【摘要】：目的:肥胖逐漸成為本世紀(jì)人類健康的最大威脅之一,它是中風(fēng)、高血壓、冠心病、癌癥(胸腺癌、結(jié)腸癌)及脂質(zhì)異常血癥等發(fā)病的主要誘因,抑制消化道中消化酶的活性,是當(dāng)前用來預(yù)防和治療肥胖的最常用方法,胰脂肪酶在脂肪水解中起著關(guān)鍵作用,天然中藥來源的胰脂肪酶抑制劑具有低毒、高效、副作用少等特點(diǎn),因此從天然中藥中篩選具有胰脂肪酶抑制作用的活性成分,并通過結(jié)構(gòu)修飾提高其生物利用度,成為當(dāng)前研究減肥治療藥物的熱門方向。本文研究幾種不同類別中藥單體化合物的胰脂肪酶抑制率,并對(duì)抑制效果好的五環(huán)三萜類化合物熊果酸,進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和胰脂肪酶抑制活性研究,為減肥藥物的開發(fā)奠定一定基礎(chǔ)。方法:使用對(duì)硝基苯酚法,以奧利司他為陽性對(duì)照品,利用胰脂肪酶模型篩選具有抑制活性的單體化合物。分別加入相應(yīng)量的,反應(yīng)底物(對(duì)硝基苯棕櫚酸酯溶液)、抑制劑(本研究選取姜黃素、雙氫楊梅素、芒果苷、大黃酸、反式阿魏酸、香草酸、香草醛、熊果酸、齊墩果酸及熊果酸結(jié)構(gòu)修飾后的產(chǎn)物熊果酸甲酯、熊果酸乙酯、熊果酸丙酯、熊果酸異丙酯、熊果酸芐酯、熊果酸鈉鹽、2-乙酰氧基熊果酸甲酯、2-乙酰氧基熊果酸乙酯分別配制成的抑制劑溶液)、豬胰脂肪酶溶液、Tris-HCl緩沖液于96孔板中進(jìn)行反應(yīng),并在p H8.0、37℃、405nm的吸收波長下測定其吸光度值,計(jì)算胰脂肪酶抑制率。結(jié)果:奧利司他具有極強(qiáng)的胰脂肪酶抑制活性IC_(50)值為65.23nM,姜黃素、熊果素具有較強(qiáng)的胰脂肪酶抑制活性,IC_(50)值分別為61.95μM、142.76μM。齊墩果酸和雙氫楊梅素的抑制活性不明顯,高濃度時(shí)對(duì)胰脂肪酶的抑制率低于30%。芒果苷、大黃酸、反式阿魏酸、香草醛、香草酸對(duì)胰脂肪酶幾乎沒有抑制活性,高濃度時(shí)對(duì)胰脂肪酶的抑制率低于10%。各單體化合物在pH8.0時(shí)對(duì)胰脂肪酶的抑制作用最佳,抑制率在反應(yīng)進(jìn)行10min后趨于穩(wěn)定。熊果酸甲酯、熊果酸乙酯、熊果酸丙酯、熊果酸異丙酯、熊果酸鈉鹽對(duì)胰脂肪酶的抑制活性和熊果酸接近,其IC_(50)值分別為142.05μM、138.95μM、139.33μM、138.19μM、140.08μM,2-乙酰氧基熊果酸甲酯、2-乙酰氧基熊果酸乙酯對(duì)胰脂肪酶的抑制活性比熊果酸弱,其IC_(50)值分別為185.57μM、186.66μM,熊果酸芐酯對(duì)胰脂肪酶的抑制活性比熊果酸強(qiáng),其IC_(50)值為79.9μM。各熊果酸衍生物在p H8.0時(shí)對(duì)胰脂肪酶的抑制作用最佳,抑制率在反應(yīng)進(jìn)行10min后趨于穩(wěn)定。結(jié)論:姜黃素是一種在堿性加熱條件下容易分解的黃酮類化合物,熊果酸是一種結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的五環(huán)三萜類化合物,兩者對(duì)胰脂肪酶有較顯著的抑制效果IC_(50)分別為61.95μM、142.76μM,姜黃素的分解產(chǎn)物對(duì)胰脂肪酶沒有抑制作用。對(duì)熊果酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾并檢測其胰脂肪酶抑制率,結(jié)果表明熊果酸C-28引入直鏈的衍生物對(duì)胰脂肪酶的抑制率不會(huì)有提升,C-3位引入�；种坡视幸欢ǔ潭鹊慕档�,C-28位引入含苯環(huán)的側(cè)鏈可能提升對(duì)胰脂肪酶的抑制率。
【圖文】：

圖 1 pNP 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖適 pH 值研究取不同 pH（6.78, 7.50, 8.00, 9.05）Tris-HCl 緩沖液 800L，于 37℃恒溫箱中放置 10min 后，加入配制好的 1mM 酯（pNPP）溶液 100μL，37℃下反應(yīng) 10min 后，測定吸活，分析 pH 對(duì)酶活力的影響。結(jié)果見圖 2。表 3 不同 pH 值下胰脂肪酶活力表（n=3）pH 酶活(μmol/min)±SD6.78 0.013+0.00047.50 0.024+0.0013

圖 2 酶活隨 pH 變化曲線活力隨著 pH 的增高先升高后降低，與大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的采櫚酸酯底物法的最適 pH8.0 相同。說明胰脂肪酶在偏堿性強(qiáng)。溫度的確定 pH8.0 的 Tris-HCl 緩沖液 800μL，，酶溶液 100μL，分別于37℃、42℃下保溫 10min 后，加入配制好的 1mM 對(duì)硝基苯PP）溶液 100μL，于不同溫度下反應(yīng) 10min 后，測定吸光活，分析溫度對(duì)酶活力的影響。結(jié)果見表 4 結(jié)果見圖 3。表 4 不同溫度下胰脂肪酶活力表（n=3）
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2694508