發(fā)布時間：2020-06-03 20:20

【摘要】：疲勞是現(xiàn)代社會常見的生理現(xiàn)象。疲勞可由過度勞累產(chǎn)生,也可無明顯誘因而產(chǎn)生。疲勞日久得不到及時恢復(fù),可導(dǎo)致多種慢性疾病,危害人體健康。研究者從不同方面認(rèn)識疲勞產(chǎn)生的原因,據(jù)此形成了幾種不同學(xué)說,本研究與其中衰竭學(xué)說、堵塞學(xué)說和自由基學(xué)說有關(guān)。現(xiàn)階段中醫(yī)對疲勞的治療開始重視調(diào)和,不再強(qiáng)調(diào)疲勞的產(chǎn)生為純虛致病,漸漸走出一味進(jìn)補(bǔ)的誤區(qū)。本實驗在《金匱要略·血痹虛勞病》篇對虛勞病的理解和治療的理論基礎(chǔ)上,選用治療體勞的小建中湯,討論其調(diào)和陰陽法抗疲勞的實質(zhì),通過實驗研究探究其抗疲勞的作用機(jī)制。目的:1.通過動物實驗,建立力竭模型,探討其在機(jī)體能量代謝和抗脂質(zhì)過氧化方面的促進(jìn)作用,明確小建中湯對糖脂代謝的影響;2.通過免疫印跡試驗,觀察小建中湯對疲勞模型小鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)情況,探討其在Keap1-Nrf2-ARE信號傳導(dǎo)通路中的作用。方法:將40只小鼠隨機(jī)分為空白組(N組)、模型組(C組)和小建中湯低劑量組(SL組)、小建中湯中劑量組(SM組)、小建中湯高劑量組(SH組),每組8只。C組和SL、SM、SH組分別進(jìn)行持續(xù)10天的負(fù)重力竭游泳實驗(力竭標(biāo)準(zhǔn):小鼠在水中旋轉(zhuǎn),動作協(xié)調(diào)性明顯下降,水淹沒鼻尖,身體下沉,至再次浮出水面的時間超10s,被提起后頭不能抬起),并按照200mg·kg~(-1)·d~(-1)劑量分別灌服生理鹽水和相應(yīng)劑量的小建中湯湯劑。第10天后各組進(jìn)行負(fù)重游泳,力竭后眼球取血處死小鼠,解剖取材并進(jìn)行指標(biāo)測定。測定各組小鼠負(fù)重游泳時間;采用比色法檢測血清尿素(UREA)、肌酐(CREA)、乳酸脫氫酶(LDH)含量,以及肌肉谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌糖原(GLY);采用Western-blot方法測定各組對小鼠股四頭肌Keap1、Nrf2,以及GAPDH的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.小建中湯能顯著提高小鼠游泳時間(p0.05),提升小鼠運(yùn)動耐力;2.運(yùn)動后C組小鼠UREA、CREA、LDH含量較N組均有顯著提高(p0.05),說明運(yùn)動后體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝分解產(chǎn)物增加,代謝產(chǎn)物堆積,認(rèn)為疲勞狀態(tài)已經(jīng)造成。與C組相比,SL組UREA含量顯著下降(p0.01),SM組UREA含量下降具有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05);SL組CREA含量對比C組顯著下降(p0.01)、SM組CREA含量下降(p0.05);SM組LDH含量對比C組顯著提升(p0.01),SH組LDH含量提升(p0.05);SH組UREA含量、SH組CREA含量、SM組LDH含量對比C組無顯著性差異(p0.05),表明小建中低、中劑量能更好清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物,提高機(jī)體能量代謝。3.運(yùn)動后C組小鼠GSH-Px、GLY含量對比N組顯著降低(p0.01),C組SOD含量下降、MDA含量上升(p0.05),表明體內(nèi)自由基及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物增加,體內(nèi)能量物質(zhì)減少。與C組相比,SL、SH組GSH-Px含量上升(p0.05);SH組SOD含量顯著上升(p0.05);SL、SM組MDA含量顯著下降(p0.01),SH組含量(p0.05);SM組GLY含量顯著提升(p0.01);SM組GSH-Px含量,SL、SM組SOD含量,SL、SH組GLY含量對比C組無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。說明小建中湯低、高劑量能促進(jìn)機(jī)體抗氧化酶的生成,減少過氧化產(chǎn)物的堆積,但并不能提供能量物質(zhì)。4.運(yùn)動后C組小鼠Keap1蛋白表達(dá)量較N組上升(P0.05),C組相比,SL、SH組Keap1蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05),其中SL組差異顯著(p0.01),SM組與C組相比無顯著性差異(p0.05);C組Nrf2蛋白表達(dá)量較N組下降(p0.05),與C組相比,SL、SM、SH組Nrf2蛋白表達(dá)量均有所提高(p0.05)。說明小建中湯在低、高劑量下更能Keap1與下游蛋白解離,激活Nrf2蛋白進(jìn)入細(xì)胞核中與ARE結(jié)合以激活Keap1-Nrf2-ARE信號通路,結(jié)合結(jié)果3,說明小建中湯能有效對抗機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)。結(jié)論:研究結(jié)果證實小建中湯能夠顯著提高小鼠運(yùn)動耐力;能夠改善機(jī)體能量代謝,加快血清代謝產(chǎn)物的清除,促進(jìn)糖酵解過程;能夠減少導(dǎo)致疲勞產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物并且參與Keap1-Nrf2-ARE信號通路,激活相關(guān)抗氧化蛋白酶,清除體內(nèi)多余自由基,防止或減緩脂質(zhì)過氧化,從而減輕疲勞產(chǎn)生的不良影響,具有抗疲勞功能。
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2695343