【摘要】：無花果葉在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中已有上千年的使用歷史,在長期的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)具有很好的臨床療效,是一種重要的中藥材。但是當(dāng)前對其開發(fā)利用不足,更多的是作為無花果種植而伴生的農(nóng)副產(chǎn)物,造成了極大的資源浪費(fèi)。因此研究無花果葉的開發(fā)利用,可以增加無花果種植業(yè)的附加值和經(jīng)濟(jì)效益。補(bǔ)骨脂素具有很多重要的臨床用途,無花果葉中含有豐富的補(bǔ)骨脂素及其前體補(bǔ)骨脂苷,以無花果葉為原料生產(chǎn)補(bǔ)骨脂素可以豐富原料來源,降低生產(chǎn)成本。當(dāng)前對無花果葉中補(bǔ)骨脂素的提取分離研究還十分落后,缺乏高效的方法。為了更好的利用無花果葉,開發(fā)高效的從無花果葉中獲取補(bǔ)骨脂素的方法,本論文主要做了以下三方面的工作:1.建立了定量分析無花果葉中補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷的高效液相色譜方法:流動(dòng)相:0.1%甲酸水(A)-乙腈(B);色譜柱:Luna C18(5 μm,250 mm × 4.6 mm i.d.);洗脫條件為:0-10 min,13-16%(B);10-11 min,16-17%(B);11-25 min,17%(B);25-55 min,17-65%(B);進(jìn)樣量:5μL;流速 1mL/min;檢測波長:254nm;柱溫30 ℃。該方法對補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷在檢測范圍內(nèi),線性關(guān)系良好(R2 2 0.99),檢出限分別為0.22和0.17 μg/mL,定量限分別為0.68和0.52μg/mL,精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性均小于5%。加樣回收率為97.88%～99.01%,R.S.D.均小于4%。結(jié)果表明該方法靈敏、準(zhǔn)確、穩(wěn)定,為無花果葉中補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷的定量提供了方法。2.我們首次開發(fā)和優(yōu)化了超聲輔助的pH依賴基于離子液體的雙水相體系提取富集技術(shù),可以一步實(shí)現(xiàn)無花果葉中補(bǔ)骨脂苷高效轉(zhuǎn)化為補(bǔ)骨脂素以及補(bǔ)骨脂素的提取和富集。并對工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,確定了最優(yōu)的參數(shù):離子液體酸水溶液組成:1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽、檸檬酸和水。提取和轉(zhuǎn)化過程中最佳參數(shù)如下:pH:2.21,離子液體濃度:2.01 M,液固比:15.35 mL/g。純化過程中最佳參數(shù):1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽含量:37.04%wt檸檬酸含量,30.21%wt,pH:7.0。在上述最佳的工藝參數(shù)下,補(bǔ)骨脂素的提取率為31.22 mg/g(n=3),回收率為96.32%(n=3)。結(jié)果表明本研究所開發(fā)的方法可以通過調(diào)節(jié)體系的pH便可同時(shí)實(shí)現(xiàn)將補(bǔ)骨脂苷轉(zhuǎn)化為補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素的提取富集。該方法將傳統(tǒng)模式中生產(chǎn)天然產(chǎn)物的提取、轉(zhuǎn)化和純化三個(gè)獨(dú)立的操作單元,僅僅通過調(diào)節(jié)pH而融合為一個(gè)過程中,具有提取率高、成本低和操作簡單等特點(diǎn)。3.建立了高速逆流色譜純化無花果葉中和補(bǔ)骨脂素和佛手柑內(nèi)酯的方法:佛手柑內(nèi)酯是無花果葉子提取物中的主要成分之一,本部分研究以石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑萃取上述提取富集溶液以獲得補(bǔ)骨脂素和佛手柑內(nèi)酯的分離樣品。通過篩選得到了最適于分離補(bǔ)骨脂素和佛手柑內(nèi)酯的溶劑體系,其組成為:正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:5:5;v:v:v)。當(dāng)轉(zhuǎn)速800 rmp、流速2 mL/min和上樣量200 mg時(shí),一次制備可以得到40.93 mg補(bǔ)骨脂素和4.09 mg佛手柑內(nèi)酯。高效液相色譜分析結(jié)果表明分得的補(bǔ)骨脂素的純度為97.9%,回收率為99.1%,每克無花果葉中補(bǔ)骨脂素的得率為3.01%。佛手柑內(nèi)酯的純度為96.76%,回收率為98.8%,每克無花果葉中佛手柑內(nèi)酯的得率為0.644%。與常規(guī)分離方法相比,高速逆流色譜具有操作簡單、分離時(shí)間短、得到的化合物純度高、回收率高、在制備過程中化合物不易分解的優(yōu)點(diǎn)。由以上結(jié)果可知,在本文所建立和優(yōu)化的超聲輔助的pH依賴基于離子液體的雙水相體系提取富集技術(shù)結(jié)合高速逆流色譜制備技術(shù),可以制備得到的補(bǔ)骨脂素的純度為97.9%,每克無花果葉中補(bǔ)骨脂素的得率為3.01%,得到的佛手柑內(nèi)酯的純度為96.76%,每克無花果葉中佛手柑內(nèi)酯的得率為0.644%。本研究有利于無花果葉的開發(fā)和利用,也為天然產(chǎn)物的綠色提取和分離提供了新思路。
【圖文】：

