發(fā)布時間：2020-06-12 22:08

【摘要】：背景慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis,CP)各種病因引起胰腺組織和功能不可逆轉(zhuǎn)的慢性炎癥性疾病,發(fā)病率有逐年增高的趨勢。由于其發(fā)病機(jī)制迄今為止還未明確,所以目前臨床治療上缺乏有針對性的有效藥物。近年研究顯示,抑制Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)信號通路的啟動可能有助于CP的防治。而micro RNAs可以在多個水平調(diào)節(jié)TLR4信號通路。氧化苦參堿(Oxymatrine,OM)是一種藥用生物堿,具有抗炎、抗纖維化等多種藥理作用,可抑制TLR4信號通路。目的預(yù)測靶向TLR4的micro RNAs并驗證其是否參與調(diào)節(jié)TLR4/NF-κB通路;驗證目標(biāo)micro RNAs是否通過調(diào)節(jié)TLR4/NF-κB通路參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)從而改善纖維化;探討OM對TLR4/NF-κB通路以及炎癥反應(yīng)的抑制作用是否通過micro RNAs實現(xiàn)。方法1)生物信息學(xué)預(yù)測:利用Target Scan7,miranda預(yù)測TLR4相關(guān)的micro RNAs并查找相關(guān)文獻(xiàn)/芯片,尋找交集。2)將胰腺星狀細(xì)胞(LTC-14細(xì)胞株)分為4組,Control組,LPS組,OM+LPS組,OM組。通過實時熒光定量PCR(Quantitative Rea-ltime-PCR,q PCR)來篩選目的micro RNAs;利用q PCR、蛋白芯片檢測LTC-14細(xì)胞內(nèi)TLR4/NFκB信號通路及炎性因子的變化;并對以上變化進(jìn)行相關(guān)性分析以進(jìn)一步篩選目的micro RNAs。3)分別通過轉(zhuǎn)染oligo過表達(dá)micro RNAs 0 h、24 h、48 h、72 h,于不同時間點通過Western Blot檢測TLR4/NF-κB通路的關(guān)鍵節(jié)點分子(TLR4、髓樣細(xì)胞分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子κB的抑制蛋白α(nuclear factor ofkappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα)、核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB))蛋白的表達(dá)情況,確定oligo轉(zhuǎn)染的最佳作用時間以及最佳目的micro RNA。4)過表達(dá)目的micro RNA,利用ELISA試劑盒測定LPS刺激及micro RNA過表達(dá)對炎性因子和纖維化因子的影響。結(jié)果LPS刺激激活LTC-14細(xì)胞后,micro RNA-145-3p、micro RNA-152、micro RNA-322表達(dá)量上升,micro RNA-30b-5p、micro RNA-384-5p、micro RNA-211-5p、micro RNA-126表達(dá)量下降;OM干預(yù)后,micro RNA-30b-5p、micro RNA-211-5p表達(dá)量回升。LPS刺激激活LTC-14細(xì)胞后,TLR4/NF-κB通路的關(guān)鍵節(jié)點分子(TLR4、My D88、IκBα、NF-κB)及炎性因子(TNF-α、IFNg、IL-1α、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13)m RNA表達(dá)水平上升,炎性因子(TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6)分泌量上升;OM干預(yù)后炎性因子(TNF-α、IL-1α、IL-2、IL-6)m RNA表達(dá)水平回落,炎性因子(TNF-α、IL-6)分泌量下降。在LTC-14細(xì)胞內(nèi)多個micro RNAs與TLR4/NF-κB通路的關(guān)鍵節(jié)點分子呈負(fù)相關(guān)。過表達(dá)micro RNA-30b-5p、micro RNA-211-5p、micro RNA-384-5p可以下調(diào)LTC-14細(xì)胞內(nèi)TLR4/NF-κB通路的關(guān)鍵節(jié)點分子(TLR4、My D88、NF-κB)蛋白表達(dá),過表達(dá)micro RNA-30b-5p可以下調(diào)LTC-14細(xì)胞炎性因子TNF-α和纖維化因子FN、ColⅠ的分泌。結(jié)論Micro RNA-30b-5p可能通過抑制TLR4/NF-κB通路的表達(dá),從而減弱LTC-14細(xì)胞炎癥反應(yīng)、改善纖維化。OM對LTC-14細(xì)胞炎癥反應(yīng)、纖維化的調(diào)節(jié)可能是通過影響micro RNA-30b-5p而實現(xiàn)的。
【圖文】：

38圖 1. OM 對 LPS 誘導(dǎo)的 LTC-14 細(xì)胞內(nèi) microRNAs 表達(dá)的影響。與 Control 組比較：*P<0.05，**P<0.01；與 LPS 組：比較#P<0.05。

39圖 2. OM 對 LPS 誘導(dǎo)的 LTC-14 細(xì)胞內(nèi) microRNAs 表達(dá)的影響。與 Control 組比較：*P<0.05，**P<0.01；與 LPS 組比較：#P<0.05，，##P<0.01。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2710179