【摘要】：本研究運(yùn)用基于HPLC-MS代謝組學(xué)分析的方法,比較了本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的白僵蠶與藥店購(gòu)買(mǎi)的不同產(chǎn)地生產(chǎn)的白僵蠶的代謝物差異;初步了解不同白僵菌菌株、白僵蠶生產(chǎn)地域環(huán)境和白僵蠶生產(chǎn)加工方式對(duì)白僵蠶代謝的影響。本研究還用同樣的方法識(shí)別了白僵蠶去皮處理和未去皮處理及白僵蠶皮之間的代謝組差異。有關(guān)研究結(jié)果將為白僵蠶生產(chǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量控制和進(jìn)一步的終成藥加工提供理論參考。1實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)白僵蠶與藥店購(gòu)買(mǎi)不同產(chǎn)地白僵蠶代謝組差異比較白僵蠶是一種傳統(tǒng)中藥材,其來(lái)源是家蠶(Bombyx moriL.)幼蟲(chóng)(4-5齡)感染白僵菌(Beauveria bassiana)而僵死的干燥全蟲(chóng)。到目前為止,國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)白僵蠶做了大量的研究,但對(duì)于不同白僵蠶的代謝組差異尚未報(bào)到。由于不同白僵菌菌株的代謝有差異,因此由不同白僵菌菌株制備得到的白僵蠶代謝組也有差異。故本研究采用基于HPLC-MS的代謝組學(xué)方法對(duì)不同白僵蠶的代謝組差異進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主成分分析結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的白僵蠶與藥店購(gòu)買(mǎi)不同產(chǎn)地的白僵蠶之間代謝組具有較大差異;不同產(chǎn)地的白僵蠶之間代謝組也具有一定的差異;用偏最小二乘判別分析識(shí)別差異代謝物,發(fā)現(xiàn)不同白僵蠶代謝物都存在顯著差異。聚類(lèi)分析結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)白僵蠶與藥店購(gòu)買(mǎi)白僵蠶的代謝具有顯著差異。差異代謝物包括pyruvic acid、GABA、proline、adenine、phenylalanine、antibiotic CV1、folic acid、β-sitosterol、gingerenone A、beauverolide B、bassianin、phosphatidylcholine(18:2/0:0)、phosphatidylserine(18:2/0:0)和palmitamide等。代謝途徑分析發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的白僵蠶和不同藥店購(gòu)買(mǎi)的不同產(chǎn)地的白僵蠶在嘌呤代謝、氨基酸代謝、脂肪酸代謝、糖酵解途徑及三羧酸循環(huán)途徑等多條代謝途徑都存在顯著的差異。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的白僵蠶產(chǎn)生較多GABA、ribulose、ammonium tartarate、luteolin-7-glucoside、tryptophan、peonidin-3-O-beta-D-glucoside、oxytetracyclin、folic acid、prochlorperazine sulfone、quercetin、abyssinone、(2R,3R)-2,3-dihydroxybernsteinsaeure、2-methylpentanoic Acid、cimaterol、trigonelline、antibiotic CV1、noformicin、cinobufagin、β-sitosterol、scoparin、glycyrrhetinic acid、methyloctacosanoate、pyroglutamic acid、phosphotidycholine(18:2/0:0)和phenylalanine,這些化合物中包括多種具有抗氧化活性和抗菌等活性物質(zhì),因此實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的白僵蠶可能有較高的應(yīng)用價(jià)值。但市售白僵蠶活性成分相對(duì)較少的具體原因尚待進(jìn)一步研究。2實(shí)驗(yàn)室去皮白僵蠶、未去皮白僵蠶及白僵蠶皮代謝組差異研究白僵蠶外層是蠶的表皮及部分白僵菌菌絲,內(nèi)部主要是白僵菌菌絲,目前尚無(wú)這些部分間的代謝物差異研究報(bào)道。搞清白僵蠶不同部分的代謝組差異將有助于白僵蠶的深加工和合理利用。故本研究采用基于HPLC-MS的代謝組學(xué)方法對(duì)白僵蠶的皮、去皮白僵蠶和未去皮白僵蠶代謝組差異進(jìn)行了系統(tǒng)研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),白僵蠶的皮、去皮白僵蠶和未去皮白僵蠶在某些代謝物含量存在顯著差異。比如,白僵蠶的皮具有較多的S-(hercyn-2-yl)-L-cysteine S-oxide、O-succinyl-L-homoserine、DL-leucyl-glycyl-glycine、6,7-dimethoxycoumarin和dimethirimol等代謝物;在去皮的白僵蠶體內(nèi)含有較多的N-demethyl-desepoxymaytansinol、paecilomycins、telmisartan(514.18)、farnesyl diphosphate等代謝物;在未去皮的白僵蠶體內(nèi)含有phenylalanine、cyclo(L-lle-L-val)、phosphoethanolamine、phosphatidylserine(16:0/0:0)、tamoxifen、iriomoteolide 1a和candesartan等代謝物含量較高。這些差異化合物表明白僵蠶、白僵蠶內(nèi)部和外皮部分具有不同生物活性物質(zhì)組成特點(diǎn),因而可能具有不同用途,值得進(jìn)一步深入研究。
【圖文】：

[70]。圖2-1 不同白僵蠶陰離子（A）和陽(yáng)離子（B）模式下的主成分分析得分圖Figure 2-1 PCA score plots of negative mode (A) and positive mode(B) at different Bombyx batryticatusABt[1]t[2]t[3]t[1]t[3]t[2]

圖 2-3 LC-MS 陽(yáng)離子模式下人工培養(yǎng)白僵蠶與產(chǎn)自安徽的白僵蠶（A）、人工培養(yǎng)白僵蠶與產(chǎn)自四川的白僵蠶（C）、人工培養(yǎng)白僵與產(chǎn)自浙江的白僵蠶（E）的 OPLS-DA 得分圖，及其相應(yīng)的 S-plot（B、D、F）Figure 2-3 OPLS-DA score plot of lab cultured Bombyx batryticatus and Bombyx batryticatus from Anhui (A), lab cultured Bombyx batryticand Bombyx batryticatus from Sichuan (C), lab cultured Bombyx batryticatus and Bombyx batryticatus from Zhejiang (E); as wellcomplementary (B, D, F,) S-plots in positive mode.表 2-1 陰陽(yáng)離子模式下識(shí)別的差異代謝物Table 2-1 Metabolites putatively identified by HPLC-TOF-MS in positive and negative modeNOdetectedmassRT(min)theoreticalMassmolecularformulametaboliteionization modeΔmassmDa1 88.01512 2.61 88.01604 C3H4O3Pyruvic acid ESI(-) 0.92 2 103.06421 1.661 103.06333 C4H8O3GABA ESI(-) 0.88 3 113.99286 37.15 113.99531 C4H2O4Acetylenedicarboxylic acid ESI(-) 2.45 4 115.0625 1.74 115.06333 C5H9NO2Proline ESI(+) 0.83 5 116.00905 1.97 116.01096 C6H12O2Fumaric acid ESI(+) 1.91
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R282.74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2706659