【摘要】：目的:探討薯蕷皂苷對血管平滑肌細(xì)胞的增殖遷移以及內(nèi)膜新生的作用及其潛在的機制。方法:1.薯蕷皂苷對大鼠頸動脈損傷后平滑肌細(xì)胞增殖以及內(nèi)膜新生的作用研究:采用大鼠頸動脈球囊損傷方法建立內(nèi)膜增生模型,通過HE染色觀察血管的形態(tài),分析并計算血管的管腔面積、內(nèi)膜面積、中膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比,并用免疫熒光染色檢測增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和CD31的表達(dá)水平并分別計算陽性率和熒光面積。2.薯蕷皂苷對體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞增殖遷移及表型轉(zhuǎn)換的作用研究:體外培養(yǎng)原代大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞,用MTT法檢測薯蕷皂苷對平滑肌細(xì)胞增殖的影響,用western blot方法檢測PCNA的蛋白表達(dá)進(jìn)一步確認(rèn)藥物對細(xì)胞增殖的作用,用劃痕實驗檢測薯蕷皂苷對平滑肌細(xì)胞遷移的影響,并用western blot法和RT-q PCR實驗法檢測薯蕷皂苷對細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換的影響。同時檢測薯蕷皂苷對內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響。3.薯蕷皂苷抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移的作用機制研究:用western blot實驗檢測磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)的活性和叉頭盒轉(zhuǎn)錄基因M1(Fox M1)的表達(dá),用RT-q PCR法檢測Fox M1及其下游靶基因的表達(dá)水平。過表達(dá)和敲減Fox M1后,采用MTT法和劃痕實驗檢測Fox M1在血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移中的作用。結(jié)果:1.薯蕷皂苷抑制大鼠頸動脈損傷后平滑肌細(xì)胞增殖以及內(nèi)膜新生:大鼠頸動脈損傷后管腔面積明顯減少,內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積顯著增加,表明成功的建立了頸動脈損傷后內(nèi)膜增生模型。與模型組比較,薯蕷皂苷高劑量組的管腔面積顯著增加,內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積顯著下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。損傷動脈內(nèi)膜PCNA和α-SMA表達(dá)顯著增加,與模型組比較,薯蕷皂苷高劑量組顯著降低了PCNA陽性率和α-SMA熒光面積(P0.01)。薯蕷皂苷低劑量組有降低新生內(nèi)膜面積和平滑肌增殖的趨勢,但和模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。CD31的免疫熒光結(jié)果顯示,薯蕷皂苷不影響血管損傷后再內(nèi)皮化(P0.05)。2.薯蕷皂苷抑制體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換:MTT實驗結(jié)果顯示,薯蕷皂苷能抑制10%FBS所誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖,并且作用強度呈劑量依賴性,western blot檢測發(fā)現(xiàn)薯蕷皂苷能顯著降低PCNA的蛋白表達(dá)水平。劃痕實驗結(jié)果顯示,薯蕷皂苷可以抑制20ng/ml PDGF所誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞的遷移。此外,薯蕷皂苷還可以使平滑肌細(xì)胞收縮表型標(biāo)志物α-SMA、SM22α表達(dá)增多,合成表型標(biāo)志物OPN表達(dá)減少。而相同劑量的薯蕷皂苷對內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移沒有影響。3.薯蕷皂苷通過抑制ERK1/2-Fox M1通路抑制平滑肌細(xì)胞的增殖遷移:Western blot和RT-q PCR實驗結(jié)果顯示,薯蕷皂苷可以降低ERK1/2磷酸化活性,并降低Fox M1及其下游靶基因的表達(dá)。MTT法和劃痕實驗結(jié)果顯示,過表達(dá)Fox M1能促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,但敲減Fox M1則抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。結(jié)論:1.薯蕷皂苷可以抑制大鼠頸動脈損傷后的內(nèi)膜增生,這與其抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖作用有關(guān),提示薯蕷皂苷可能對PCI術(shù)后血管再狹窄有積極的防治作用。2.薯蕷皂苷可以抑制由FBS或者PDGF誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的原代大鼠血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換。3.薯蕷皂苷是通過抑制ERK1/2-Fox M1通路抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移的。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

14圖 1 薯蕷皂苷對大鼠頸動脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用A 圖為左側(cè)未損傷和右側(cè)損傷的頸總動脈 HE 染色圖（×100 和×200）；B、C、D和 E 圖分別為管腔面積、內(nèi)膜面積、中膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比的統(tǒng)計分析圖。實驗結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean ±SEM）表示，##P < 0.01 vs normal group；**P <0.01 vs model group，n=10。1.2.2 薯蕷皂苷對體內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用

16圖 2 薯蕷皂苷對體內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用A 圖為 PCNA 和 -SMA 的免疫熒光染色圖（×200）；B 圖為 PCNA 細(xì)胞陽性率的統(tǒng)計分析圖；C 圖為 -SMA 熒光面積的統(tǒng)計分析圖。實驗結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean ±SEM）表示，**P < 0.01 vs model group，n=10。1.2.3 薯蕷皂苷對體內(nèi)再內(nèi)皮化的作用PCI 術(shù)后再狹窄是血管損傷后傷口愈合的過度反應(yīng)，而再內(nèi)皮化是正常傷口愈合所必需的[23]。治療再狹窄的理想藥物應(yīng)該抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖并不影響體內(nèi)再內(nèi)皮化，因此，我們采用 CD31 的免疫熒光染色法檢測薯蕷皂苷對體內(nèi)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 許麗娜;衛(wèi)永麗;彭金詠;;天然產(chǎn)物薯蕷皂苷的研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2015年01期

2 蘇健;郭衛(wèi)莉;李欣;康毅;高衛(wèi)真;;薯蕷皂苷對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年02期

3 郭春宏;劉欣;康毅;;薯蕷皂苷抗大鼠心肌缺血再灌損傷的分子機制[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2009年16期

本文編號：2717363