發(fā)布時間：2020-06-14 22:58

【摘要】：目的:研究紅花蜂花粉多糖組分Ⅰ(PBPC I)的體內(nèi)抑瘤作用與作用機制。方法:以紅花蜂花粉為原料,利用水提醇沉法提取總多糖,脫蛋白后,通過DEAE—52纖維素柱層析分離,Saphadex-G75柱層析純化,得到PBPCⅠ。將60只BALB/c雌性小鼠隨機分為6組,正常對照組、腫瘤模型組、環(huán)磷酰胺(CTX)組以及PBPCⅠ低、中、高劑量組,每組10只。除正常對照組外,其余各組均在小鼠的右前肢腋窩皮下各注射細胞密度為1 × 10~7個/ml的0.2ml H22肝癌細胞,建立H22肝癌腫瘤模型。PBPCⅠ低、中、高劑量組每天分別灌胃給予 PBPCⅠ 100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg,CTX 組每天皮下注射 CTX 30mg/kg。正常對照組與腫瘤模型組每天灌胃給予等容積的生理鹽水,連續(xù)15天。末次給藥后,各組小鼠禁食不禁水12h,摘眼取血,分離血清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法鋇測血清中 IL-1α、IL-6、IFN-γ、TNF-κ、IL-2、VEGF含量。小鼠稱體質(zhì)量后,脫頸處死,剝離瘤塊,取脾臟及胸腺,分別稱質(zhì)量,計算抑瘤率與免疫器官指數(shù)。HE染色法分別觀察各組的細胞形態(tài)變化。通過實時定量PCR(RT-qPCR)實驗觀察bax、p53、c-myc、bcl-2基因的相對表達量;蛋白質(zhì)印跡(Westemblot)實驗測定Bax、P53、C-myc、Bcl-2的蛋白表達量。結(jié)果:與腫瘤模型組相比,CTX組和PBPC I低、中、高劑量組對小鼠H22肝癌的抑瘤率分別為67.93%、33.48%、45.69%、57.86%,差異顯著。同時PBPCⅠ低、中、高劑量組還能顯著提高荷瘤小鼠體質(zhì)量、免疫器官指數(shù),并明顯升高荷瘤小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-a水平,降低血清IL-1a、IL-6、VEGF水平。HE染色結(jié)果示,隨著PBPC I劑量的升高,腫瘤組織疏松,細胞減少,核濃縮、核碎裂、核分裂的一些凋亡特征。RT-qPCR實驗表明PBPC I各劑量組均能下調(diào)c-myc、bcl-2基因轉(zhuǎn)錄,并上調(diào)bax、p53基因轉(zhuǎn)錄。同時Western blot實驗進一步證實,PBPC I低、中、高各劑量組均可使腫瘤組織的Bcl-2、C-myc蛋白表達量降低,使Bax、P53蛋白的表達量升高。結(jié)論:PBPCⅠ對H22荷瘤小鼠具有明顯的抑瘤作用,其作用機制可能通過保護免疫器官、調(diào)控免疫因子與VEGF水平,調(diào)節(jié)Bcl-2、C-myc、Bax、P53表達水平而促進腫瘤細胞凋亡,抑制腫瘤的分裂增殖與生長。
【學位授予單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

PBPCⅠ對H22荷瘤小鼠腫瘤生長的影響

圖 2.2 各組 H22 荷瘤小鼠組織 HE 染色的結(jié)果：Low，100mg/kg、Middle，200mg/kg、 High，400mg/kg 、Control 與 Model，0.1ml/10g NaCl、 CTX30mg/kg

【參考文獻】

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本文編號：2713485