【摘要】：目的:以BN大鼠為研究對(duì)象,采用PBS新鮮配置1%的碘酸鈉尾靜脈注射的方法,模擬干性AMD動(dòng)物造模,并在造模后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察RPE細(xì)胞氧化損傷動(dòng)物模型的細(xì)胞自噬狀態(tài)。觀察中藥組方明目地黃丸干預(yù)后,是否對(duì)動(dòng)物模型RPE細(xì)胞的細(xì)胞自噬和凋亡有干預(yù)作用,評(píng)估其對(duì)于實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚏PE細(xì)胞通過(guò)mTOR通路調(diào)節(jié)自噬從而進(jìn)行損傷保護(hù)的作用機(jī)制。方法:將90只BN大鼠隨機(jī)分為中藥組、模型組和空白組各30只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,中藥組和模型組予1%碘酸鈉(40mg/kg)尾靜脈注射造模。中藥組在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第1天開(kāi)始灌胃給藥,采用明目地黃丸方湯劑灌胃,每日灌胃1次,根據(jù)體重給藥,灌胃劑量12g/kg,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。空白組和模型組實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第1天開(kāi)始予生理鹽水灌胃,每日灌胃1次,根據(jù)體重給藥,灌胃劑量12g/kg,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。并于造模后1天、7天、14天時(shí)水合氯醛過(guò)量麻醉處死大鼠(每個(gè)時(shí)間段每組隨機(jī)處死10只),完整摘取眼球,剝離視網(wǎng)膜組織標(biāo)本。通過(guò)HE染色觀察視網(wǎng)膜及光感受器組織結(jié)構(gòu)改變;通過(guò)Western-Blot法檢測(cè)各組RPE細(xì)胞的p-mTOR、LC3-II及Caspase-3的蛋白表達(dá)。結(jié)果:碘酸鈉尾靜脈注射可以成功制造氧化損傷的大鼠視網(wǎng)膜模型,通過(guò)HE染色觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改變、色素上皮層下沉積物及內(nèi)外核層細(xì)胞損傷狀態(tài),證明該大鼠網(wǎng)膜的干性AMD動(dòng)物模型造模成功。與正�？瞻捉M相比,模型組的視網(wǎng)膜色素上皮損傷并增厚,外核層結(jié)構(gòu)損傷,排列紊亂,且隨著時(shí)間的推移內(nèi)外核層呈波浪狀改變;與模型組相比,中藥組的視網(wǎng)膜色素上皮及內(nèi)外核層結(jié)構(gòu)逐漸有所恢復(fù)。1天模型組與1天空白對(duì)照組比,p-mTOR蛋白表達(dá)水平下調(diào)(P0,05),LC3II蛋白表達(dá)水平上調(diào)(P0.05),Caspase-3蛋白表達(dá)水平增加(P0.05);7天、14天模型組和空白組對(duì)照組相比,p-mTOR蛋白表達(dá)水平升高(P0.05),而LC3II蛋白表達(dá)水平下調(diào)(P0.05),Caspase-3蛋白表達(dá)水平升高(P0.05);與1天模型組相比,中藥組p-mTOR、LC3-II、Caspase-3蛋白表達(dá)水平變化不明顯,差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與7天、14天模型組相比,中藥組p-mTOR蛋白表達(dá)水平下降(P0.05),Caspase-3蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05)。結(jié)論:通過(guò)觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)改變,色素上皮層下脂質(zhì)沉積物以及內(nèi)外核層細(xì)胞損傷程度,表明碘酸鈉尾靜脈注射能夠使得大鼠視網(wǎng)膜色素上皮發(fā)生氧化損傷改變,干性AMD模型造模成功。急性氧化損傷(1天)會(huì)使得mTOR通路活性應(yīng)激性下降,細(xì)胞自噬活性應(yīng)激性增加,細(xì)胞凋亡損傷加重,但是慢性氧化損傷(7天、14天)時(shí)mTOR通路的活性逐漸上升,而細(xì)胞自噬活性逐漸下降,細(xì)胞凋亡在一定程度上受到了抑制,這可能是在無(wú)藥物干預(yù)狀態(tài)下,細(xì)胞維持自我環(huán)境穩(wěn)態(tài)的一種調(diào)控機(jī)制。明目地黃丸對(duì)氧化損傷模型的急性損傷初期,藥物療效有限,對(duì)于RPE細(xì)胞自噬及凋亡干預(yù)效果不明顯。當(dāng)服用明目地黃丸到一定療程(7天、14天)后,其對(duì)RPE細(xì)胞自噬具有促進(jìn)作用,且能使細(xì)胞自噬在一定時(shí)間內(nèi)維持在相對(duì)高水平,并對(duì)細(xì)胞凋亡具有抑制作用。同時(shí)明目地黃丸可以通過(guò)抑制mTOR通路的活性,使RPE細(xì)胞自噬活性增強(qiáng),減輕RPE細(xì)胞的氧化損傷,從而維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。
【圖文】：

３．１動(dòng)物分組及造模逡逑將９０只ＢＮ大鼠隨機(jī)分為三組，分別為空白組３０只，模型組３０只，實(shí)驗(yàn)組３０只，逡逑具體分組造模情況如下：逡逑中藥組：予１％碘酸鈉（４０ｍｇ／ｋｇ）尾靜脈注射造模，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第１天開(kāi)始灌逡逑胃給藥，每日灌胃１次，根據(jù)體重給藥（每３天稱１次體重），灌胃劑量１２ｇ／ｋｇ，直至逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)束；逡逑模型組：予１％碘酸鈉（４０ｍｇ／ｋｇ）尾靜脈注射造模，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第１天^u始予生理逡逑鹽水灌胃，每日灌胃１次，根據(jù)體重給藥（每３天稱１次體重），灌胃劑量１２ｇ／ｋｇ，直逡逑至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；逡逑空白組：不予造模，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第１天開(kāi)始予生理鹽水灌胃，每日灌胃１次，根據(jù)逡逑體重給藥（每３天稱１次體重），，灌胃劑量１２ｇ／ｋｇ，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。逡逑３．２研究路線逡逑

圖３＿１邐圖３－２逡逑１８逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2703953