【摘要】：王棗子(Isodon amethystoides(Benth)Cy Wu et Hsuan),學(xué)名香茶菜是種傳統(tǒng)的藥食同源、全草入藥植物�！端幍洹酚涊d其能消炎抗菌、埅毒清熱、活血解瘀,常用來(lái)醫(yī)治惡瘡、蛇蟲(chóng)咬傷、肺結(jié)核和急性傳染性肝炎等。近年來(lái)的研究顯示,其內(nèi)部天然活性成分種類復(fù)雜、含量豐富,含有大量能抗腫瘤的萜類成分。課題組前期對(duì)王棗子提取、分離、純化得出2種天然活性物質(zhì)——內(nèi)折香茶菜苷A(Inflexuside A)和王棗子乙素(Glaucocalyxin A),并發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性。因此本研究以A549(肺癌)和HepG2(肝癌)細(xì)胞為研究對(duì)象,分別將兩種活性物質(zhì)進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞活性研究,通過(guò)對(duì)細(xì)胞活力、活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的檢測(cè),觀察JC-1、Annexin V/PI染色,蛋白免疫印跡(Western Blot)測(cè)定等實(shí)驗(yàn),探索二者的抑制腫瘤活性作用及其作用機(jī)理,為中藥王棗子能夠在臨床上作為一種新潛在抗腫瘤藥物提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。(1)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素能夠抑制A549和HepG2細(xì)胞的增殖,對(duì)不同細(xì)胞株,腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效果不同:其中內(nèi)折香茶菜苷A對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用較明顯,而王棗子乙素對(duì)HepG2細(xì)胞的抗增殖作用更強(qiáng)。隨體外給藥濃度的增加、藥物作用時(shí)間的增長(zhǎng),兩種腫瘤細(xì)胞的活力均逐漸下降。形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素作用后,兩種腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)均被不同程度破壞。(2)內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素作用后,腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS水平均顯著增加,引起了腫瘤細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。(3)通過(guò)對(duì)藥物作用前后對(duì)HepG2和A549細(xì)胞培養(yǎng)基上清中LDH釋放率的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)藥物作用后細(xì)胞LDH釋放率明顯升高。(4)通過(guò)AV/PI染色、流式細(xì)胞儀分析,發(fā)現(xiàn)低濃度內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素用于腫瘤細(xì)胞后,可見(jiàn)早期凋亡細(xì)胞數(shù)量有所增多;高濃度藥物作用,細(xì)胞凋亡量不斷增加,本研究表明內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素對(duì)腫瘤細(xì)胞的活性抑制是由于引發(fā)了細(xì)胞凋亡造成的。(5)內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素作用于兩種腫瘤細(xì)胞12 h后的細(xì)胞線粒體膜電位變化情況可以看出,藥物作用使線粒體膜電位下降。分別考察內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素對(duì)A549和HepG2細(xì)胞質(zhì)中細(xì)胞色素C(Cytochromsome C,Cyto-C)含量的影響。結(jié)果顯示,對(duì)照組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)幾乎不含Cyto-C,加入藥物作用后,胞質(zhì)中Cyto-C的含量升高。(6)用不同濃度內(nèi)折香茶菜苷A作用A549和HepG2細(xì)胞12 h后,細(xì)胞促凋亡蛋白Bax表達(dá)明顯增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)量減少。王棗子乙素對(duì)兩細(xì)胞的作用效果與內(nèi)折香茶菜苷A的作用效果一致�？傊�,本研究初步證明了王棗子根中提取物內(nèi)折香茶菜苷A和王棗子乙素對(duì)A549和HepG2細(xì)胞通過(guò)破壞線粒體膜電位,使其通透性加強(qiáng),Cyto-C釋放到細(xì)胞內(nèi),引發(fā)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路,升高Bax表達(dá),降低Bcl-2表達(dá),最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2717516