【摘要】：目的:探索淫羊藿苷(ICA)對后肢缺血大鼠模型血管新生的作用及可能的作用機制。方法:動物實驗采用單側(cè)股動脈結(jié)扎并離斷制備后肢缺血大鼠模型,實驗隨機分組:空白+ICA 40 mg/kg,模型組,模型+ICA 10 mg/kg,模型+ICA 20 mg/kg,模型+ICA 40 mg/kg。HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化,血管造影觀察血管側(cè)支循環(huán),毛細(xì)血管密度檢測微血管數(shù)量,免疫組織化學(xué)檢測內(nèi)皮細(xì)胞增殖,以及Western blot檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF),VEGFA,血管生長因子受體2(VEGFR_2),p-VEGFR_2,蛋白激酶B(Akt),p-Akt,內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS),p-eNOS的水平。細(xì)胞實驗采用人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1),ICA單獨給藥,以及加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制劑LY 294002及eNOS抑制劑L-NAME后,觀察ICA對HMEC-1增殖作用的影響,并采用BrdU酶聯(lián)免疫吸附試驗觀察HMEC-1增殖情況,Western blot檢測VEGF,VEGFA,VEGFR_2,p-VEGFR_2,Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS蛋白水平。結(jié)果:動物實驗中,與空白組相比,模型組腓腸肌呈缺血樣改變,給予ICA后缺血樣損傷明顯改善;血管造影及免疫組化結(jié)果表明,與空白組相比,模型組可見部分側(cè)支血管生長及內(nèi)皮細(xì)胞增殖,微血管生長明顯減少,與模型組相比,ICA給藥后缺血肢體的側(cè)支循環(huán)、內(nèi)皮細(xì)胞增殖及微血管生長明顯增加;Western blot顯示,與空白組相比,模型組VEGF,VEGFA,p-VEGFR_2,p-Akt及p-eNOS蛋白表達(dá)均明顯減少,經(jīng)ICA給藥后上述蛋白水平顯著增加。細(xì)胞實驗中,與空白組相比,ICA給藥明顯促進(jìn)HMEC-1的BrdU水平;與空白組相比,ICA給藥組促進(jìn)HMEC-1增殖后的VEGF,p-VEGFR_2,p-Akt及p-eNOS蛋白表達(dá);加入PI3K抑制劑LY 294002及eNOS抑制劑L-NAME后ICA誘導(dǎo)HMEC-1的增殖作用被抑制。結(jié)論:ICA具有促進(jìn)缺血肢體血管生成的作用,其機制與激活VEGF介導(dǎo)的PI3K/Akt-eNOS信號通路相關(guān)。
【圖文】：

義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 陸小鳳2 結(jié)果.1 ICA 對單側(cè)后肢缺血大鼠模型的缺血性損傷的影響根據(jù)股動脈血運的組織支配，結(jié)扎離斷后腓腸肌缺血受損明顯，，故采用腓腸觀察藥物作用。腓腸肌橫斷面 HE 染色顯示，缺血后細(xì)胞胞質(zhì)嗜酸性增強，細(xì)體積減小，細(xì)胞核消失，肌纖維間隙增寬[28]。如圖 1 所示，腓腸肌細(xì)胞出現(xiàn)缺性改變。給予 ICA 后，與模型組相比，腓腸肌細(xì)胞體積、肌細(xì)胞核及肌纖維隙均有所改善。

義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 陸小鳳.4 HMEC-1 細(xì)胞的鑒定HMEC-1 細(xì)胞貼壁生長 24 h 后，細(xì)胞呈多角形，胞質(zhì)均勻透明，可見細(xì)胞“鋪路石”樣排列。經(jīng)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記物 CD34 抗體行免疫熒光化學(xué)染色鑒，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞 CD34 陽性表達(dá)率為 100 %，PBS 對照組細(xì)胞漿無熒光（圖 4）。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2707471