【摘要】：目的:以雪上一枝蒿和金不換這一藥對為研究對象,研究雪上一枝蒿(ABD)與金不換(VBF)合煎以及雪上一枝蒿氯仿部位(CFA)和金不換水提物(WVBF)合并配伍這兩種提取工藝后的化學成分變化,以期從化學成分角度闡明雪上一枝蒿-金不換藥對配伍的科學內涵,以及兩種配伍的區(qū)別,并通過動物實驗探討兩者配伍的毒性變化和鎮(zhèn)痛抗炎功效,比較配伍前后的毒性和藥效變化,探究最佳配比。方法:(1)采用高效液相(HPLC)及核磁技術(NRM),對比雪上一枝蒿和金不換合并和合煎配伍前后的色譜峰圖,并對化學成分的變化進行分析,探究變化原因。(2)建立斑馬魚心血管功能評價模型,分別隨機選擇10尾斑馬魚在顯微鏡下統(tǒng)計心率和觀察有無心血管毒性表型,確定最佳濃度,再在該濃度下設置4組不同配比進行平行實驗,評價CFA和WVBF不同配伍的心血管毒性。(3)上下法和改良寇氏法測雪上一枝蒿和金不換不同比例配伍的半數致死量(LD_(50)),比較合煎和合并配伍后的毒性變化;(4)以熱板法和冰醋酸致小鼠扭體法為致痛模型,比較CFA,以及CFA和WVBF按1:2和1:5比例配伍組對小鼠中樞和外周的鎮(zhèn)痛作用。以小鼠耳腫脹法評價雪上一枝蒿和金不換不同比例(1:1,1:2,1:5)合煎配伍的抗炎作用,用甩尾法實驗比較兩藥配伍前后對小鼠甩尾潛伏期的影響。結果:(1)經HPLC圖譜發(fā)現CFA和WVBF合并配伍后的化學成分與單獨的CFA和WVBF相比沒有明顯變化,未發(fā)生化學層次的變化,而雪上一枝蒿、金不換單煎液與合煎液相比化學成分卻存在明顯差異,雪上一枝蒿-金不換配伍HPLC色譜出現4個明顯的新峰,經核磁鑒定出了結構,為金不換中的口山酮類成分;(2)在心血管毒性評價實驗中,單藥CFA除了200 mg·L~(-1)濃度組外,其他濃度組對斑馬魚心率都沒有影響,不誘發(fā)斑馬魚心律不齊,66.6和200 mg·L~(-1)濃度可誘發(fā)斑馬魚毒性表型。在不同配伍組心血管毒性評價實驗中,除了1:5配伍組,別的實驗組都誘發(fā)明顯的心血管毒性表型。(3)小鼠急性毒性實驗中,CFA與WVBF四個不同比例(5:1,2:1,1:2,1:5)合并配伍的LD_(50)依次增加,均高于CFA用上下法測定的LD_(50),而改良寇氏法測得的5個合煎配伍組(5:1,2:1,1:1,1:2,1:5)LD_(50)均介于兩個單煎液之間,說明配伍降低了雪上一枝蒿的急性毒性,并且金不換的比例越高解毒效果越好。(4)熱板試驗結果表明,CFA和WVBF按1:2和1:5配伍組均可延長小鼠的舔足痛閾時間,其中按1:2比例混合給藥組(20 mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛百分率比單獨給予CFA(20mg·kg~(-1))和陽性對照阿司匹林組(200 mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛百分率要高,而在給藥90 min后1:2配伍組的鎮(zhèn)痛百分率與CFA組接近,均高于陽性對照組,說明1:2比例組有減毒存效的作用。1:5配伍組的鎮(zhèn)痛百分率在給藥30,60,90 min后逐漸增加,且顯著高于CFA組,說明1:5比例組有減毒增效和延效作用。(5)扭體試驗結果顯示,各比例配伍組均能有效抑制冰醋酸誘導的小鼠扭體反應,其中1:2配伍組(20 mg·kg~(-1))的扭體抑制率低于單獨給予CFA組(20 mg·kg~(-1));1:5混合給藥組(20 mg·kg~(-1))的扭體抑制率略高于CFA組(20 mg·kg~(-1))。表明在外周鎮(zhèn)痛方面,1:2配伍組有減毒減效作用,1:5配伍組有較弱的減毒增效功效。(6)小鼠耳腫脹試驗表明,各配伍給藥組均能有效減輕二甲苯所致小鼠的耳炎癥,其中1:1(500 mg·kg~(-1))和1:2(875 mg·kg~(-1))合煎給藥組的腫脹抑制率低于單獨給予雪上一枝蒿單煎液組和吲哚美辛陽性對照組。1:5(1750 mg·kg~(-1))合煎給藥組的小鼠耳腫脹抑制率與阿司匹林組(20 mg·kg~(-1))接近,略低于單煎液組(125 mg·kg~(-1))。表明抗炎方面1:1和1:2配伍組有減毒減效作用,1:5配伍組存在減毒存效功效。(7)小鼠熱水縮尾試驗表明,雪上一枝蒿單煎液(125 mg·kg~(-1)),以及和金不換按各個比例配伍組與空白對照組相比,均可提高小鼠的甩尾痛閾值,其中雪上一枝蒿單煎液的鎮(zhèn)痛百分率最高,大于各配伍組和陽性對照組(20mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛百分率,其中按1:1(500 mg·kg~(-1))和1:2比例配伍合煎組(875mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛百分率相近,都小于吲哚美辛陽性對照組(20 mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛效果。1:5比例合煎組(1750 mg·kg~(-1))的鎮(zhèn)痛效果比陽性對照組稍好,而各個組在90 min后的鎮(zhèn)痛百分率與30 min相比是降低的,說明各個組的鎮(zhèn)痛效果是隨著時間逐漸下降的,并且與單煎液相比,各比例合煎組有減毒減效作用。結論:雪上一枝蒿與金不換合煎配伍HPLC色譜峰發(fā)生明顯的變化,可促進金不換中口山酮類成分的溶出。無論合并還是合煎,雪上一枝蒿和金不換以不同比例配伍均可減輕雪上一枝蒿誘發(fā)的毒性,并且金不換比例越高,減毒效果越好,1:5配伍組鎮(zhèn)痛抗炎效果最好,為兩者配伍的臨床合理用藥提供了有效依據。
【圖文】：

1.2.5 配伍前后化學成分變化通過對比雪上一枝蒿與金不換這一藥對合并與合煎配伍前后 HPLC 圖，發(fā)現合并配伍的色譜峰沒有明顯的變化，而兩藥合煎液在此色譜條件下的原色譜峰基本消失，并且合煎條件下產生了 4 個明顯的新色譜峰，而在前期做的合并液未見上述變化，表明合煎是化學成分變化的原因，并且 4 個新色譜峰的峰面積隨著金不換比例的增加而增加。CFA 和 WVBF 的液相圖譜在上述色譜條件 A 和 B 下，兩種藥材中的有效成分均有對應的色譜峰，并且峰形良好，，保留時間相近，不受雜質峰的影響，如圖1-1 和 1-2，不同比例合并配伍后，與 CFA 相比，色譜圖并沒有明顯的變化，如圖 1-3。

圖 1-2 WVBF 對照品及樣品溶液 HPLC 圖Fig 1-2 HPLC chromatograms of reference substances(A) and WVBF(B)A：對照品溶液；B：供試品溶液；1：獐牙菜苦苷；2：龍膽苦苷；3：獐牙菜苷
【學位授予單位】：中南民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2708106