御能力。結(jié)論:本研究首次從久置的廣藿香油中發(fā)現(xiàn)并成功分離提純環(huán)氧廣藿香烯,并證實其較高的安全性。此外,實驗結(jié)果表明,環(huán)氧廣藿香烯具有顯著的體內(nèi)外抗炎活性,同時還具有顯著的胃粘膜保護(hù)作用,能對抗乙醇所致胃粘膜損傷,相關(guān)抗?jié)儥C制與它的抗炎,抗氧化應(yīng)激,抗凋亡活性以及黏膜保護(hù)作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

譜分析：（A）儲存期為一年的廣藿香油樣品的 GC-MS 圖譜的 GC-MS 圖譜；（C）從儲存期為十年的廣藿香油樣品中分圖譜。在 GC-MS 圖譜的峰上顯示的數(shù)字對應(yīng)于表 1 所示sis. (A) GC-MS analysis of fresh patchouli oil with one-year stoatchouli oil with ten-year storage time. Numbers indicated on p) GC-MS analysis of the unknown compound isolated from stal

廣藿香烯(PAO)化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定。(A) PAO的化學(xué)結(jié)構(gòu); (B) PAO的1H-1H COSY和C) PAO的NOESY相關(guān)。entification of patchoulene epoxide (PAO). The chemical structure of PAO (A); KeMBC correlations of PAO (B); Key NOESY correlations of PAO (C).是唇形科剌蕊草屬多年生芳香草本或半灌木，源產(chǎn)于馬來西亞、菲，目前在我國的亞熱帶地區(qū)如兩廣，海南等地均有廣泛種植[87]。廣

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2718431