【摘要】：目的從神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸的角度探討六味地黃湯及其三個“一補一瀉”藥對滋補腎陰的作用及其機制,并比較六味地黃湯及其補腎作用有效的“一補一瀉”藥對中所含主要成分的含量,從而明確該方的補腎作用及其機制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和組方原理。方法將60只小鼠隨機分為空白對照組、腎陰虛模型組、六味地黃湯組、山茱萸-牡丹皮組、熟地黃-澤瀉組、山藥-茯苓組共6個實驗組;連續(xù)9 d分別灌胃給予以上對應(yīng)藥物;第6-9 d,除空白對照組灌胃蒸餾水外,其他各組采用糖皮質(zhì)激素法按50 mg/kg體重每天灌胃氫化可的松建立腎陰虛模型,觀察各組小鼠的一般體征,并測定其體重變化;給藥9 d后,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定小鼠血漿環(huán)磷酸腺苷(c AMP)、環(huán)磷酸鳥苷(c GMP)的含量;采用放射免疫分析法測定小鼠HPG軸中血清促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)及睪酮(T)的含量,計算各組小鼠子宮及睪丸指數(shù),并采用HE染色法觀察子宮及睪丸的病理組織形態(tài)學(xué)改變。采用高效液相色譜法測定六味地黃湯及其補腎作用有效“一補一瀉”藥對(山茱萸-牡丹皮)所含獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷的含量,色譜條件為Hypersile C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,流動相為甲醇-水(24:76),檢測波長236 nm,體積流量1.0 m L/min,柱溫30℃。結(jié)果1、與空白對照組比較,腎陰虛模型組小鼠體重下降(P0.01),血漿c AMP含量升高,血漿c GMP含量降低,HPG軸中血清FSH、E2、T含量降低(P0.01)。2、與腎陰虛模型組比較,六味地黃湯組可升高腎陰虛模型小鼠體重,降低血漿c AMP含量,升高血漿c GMP含量,上調(diào)HPG軸中血清FSH、E2、T水平(P0.05或0.01),并使子宮及睪丸指數(shù)升高(P0.05),可修復(fù)受損的子宮及睪丸組織。3、與腎陰虛模型組比較,山茱萸-牡丹皮組能降低腎陰虛模型小鼠血漿c AMP含量,上調(diào)HPG軸中血清FSH、E2、T水平(P0.05或P0.01),并可修復(fù)受損的子宮及睪丸組織。4、山茱萸-牡丹皮藥對中含有獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷,其濃度分別在0.10μg~1.65μg(r=0.9995),0.12μg~1.92μg(r=0.9991),0.23μg~3.36μg(r=0.9997)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為102.29%,100.99%,102.48%,RSD值分別為1.48%,1.32%,0.75%,按生藥量計其含量分別為0.050%,0.097%,0.364%,六味地黃湯中所含上述各成分的含量分別為0.081%,0.104%和0.363%。結(jié)論1、50 mg/kg氫化可的松注射液連續(xù)灌胃4d后,可建立良好的腎陰虛小鼠模型,其中血漿c AMP以及血清FSH、E2、T含量均可作為評價糖皮質(zhì)激素法建立腎陰虛模型的重要指標(biāo)。2、六味地黃湯改善腎陰虛的作用機制可能與其降低血漿c AMP含量,升高血漿c GMP含量,上調(diào)HPG軸中FSH、E2、T的含量,升高子宮及睪丸指數(shù),修復(fù)受損子宮及睪丸組織有關(guān)。該方中的山茱萸-牡丹皮藥對及其中所含的獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷可能是六味地黃湯改善腎陰虛的主要有效藥對和藥效成分。
【圖文】：

陰虛模型小鼠一般體征的影響對照組小鼠活動靈敏、毛發(fā)有光澤、大便質(zhì)硬且呈黃褐色；腎陰虛模型 1靡、略有拱背、毛發(fā)無光澤；腎陰虛模型 2 組小鼠萎靡不振、拱背、扎堆干枯無光澤、豎毛、大便干結(jié)；腎陰虛模型 3 組小鼠整體狀態(tài)不佳，，有精、毛發(fā)脫落嚴(yán)重等現(xiàn)象，并有小鼠死亡。陰虛模型小鼠體重的影響白對照組比較，腎陰虛模型 1、2、3 組小鼠體重均有顯著性差異（P< 0.提示：腎陰虛模型小鼠灌胃不同劑量氫化可的松后體重均有下降。結(jié)果見

圖 2 對腎陰虛模型小鼠血漿 cAMP、cGMP 的影響（x±s）注：與空白對照組比較，**P＜0.01。源性糖皮質(zhì)激素早期可使機體表現(xiàn)出煩躁多動、易激惹等腺皮質(zhì)激素可抑制促腎上腺皮質(zhì)激素的釋放，從而減少類固現(xiàn)一系列“耗竭”的現(xiàn)象[28]。目前腎陰虛的造模方法大多采干預(yù)，但前期研究發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)皮下或肌肉注射氫化可的松率太高，所以改用灌胃給藥以減小刺激性，該方法操作簡單虛模型。本實驗結(jié)果表明，采用不同劑量的氫化可的松灌胃征較空白對照組變化不明顯，腎陰虛模型 2、3 組小鼠出現(xiàn)發(fā)抖、拱背、扎堆、毛發(fā)干枯無光澤、豎毛、大便干結(jié)等現(xiàn)陰虛模型體征相符[29]。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2707192