．．流動(dòng)相：０．１邋％甲酸水溶液（Ａ），乙腈（Ｂ）；洗脫梯度：０－１０邋ｍｉｎ，邋１３－１６邋％邋Ｂ；逡逑１０－１１邋ｍｉｎ，邋１６－１７邋％邋Ｂ；邋１１－２５邋ｍｉｎ，１７邋％邋Ｂ；邋２５－５５邋ｍｉｎ，邋１７－６５邋％邋Ｂ；進(jìn)樣量：５邋ｐＬ；流逡逑速：ｌｍＬ／ｍｉｎ；檢測波長：２５４ｎｍ，柱溫：３０邋°Ｃ。逡逑２．２結(jié)果與討論逡逑２．２．１色譜條件的優(yōu)化逡逑為了使樣品中補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷達(dá)到基線分離，首先對色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。流逡逑動(dòng)相及洗脫梯度對樣品的分離有很大的影響，，為了選擇最佳的流動(dòng)相，分別對乙腈－逡逑水、甲醇－水以及其分別加入甲酸和四氫呋喃后對分離的影響進(jìn)行了考察。發(fā)現(xiàn)０．１邋％甲逡逑酸－水及乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，對樣品的分離效果好，峰型尖銳對稱，因此作為流動(dòng)相。逡逑為了進(jìn)一步優(yōu)化分離效果，對洗脫梯度進(jìn)行了優(yōu)化，得到了最佳的洗脫梯度：０－１０ｍｉｎ，逡逑１３－１６邋％邋Ｂ；邋１０－１１邋ｍｉｎ，邋１６－１７邋％邋Ｂ；邋１１－２５邋ｍｉｎ，邋１７邋％邋Ｂ；邋２５—５５邋ｍｉｎ，邋１７－６５邋％邋Ｂ。檢測波長逡逑對分析的靈敏度有很大的影響，通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷在２５４邋ｎｍ下吸逡逑光系數(shù)較大，因此在本文中選擇２５４邋ｎｍ作為檢測波長。在柱溫為３０邋°Ｃ，流速為１逡逑ｍＬ／ｍｉｎ時(shí)，按上面確定的條件對樣品進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂苷都達(dá)逡逑到了基線分離，且峰型尖銳對稱，如圖２－１所示。逡逑

補(bǔ)骨脂素而增加補(bǔ)骨脂素的提取率，我們選擇與檸檬酸（ｐＨ＝２）組成的混合逡逑溶劑作為提取溶劑，并選擇［Ｂｍｉｍ］Ｂｒ，乙醇，乙醇加檸檬酸（ｐＨ＝２）作為對照進(jìn)行試逡逑驗(yàn)。結(jié)果如圖３－４所示，對比［Ｂｍｉｍ］Ｂｒ和［Ｂｍｉｍ］Ｂｒ加梓檬酸（ｐＨ＝２），補(bǔ)骨脂苷的提逡逑取率從９．７６邋ｍｇ／ｇ降低到０．０９８邋ｍｇ／ｇ，而補(bǔ)骨脂素的提取率從２０．８９邋ｍｇ／ｇ增大到３０．２１逡逑ｍｇ／ｇ。對比乙醇和乙醇加檸檬酸（ｐＨ＝２），補(bǔ)骨脂苷的提取率從１５．３２邋ｍｇ／ｇ降低到逡逑１０．１１邋ｍｇ／ｇ，而補(bǔ)骨脂素的提取率從８．２１邋ｍｇ／ｇ增大到１２．３４邋ｍｇ／ｇ。這些結(jié)果表明，酸的逡逑加入可以將補(bǔ)骨脂苷轉(zhuǎn)化為補(bǔ)骨脂素，增大補(bǔ)骨脂素的提取效率。相比于乙醇加檸檬酸逡逑（ｐＨ＝２），［Ｂｍｉｍ］Ｂｒ加檸檬酸（ｐＨ＝２）的轉(zhuǎn)化效率更高，由于其更強(qiáng)的催化能力和溶解能逡逑力。加檸檬酸（ＰＨ＝２）體系是最佳的提取無花果葉中補(bǔ)骨脂素溶劑體系。逡逑３５－１邐ｍｉ邋Ｐｓｏｒａｌｅｎ逡逑Ｂ邋３0－邐丁邐Ｉ＊邋ｐｓｏｒａｌｉｃ邋ａｃｉｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ逡逑圖３－４酸的加入對無花果葉中補(bǔ)骨脂苷的轉(zhuǎn)化和補(bǔ)骨脂素提取率的影響逡逑Ｆｉｇ．邋３－４邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ａｃｉｄ邋ｏｎ邋ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋ｐｓｏｒａｌｉｃ邋ａｃｉｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ邋ｉｎｔｏ邋ｐｓｏｒａｌｅｎ邋ａｎｄ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｐｓｏｒａｌｅｎ邋ｆｒｏｍ逡逑ｆｉｇ邋ｌｅａｖｅｓ逡逑？邋２３－逡逑
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.2

【參考文獻(xiàn)】

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