【摘要】：黃連是一味傳統(tǒng)中草藥,現(xiàn)代藥理研究表明,黃連是堿性藥物的重要來源,在糖尿病、腫瘤等疾病的治療方面具有較好的功效。黃連中的主要藥效成分為生物堿,其在色譜分離及純化制備中存在峰易拖尾及載樣量低等問題,這些技術(shù)難點(diǎn)制約了黃連的物質(zhì)基礎(chǔ)研究及其在醫(yī)藥界的發(fā)展。為了解決這些問題,本論文以實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的帶電荷C18HCE色譜柱,建立了基于表面靜電排斥/反相混合模式色譜的黃連生物堿分析方法。實(shí)現(xiàn)了黃連中主要生物堿在色譜分析上的對稱峰形和分離選擇性,結(jié)合質(zhì)譜對分離出的6個主要色譜峰進(jìn)行了歸屬,分別為黃連堿、藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、小檗堿、巴馬汀,并對湖北、重慶兩地不同批次的黃連藥材進(jìn)行了生物堿的定量分析,結(jié)果顯示不同產(chǎn)地不同批次的黃連中生物堿的含量差異較大。在優(yōu)化了黃連生物堿的高效液相色譜分析方法的基礎(chǔ)上,以高效制備液相色譜技術(shù)、并結(jié)合膜分離技術(shù),建立了黃連總生物堿的純化制備方法。在此方法下,黃連總生物堿的純度從39.62%提高到88.87%,總生物堿的回收率可達(dá)94.5%,所得產(chǎn)品在顏色上有了很大的改善。對制備所得餾分進(jìn)行了D2、Mu、M3、5-HT2A、GPR120、FFA1等受體的活性測試實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,餾分Fr.1表現(xiàn)出特異的毒蕈膽堿受體(M3)激動活性,這一活性篩選結(jié)果在黃連活性研究方面未見報道。以此為基礎(chǔ),展開了以M3激動活性為導(dǎo)向的餾分Fr.1純化制備工作,目前得到了兩個還需繼續(xù)純化的二維餾分。本論文解決了黃連生物堿在液相色譜上的分析、分離純化難點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)黃連生物堿在液相色譜上的優(yōu)異峰形和選擇性,可使黃連總生物堿的純度從39.62%提高到88.87%。篩選得到了表現(xiàn)出毒蕈膽堿受體(M3)激動活性的組分。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為黃連的研究提供了新穎的分離分析和純化制備方法,對黃連的物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理活性研究具有重要的意義。同時,也可為其它堿性化合物的研究提供一定的參考。
【圖文】：

C18HCE 色譜柱對堿性化合物的分離最具優(yōu)勢，其代表性表見圖 2-1。在低 pH 和低離子強(qiáng)度酸條件下，該色譜柱對堿性化合物特的優(yōu)勢。研究發(fā)現(xiàn)，C18HCE 色譜柱[79]對堿性化合物的分離屬于表/反相混合模式色譜機(jī)理，分析對象的保留行為及選擇性不僅受有機(jī)的影響，而且受流動相添加劑種類、濃度等多元化因素影響。隨后，W也推出帶有表面正電荷的 CSHC18 色譜柱，該色譜柱在低離子強(qiáng)度條件下，對堿性化合物的分離分析同樣能起到很好的效果。章選用黃連生物堿為研究對象，使用表面正電荷反相 C18HCE 色譜柱流動相中添加劑的種類及其在流動相中的體積分?jǐn)?shù)，實(shí)現(xiàn)黃連主要生色譜上的對稱峰形及良好的選擇性，并結(jié)合質(zhì)譜及文獻(xiàn)信息對其主要識別，最后，利用優(yōu)化的色譜方法對湖北、重慶兩個產(chǎn)地不同批次的主要生物堿類物質(zhì)進(jìn)行了定量分析。

圖 2-2 Welch Ultimate XB-C18 和 C18HCE 兩種色譜柱分析結(jié)果對比圖Figure 2-2 Comparative analysis of Welch Ultimate XB-C18 and C18HCE column2.3.2 流動相添加劑的優(yōu)化前面已經(jīng)提到，C18HCE 色譜柱適合在低離子強(qiáng)度酸性條件下使用，并考慮到與質(zhì)譜儀器的兼容性，我們選擇色譜分析中常用的易揮發(fā)的甲酸、乙酸作為流動相添加劑，通過優(yōu)化其在流動相中所占的體積分?jǐn)?shù)，考察這兩種酸性添加劑對黃連生物堿的色譜峰形、分離選擇性及保留行為等的影響。實(shí)驗(yàn)過程中，分別以體積分?jǐn)?shù)為 0.01%、0.05%、0.1%、0.5%的甲酸和乙酸為流動相添加劑對相同的黃連樣品進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖 2-3�？梢钥闯�，在這兩種酸作為添加劑的條件下，得到的色譜峰形都比較對稱，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明表面正電荷色譜柱C18HCE 在酸性添加劑條件下能夠?qū)崿F(xiàn)黃連生物堿主要色譜峰的對稱峰形。黃連生物堿的保留主要受流動相中離子強(qiáng)度的影響，隨著流動相中酸性添加劑所占體
【學(xué)位授予單位】：湖北民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：O657.72;R284.1

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本文編號：2700388