【摘要】：免疫系統(tǒng)具有維持機體正常生命活動的重要功能,機體依據(jù)免疫系統(tǒng)來判斷“自己”和“非己”成分,消滅外來病菌及人體本身所產(chǎn)生的損傷細胞和腫瘤細胞,從而保持機體的平衡狀態(tài)。很多研究證實,植物多糖可相對安全地提高人體免疫功能。我們課題組前期對白芷和黑莓籽多糖進行提取純化,共得到了9個組分,其中組分ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2富集量較大,并且體外實驗證實以上組分均具有一定的抑制酪氨酸酶活性和抗凝血活性,查閱文獻發(fā)現(xiàn),與白芷和黑莓籽多糖的免疫學(xué)研究還未見報道,因此本文采用ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2進行免疫活性研究。巨噬細胞在免疫系統(tǒng)中通過吞噬和提呈抗原,釋放細胞因子來參與免疫反應(yīng)的各個階段,在機體免疫系統(tǒng)中占有非常重要的地位。巨噬細胞有兩種極化類型:M1型和M2型。M1細胞表現(xiàn)為促炎癥反應(yīng),維持Th1依賴性免疫反應(yīng),產(chǎn)生炎癥介質(zhì)(如IL-1、IL-6、IL-12、NO、TNF-α)吞噬微生物或感染/變異細胞;M2細胞表現(xiàn)為抗炎癥反應(yīng),增強Th2應(yīng)答,釋放出抗炎癥因子(IL-4、IL-10、TGF-β),分泌精氨酸酶1,促進Th2細胞化學(xué)引誘物的產(chǎn)生。目前文獻報道的大多數(shù)生物活性多糖表現(xiàn)為促進巨噬細胞M1極化,可以刺激巨噬細胞IL-1、IL-6、IL-12和TNF-α的表達,促進Th1導(dǎo)向的適應(yīng)性免疫應(yīng)答,抑制Th2應(yīng)答。本文選用小鼠RAW264.7巨噬細胞系為細胞模型,脂多糖LPS為陽性對照組,檢測白芷多糖ADPs-1a和ADPs-3a以及黑莓籽多糖BSP-2的免疫調(diào)節(jié)功能及潛在作用機制。首先使用不同濃度的ADPs-1a(100~1600μg/mL)、ADPs-3a(37.5~600μg/mL)和BSP-2(37.5~600μg/mL)刺激RAW264.7細胞,采用MTT法檢測細胞活力,中性紅法測定細胞吞噬能力,一氧化氮試劑盒和ELISA試劑盒分別測定細胞內(nèi)NO、TNF-α和IL-6含量,實時定量PCR法測定iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA表達水平,Western blot法測定NF-κB和MAPK信號中關(guān)鍵蛋白在使用通路抑制劑前后的表達水平,探討了ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2對巨噬細胞免疫調(diào)控作用的可能機制。ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2能顯著提高RAW264.7細胞的吞噬活性,以及RAW264.7細胞釋放NO的能力和分泌細胞因子TNF-α、IL-6的水平。在此基礎(chǔ)上,ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2也能顯著上調(diào)iNOS和IL-6、TNF-α的基因表達水平,以及細胞核內(nèi)磷酸化p65蛋白水平,初步說明ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2能夠促進NF-κB由胞漿轉(zhuǎn)入細胞核中進行表達。同理,檢測發(fā)現(xiàn)MAPK通路中p38 MAPK、ERK1/2、SAPK/JNK蛋白磷酸化水平也顯著提高,并且使用通路抑制劑預(yù)處理后,蛋白p65、p38 MAPK、ERK1/2、SAPK/JNK的磷酸化水平明顯降低。以上結(jié)果表明ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2對巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用可能與激活MAPK和NF-κB信號通路有關(guān)。本實驗結(jié)果為ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2的進一步應(yīng)用開發(fā)提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 多糖激活巨噬細胞的 NF-κB 和 MAPK 信號通路圖F-κB and MAPK signaling pathways of polysaccharide-activated m究的目的和意義

2-1ADPs-1a（A）和 ADPs-3a（B）對 RAW264.7 細胞活力的影響 Effects ofADPs-1a (A) andADPs-3a (B) on the viability of RAW264.7 Ps-1a 和 ADPs-3a 對 RAW264.7 細胞吞噬能力的影響能力會直接影響到細胞的活力，本研究結(jié)果如表 2-10 與圖
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2702160