【摘要】：目的:探究藿夏膠囊在體內(nèi)外抗腫瘤的活性。方法:1、采用MTT法檢測藿夏膠囊對體外培養(yǎng)的人肺癌NCI-H460細(xì)胞、人肝癌Hep G_2細(xì)胞、人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的抑制作用;AO-EB雙染法觀察藥物對細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。2、建立移植瘤模型,按模型組,環(huán)磷酰胺(CTX)陽性組,低中高3個劑量藿夏膠囊提取物組進(jìn)行分組(各6只)。另取6只正常裸鼠作為正常對照組,正常對照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水,CTX組以濃度為0.025 g/kg腹腔注射,藿夏膠囊組分別以2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg的劑量灌胃。陽性組每周三次,其他組每天一次,持續(xù)給藥兩周;在給藥期間,每天觀察并記錄裸鼠的精神、行為、飲食、腫瘤生長等情況;停藥次日,先將裸鼠稱重,測量移植瘤體積,再處死裸鼠,剝離瘤體待用;3、全自動血液分析儀測各組荷瘤鼠的谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、球蛋白(GLB)、血清白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)含量;酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測瘤小鼠血清及腫瘤組織中白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量;羥胺法測腫瘤組織中超氧化物歧化酶(SOD)含量;硫代巴比妥酸法測腫瘤組織中丙二醛(MDA)含量;4、蘇木素-伊紅染色法(HE)觀察各組瘤組織的病理形態(tài)學(xué)變化;免疫組化法觀察藿夏膠囊對h植瘤瘤組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3、P53基因的影響。結(jié)果:1、MTT實驗結(jié)果顯示,藿夏膠囊能夠抑制NCI-H460、Hep G2、SKOV-3細(xì)胞生長,且對NCI-H460細(xì)胞增殖的抑制作用比Hep G2、SKOV-3細(xì)胞強(qiáng)。AO-EB雙染結(jié)果顯示,正常對照組發(fā)綠色熒光,且細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,活細(xì)胞生長密集;CTX組細(xì)胞量明顯減少,早期凋亡細(xì)胞多,碎片多,核呈縮狀,凋亡細(xì)胞被染成明亮的橘紅色;不同濃度給藥組活細(xì)胞量隨藥物濃度的增大而減少,有些細(xì)胞核呈縮狀,有碎片凝集,凋亡細(xì)胞核被染成橘紅色。2、NCI-H460移植瘤模型造模成功,其成瘤率為100%。與正常組相比,模型組和各給藥組均明顯減輕裸鼠體重(P0.01);CTX組和藿夏膠囊高劑量組與模型組相比,裸鼠體重均顯著減輕(P0.01);給藥后,模型組、低中高藿夏膠囊組及CTX組的抑瘤率分別為0.00%、13.0%、21.5%、43.9%、71.7%。裸鼠瘤體積分別為(3271.19±1777.70)、(2169.87±1678.50)、(1817.21±1191.77)、(1672.39±707.06)、(135.26±128.40)mm~3,瘤重分別為(2.23±0.07)、(1.94±0.36)、(1.76±0.48)、(1.25±0.61)、(0.63±0.39)g,CTX組和藿夏膠囊高劑量組瘤體積及瘤重均比模型組小(P0.01或P0.05)。3、各給藥組荷瘤裸鼠的ALP、ALT、AST、UA、BUN、GLB、ALB、TP與模型組相比均無統(tǒng)計意義(P0.05);藿夏膠囊組的CRE與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);CTX組與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。各給藥組荷瘤裸鼠血清及腫瘤組織中TNF-α含量顯著比模型組高(P0.01或P0.05);藿夏膠囊高劑量組及CTX組瘤裸鼠血清中IL-6水平比模型組低(P0.05),藿夏膠囊中、高劑量組及CTX組瘤組織中IL-6水平比模型組低(P0.05)。各給藥組腫瘤組織中MDA含量與模型組相比顯著降低(P0.01或P0.05);各給藥組腫瘤組織中SOD活力比模型組顯著增高(P0.01)。4、在HE染色實驗中,模型組腫瘤組織中的癌細(xì)胞細(xì)胞排列緊密,生長旺盛,細(xì)胞核大;各給藥組壞死細(xì)胞多,細(xì)胞核小,胞間疏松;免疫組化結(jié)果顯示,各給藥組瘤組織中Bax陽性表達(dá)率與模型組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01);藿夏膠囊中、高劑量組和CTX組瘤組織中的Caspase-3陽性表達(dá)率與模型組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:初步驗證藿夏膠囊對NCI-H460、Hep G_2、SKOV-3這3種癌細(xì)胞均有抑制作用,其中對NCI-H460細(xì)胞的抑制效果要較對Hep G_2、SKOV-3細(xì)胞更顯著。藿夏膠囊在體外對NCI-H460裸鼠移植瘤有抑制作用,并能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其作用機(jī)制可能與清除自由基,提高TNF-α含量,抑制IL-6分泌,增加Bax、Caspase-3基因的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

2018 屆碩士學(xué)位論文 藿夏膠囊體內(nèi)外抗腫瘤的研究注：與空白組比較，*p＜0.05，**p＜0.01Note:*p＜0.05 or**p＜0.01 vs the corresponding concentration of control group500.7698±0.01611.870.9229±0.0542*12.29 1.0781±0.0556**18.92

注：與空白組比較，，**p＜0.01Note:**p＜0.01 vs the corresponding concentration of control group空白組 —0.7659±0.0276—1.4014±0.1651—1.3481±0.1661—DDP 組 10.4387±0.0163**42.720.5173±0.0162**63.020.2832±0.0018**79.14藿夏膠囊組8000.2846±0.0096**62.830.5090±0.0722**63.670.4413±0.0149**67.264000.2951±0.0273**61.470.5327±0.0266**61.990.4228±0.0123**68.632000.4362±0.0301**43.040.5944±0.0199**57.590.4528±0.0106**66.411000.4813±0.0184**37.150.7870±0.0084**43.840.7005±0.0314**48.03500.7632±0.03720.351.2827±0.07528.471.1831±0.061112.23
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2696784