【摘要】：目的:通過(guò)觀察祛風(fēng)活血丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠視網(wǎng)膜Bcl-2、Bax和Caspase-3表達(dá)的影響,探討祛風(fēng)活血丸對(duì)EAU的療效和作用機(jī)制。方法:將SPF級(jí)純系健康雄性Lewis大鼠65只(130眼)根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)抽取12只作為空白組,對(duì)剩余的53只大鼠進(jìn)行主動(dòng)免疫以建立EAU大鼠模型,其在大鼠右后腿內(nèi)側(cè)皮下注射含有視網(wǎng)膜光感受器間維生素A類(lèi)結(jié)合蛋白(IRBP)和弗氏完全佐劑(FCA)的混合乳糜液。主動(dòng)免疫后,每天在裂隙燈顯微鏡下觀察眼部炎癥反應(yīng),并參照Caspi評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行炎癥評(píng)分。在造模后第7天,從造模組大鼠中隨機(jī)選擇5只大鼠處死,取眼球制作病理切片,進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。將造模成功的EAU大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為模型對(duì)照組、熊膽開(kāi)明片組(陽(yáng)性藥物對(duì)照組)、祛風(fēng)活血丸低倍組、祛風(fēng)活血丸高倍組。連續(xù)灌胃給藥14天,取大鼠視網(wǎng)膜組織,用qPCR法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織中Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的相對(duì)表達(dá)量,用Western Blot法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織中Caspase-3蛋白的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:1.EAU大鼠模型建立:在造模組的大鼠主動(dòng)免疫后第4天,裂隙燈顯微鏡下觀察可見(jiàn)大鼠虹膜血管擴(kuò)張、角鞏膜緣血管充血,部分眼底紅光反射減弱,眼部炎癥評(píng)分(1.45±0.74)。第7天可見(jiàn)虹膜血管明顯擴(kuò)張充血、房水混濁、眼底紅光反射明顯減弱,部分可見(jiàn)瞳孔緣灰白色絮狀物、前房積膿,眼部炎癥評(píng)分(2.62±0.65)。大鼠眼球病理切片顯示在角膜后、虹膜、睫狀體和視網(wǎng)膜中有不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。以上表明在主動(dòng)免疫后第7天成功建立了EAU大鼠模型。2.qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示:與空白組相比:模型對(duì)照組Bcl-2 mRNA呈低表達(dá)(P0.05),Bax mRNA呈顯著高表達(dá)(P0.01);與模型對(duì)照組比較:熊膽開(kāi)明片組和祛風(fēng)活血丸高倍組Bcl-2 mRNA均呈顯著高表達(dá)(P0.01),祛風(fēng)活血丸低倍組Bcl-2 mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化(P0.05),熊膽開(kāi)明片組和祛風(fēng)活血丸高倍劑量組Bax mRNA均呈顯著低表達(dá)(P0.01),祛風(fēng)活血丸低倍劑量組Bax mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化(P0.05)。3.Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:與空白組相比:模型對(duì)照組Caspase-3呈顯著高表達(dá)(P0.01);與模型對(duì)照組比較,祛風(fēng)活血丸低倍組Caspase-3呈低表達(dá)(P0.05),熊膽開(kāi)明片組和祛風(fēng)活血丸高倍組Caspase-3均呈顯著低表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:1.通過(guò)采用IRBP抗原-完全弗氏佐劑主動(dòng)免疫Lewis大鼠,可以成功建立EAU大鼠模型。2.祛風(fēng)活血丸可以上調(diào)EAU大鼠視網(wǎng)膜組織中Bcl-2的表達(dá),抑制Bax、Caspase-3的表達(dá),說(shuō)明Bcl-2、Bax和Caspase-3可能是祛風(fēng)活血丸作用于EAU大鼠的靶點(diǎn),從而改善EAU病理過(guò)程,以發(fā)揮治療作用。3.祛風(fēng)活血丸可能通過(guò)抑制葡萄膜炎的凋亡相關(guān)因子Bax、Caspase-3的表達(dá),促進(jìn)Bcl-2的表達(dá),來(lái)發(fā)揮其抗炎作用。
【圖文】：

空白組

造模第3天
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2706837