發(fā)布時(shí)間：2020-06-12 20:09

【摘要】：目的:篩選出抗小瓜蟲病的有效中藥復(fù)方W,制備中藥復(fù)方W最佳提取物,為中藥復(fù)方W在防治小瓜蟲病的運(yùn)用提供依據(jù)。方法:(1)以感染小瓜蟲的動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,建立藥效學(xué)評(píng)價(jià)方法,對(duì)13個(gè)中藥復(fù)方進(jìn)行殺蟲試驗(yàn)篩選。(2)建立復(fù)方W的紫外分析方法,對(duì)提取方法、粉碎度、溶媒用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)等單因素進(jìn)行考察,優(yōu)選出各單因素水平,采用L_9(3~4)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出復(fù)方W的最佳提取工藝。(3)制備1g/ml的中藥復(fù)方W最佳提取物。(4)根據(jù)不同濃度的復(fù)方W提取物對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的進(jìn)行安全性試驗(yàn),把試驗(yàn)動(dòng)物的平均死亡率轉(zhuǎn)換成概率單位,采用Bliss法計(jì)算分析試驗(yàn)動(dòng)物24、48、96 h的的半致死濃度LC50,采用spss20.0軟件中的Probit概率單位分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。(5)以丁醇—醋酸—水(4:2:1)為展開劑,碘化鉍鉀試液為顯色劑,采用薄層色譜法對(duì)中藥復(fù)方W最佳提取物進(jìn)行定性鑒別。(6)選用流動(dòng)相:乙腈—水(28:72);檢測(cè)波長(zhǎng)205nm,采用高效液相法測(cè)定復(fù)方W最佳提取物中指標(biāo)成分H的含量。(7)對(duì)1g/ml的中藥復(fù)方W最佳提取物進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。結(jié)果:篩選出殺小瓜蟲的有效中藥復(fù)方W,建立了復(fù)方W的紫外評(píng)價(jià)方法,最大吸收波長(zhǎng)是475nm,方法學(xué)考察的各項(xiàng)RSD值均小于2%;優(yōu)化出復(fù)方W最佳提取物制備工藝為:粉碎過60目篩網(wǎng),選用溶媒75%乙醇,回流法提取2次,每次60min,溶媒用量每次為10倍;制備了中藥復(fù)方W最佳提取物,以丁醇—醋酸—水(4:2:1)為展開劑,對(duì)提取物進(jìn)行薄層色譜鑒別,對(duì)照品和對(duì)照品藥材、供試品溶液的指示斑點(diǎn)一致,Rf值為0.55;藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中藥復(fù)方W最佳提取物在40mg/L,53小時(shí)對(duì)小瓜蟲的殺滅率為100%,觀察96h期間實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無異常情況。結(jié)論:中藥復(fù)方W最佳提取物抗小瓜蟲病安全有效,為開發(fā)新藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

圖 3-1 中藥各方提取物 72h 殺蟲率由上圖表結(jié)果可知，藥物濃度設(shè)計(jì)在 10、20、30、40、60、80、100、200mg/L時(shí)，該濃度范圍內(nèi)對(duì)小瓜蟲沒有明顯殺滅作用的方有 ED、FD、GD、LD、MD、CK、HK、LK、HZ、MZ、QZ，最高殺蟲率小于 20％；根據(jù)前面建立的抗小瓜蟲藥效評(píng)價(jià)方法，W 方提取物殺蟲劑量為 60mg/L,殺蟲率可達(dá) 100%，且未出現(xiàn)魚死亡。因而，W 方是有效地殺滅小瓜蟲的中藥復(fù)方。顯微鏡觀察比較使用復(fù)方 W 提取物前后小瓜蟲病魚，結(jié)果見下圖 3-2、3-3所示：

圖 3-1 中藥各方提取物 72h 殺蟲率由上圖表結(jié)果可知，藥物濃度設(shè)計(jì)在 10、20、30、40、60、80、100、200m時(shí)，該濃度范圍內(nèi)對(duì)小瓜蟲沒有明顯殺滅作用的方有 ED、FD、GD、LD、MCK、HK、LK、HZ、MZ、QZ，最高殺蟲率小于 20％；根據(jù)前面建立的抗小瓜蟲效評(píng)價(jià)方法，，W 方提取物殺蟲劑量為 60mg/L,殺蟲率可達(dá) 100%，且未出現(xiàn)魚亡。因而，W 方是有效地殺滅小瓜蟲的中藥復(fù)方。顯微鏡觀察比較使用復(fù)方 W 提取物前后小瓜蟲病魚，結(jié)果見下圖 3-2、所示：
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2710048