【摘要】：目的:探討煙酸姜黃素酯(Curcumin Nicotinate,CN)對(duì)低剪切應(yīng)力(Low Shear Stress,LSS)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)凋亡的抑制作用及機(jī)制研究。方法:首先采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度CN處理HUVECs細(xì)胞24h對(duì)HUVECs細(xì)胞活性的影響。然后運(yùn)用平行平板流動(dòng)腔裝置建立LSS誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型。采用Hoechst 33258熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CN對(duì)LSS誘導(dǎo)HUVECs凋亡的影響。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CN對(duì)LSS誘導(dǎo)HUVECs中miR-224表達(dá)的影響;Western blot檢測(cè)CN對(duì)LSS誘導(dǎo)HUVECs中前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)蛋白表達(dá)的影響及 miR-224-5P 對(duì) PCSK9蛋白表的影響。運(yùn)用RNAi技術(shù)向HUVECs中轉(zhuǎn)染PCSK9siRNA后再用Western blot 檢測(cè) PCSK9siRNA 對(duì) Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:CCK-8法結(jié)果表明:與對(duì)照組比,2.5umol/L的CN對(duì)HUVECs細(xì)胞活性沒(méi)有影響(P0.05);5umol/L、10umol/L、20umol/L 的 CN 能夠促進(jìn)HUVECs細(xì)胞活性(P0.05);40umol/L CN抑制HUVECs細(xì)胞活性(P0.05);Hoechst 33258熒光染色結(jié)果顯示:與靜態(tài)培養(yǎng)組比,LSS組(3dyne/cm2,12h)內(nèi)呈現(xiàn)凋亡形態(tài)的HUVECs明顯增多。與LSS組比,CN+LSS組內(nèi)呈凋亡形態(tài)的HUVECs明顯減少,其中以20umol/L CN+LSS組內(nèi)呈現(xiàn)凋亡形態(tài)的HUVECs數(shù)量最少。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與靜態(tài)培養(yǎng)組比,LSS組HUVECs凋亡率明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與LSS組比,CN組呈劑量依賴性減少HUVECs的凋亡率,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。其中以20umol/L CN+LSS組HUVECs凋亡率減少最為明顯,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:與靜態(tài)培養(yǎng)組比,LSS組miR-224表達(dá)水平明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與LSS組比,CN+LSS組miR-224表達(dá)水平逐漸上調(diào),并且呈現(xiàn)濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中以20umol/L CN+LSS組miR-224表達(dá)水平上調(diào)最明顯,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示:與靜態(tài)培養(yǎng)組比,LSS組內(nèi)PCSK9蛋白表達(dá)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與LSS組比,CN+LSS組內(nèi)PCSK9蛋白表達(dá)下降,并且呈現(xiàn)濃度依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中以20umol/LCN+LSS組PCSK9蛋白表達(dá)下降最為明顯(P0.01)。轉(zhuǎn)染miR-224-5P mimic,Western blot結(jié)果顯示,與LSS組比,miR-224-5Pmimic明顯抑制LSS上調(diào)的PCSK9表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。利用RNAi技術(shù)沉默PCSK9在HUVECs中的表達(dá),結(jié)果顯示濃度為100nM的PCSK9siRNA沉默HUVECs中PCSK9表達(dá)效果最佳(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比,LSS組Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)上升,Bcl-2蛋白表達(dá)下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與 LSS 組比,PCSK9siRNA 組 Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)下降,Bcl-2蛋白表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.5umol/L、10umol/L、20umol/LCN 促進(jìn) HUVECs 細(xì)胞活性,40umol/L CN對(duì)HUVECs細(xì)胞活性具有抑制作用。2.CN對(duì)LSS誘導(dǎo)的HUVECs凋亡具有抑制作用,作用機(jī)制可能與CN上調(diào)miR-224表達(dá)、下調(diào)PCSK9表達(dá)相關(guān)。3.miR-224-5P 能夠抑制 HUVECs 中 PCSK9 表達(dá)。4.PCSK9siRNA 能夠抑制 LSS 誘導(dǎo)的 HUVECs 中 Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)。
【圖文】：

其中以２０ｕｍｏｌ／Ｌ邋ＣＮ邋＋邋ＬＳＳ組內(nèi)呈現(xiàn)凋亡形態(tài)的ＨＵ邋ＶＥＣｓ減少逡逑最為明顯。表明ＬＳＳ促進(jìn)ＨＵＶＥＣｓ凋亡，ＣＮ呈濃度依賴性減少ＬＳＳ誘逡逑導(dǎo)的ＨＵＶＥＣｓ調(diào)亡。（見圖２．］如紅色箭頭所示）逡逑ｍｍｍｍ逡逑■■逡逑圖２．１不同濃度ＣＮ對(duì)ＬＳＳ誘導(dǎo)的ＨＵＶＥＣｓ凋亡的影響逡逑注：Ａ：靜態(tài)培養(yǎng)組；Ｂ：ＬＳＳ邋組（３ｄｙｎｅ／ｃｍ２，１２ｈ）邋；邋Ｃ：５ｕｍｏｌ／ＬＣＮ邋＋邋ＬＳＳ逡逑組；Ｄ：邋１０ｕｍｏｌ／Ｌ邋ＣＮ邋＋邋ＬＳＳ邋組；Ｅ：２０ｕｍｏｌ／Ｌ邋ＣＮ邋＋邋ＬＳＳ邋組。（ｎ邋窆邋３）逡逑３．２．２流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ＣＮ對(duì)ＬＳＳ誘導(dǎo)ＨＵＶＥＣｓ凋亡的影響逡逑實(shí)驗(yàn)分為靜態(tài)培養(yǎng)組、ＬＳＳ組、５ｕｍｏｌ／Ｌ邋ＣＮ＋ＬＳＳ組、１０ｕｍｏｌ／Ｌ逡逑ＣＮ邋＋邋ＬＳＳ組、２０ｕｍｏｌ／Ｌ邋ＣＮ邋＋邋ＬＳＳ組。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。逡逑結(jié)果如圖２．２所示：與靜態(tài)培養(yǎng)組比，ＬＳＳ組ＨＵＶＥＣｓ凋亡率上升明顯，逡逑１９逡逑

（Ｐ＜０．邋０１），其中２０ｕｍｏＩ／ＬＣＮ＋ＬＳＳ組抑制ＨＵＶＥＣｓ凋亡的作用最強(qiáng)，，差逡逑異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜0．邋０１）。表明ＬＳＳ促進(jìn)刖ＶＥＣｓ凋亡，ＣＮ對(duì)ＬＳＳ逡逑誘導(dǎo)ＨＵＶＥＣｓ凋亡具有抑制作用，并且呈現(xiàn)濃度依賴性。（見圖２．邋２）逡逑Ａ邐ＳｔａｔｉＣ邐Ｂ邐ＬＳＳ逡逑ｉ0４邋°＇４0Ｓ％邐湖，邐１０４］３＇４０７＂邐２１９％逡逑３邐３逡逑１０邐１０邋ｉ邐＇邋，逡逑Ｕ邐＃邐ｂ）逡逑ｕ邐ＩＴ逡逑１。，＇身：：．邐Ａ邐娭＃逡逑１0°邋９１．８％＊邐ｌ邋３．２０％邐１０°邋６８．８°＾ｆ＾Ｐ邐５．９４％逡逑１０邋１０邋１０邋１０邐１０邐１０邋１０１邐１０＾邐１０邐１０逡逑ＦＬ１－Ｈ：：邋Ａｎｎｅｘｌｎ邋ＦＩＴＣ邐ＦＬ１－Ｈ：：邋Ａｎｎｅｘｉｎ邋ＦＩＴＣ逡逑ｑ邐５邋ｕｍｏｌ邋Ｌ邋ＣＮ＾ＬＳＳ邐Ｄ邐１邋Ｏｕｍｏｌ＇Ｌ邋ＣＮ－ＬＳＳ逡逑，。個(gè)《ｓ％邐「７邋霞。邐１０＾邐灥．逡逑１０３邐１０３邋：逡逑ｆ：邋２邐２：：邐４＾０逡逑５邋１０邐５邋１０邋Ｉ逡逑１邐＃＇邐１１邋身，逡逑ｉ0Ｕ邋７７．１％邐２．４８％邐１0邋８１．７％邐３．５５％逡逑１０°邋１0１邋１0２邋１0３邐１０邐１０邋１０邐１０邐１０邐１０逡逑ＦＬ１－Ｈ：：邋Ａｎｎｅｘｌｎ邋ＦｆＴＣ邐ＦＬ１－Ｈ：：邋Ａｎｎｅｘｌｎ邋ＦＩＴＣ逡逑Ｆ逡逑Ｅ邐２０ｕｍｏｌＬＣＮ－ＬＳＳ邐４０逡逑４邋Ｊ邋１．０５％邐９．９４％逡逑１０邐—３０逡逑３邐￡逡逑ＴＶ邋ｉ邋■：栜邐Ｉ－邐ｕｎ邐Ｍ邐“逡逑１邐１０邐ｓ．邐ｍｍ邐＾邐ｌｉｉＴｉｒｉ逡逑２邐
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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2 鄭自通;陽(yáng)巍;庹勤慧;鄭興;田s

本文編號(hào)：2692434