【摘要】：目的通過(guò)比較滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸、單純滅活大腸桿菌(E.Coli))免疫、單純乙酸(AA)灌腸三種不同方法建立的潰瘍性結(jié)腸炎模型,探討一種理想的潰瘍性結(jié)腸炎造模方法;從結(jié)腸組織、相關(guān)血液指標(biāo)、血清免疫學(xué)指標(biāo)、結(jié)腸組織免疫檢測(cè)、肝腎功能等方面,對(duì)葛仙湯治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究,為中醫(yī)藥驗(yàn)方“葛仙湯”治療潰瘍性結(jié)腸炎有效性方面提供一定的客觀依據(jù)。方法1.健康SD雄性大鼠120只,隨機(jī)均分為4組,第1、2組分別在實(shí)驗(yàn)第1、7、14、20D用滅活大腸桿菌菌株懸濁液注射于大鼠足底、腹部、背部皮下及腹腔內(nèi),第4組為對(duì)照組,以等量生理鹽水替代。實(shí)驗(yàn)第21d,第1、3組用5%乙酸灌腸。每日觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便性狀,每周予以稱(chēng)重、檢測(cè)大鼠大便隱血;分別于乙酸灌腸后第1w、2w、3w每組隨機(jī)處死10只,斷頭取血,檢測(cè)血清中IL-6的變化,處死大鼠,測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度并稱(chēng)重,肉眼及光鏡觀察結(jié)腸粘膜組織改變,免疫組化檢測(cè)結(jié)腸中TNF-α陽(yáng)性表達(dá)。2.取(E.Coli)菌株免疫+(AA)灌腸法成功造模的SD大鼠40只,按照隨機(jī)化原則分為葛仙湯高劑量組、中劑量組、低劑量組,對(duì)照組。葛仙湯高、中、低劑量組分別予以生藥24g/kg、12g/kg、6g/kg灌胃給藥。觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便性狀、體重,檢測(cè)大鼠大便隱血;灌胃后21D處死上述40只大鼠,檢測(cè)血清中IL-6、IL-10、白細(xì)胞、血小板、SCr、BUN、AST、ALT,測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度并稱(chēng)重,觀察腸壁組織學(xué)變化,免疫組化檢測(cè)結(jié)腸TNF-α、i NOS表達(dá)。結(jié)果1.第1組乙酸灌腸后2D開(kāi)始出現(xiàn)精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,活動(dòng)減少,扎堆,毛色無(wú)華、變脆;大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕;1-3w結(jié)腸潰瘍、炎癥、增厚,長(zhǎng)度縮短,結(jié)腸重量增加;結(jié)腸粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個(gè)或多處潰瘍;結(jié)腸重度炎癥,病變深及粘膜下層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽(yáng)性表達(dá)積分值明顯升高;各指標(biāo)均與對(duì)照組有顯著性差異。2.第2組造模完成后1-3w,大鼠精神狀態(tài)可,活動(dòng)如常,無(wú)明顯扎堆,毛色稍無(wú)光澤,大便質(zhì)稍軟,未見(jiàn)稀變及粘液便,大便隱血實(shí)驗(yàn)(+),無(wú)明顯體重減輕;結(jié)腸重量、長(zhǎng)度與對(duì)照組無(wú)差異;結(jié)腸粘膜輕度充血、水腫,輕度糜爛,無(wú)潰瘍形成;結(jié)腸粘膜呈慢性炎癥改變,病變局限于粘膜下層,基底1/3隱窩被破壞;血清IL-6稍升高;腸粘膜TNF-α陽(yáng)性表達(dá)積分值增高;以上各觀測(cè)指標(biāo)均與對(duì)照組無(wú)差異。3.第3組造模完成后1w時(shí)出現(xiàn)精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,活動(dòng)減少,扎堆,毛色無(wú)華、變脆;大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕;結(jié)腸潰瘍、炎癥、增厚,長(zhǎng)度縮短,結(jié)腸重量增加;結(jié)腸粘膜粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個(gè)或多處潰瘍;結(jié)腸重度炎癥,病變深及粘膜下層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽(yáng)性表達(dá)增高;以上各指標(biāo)均與對(duì)照組有差異。2-3w時(shí)體重逐漸增加,大便逐漸變硬,粘液膿血便逐漸消失,隱血(+);結(jié)腸長(zhǎng)度增長(zhǎng),重量減輕;結(jié)腸粘膜充血水腫減輕,潰瘍逐漸愈合;病變局限于粘膜下層,基底1/3隱窩被破壞;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽(yáng)性表達(dá)積分值逐漸下降;各組指標(biāo)3w時(shí)與對(duì)照組無(wú)明顯差異。4.葛仙湯各治療組的大鼠結(jié)腸炎癥、充血、水腫減輕,病變范圍縮小,隱窩破壞減少,結(jié)腸粘膜糜爛和潰瘍愈合,大便逐漸成形,膿血便減少,體重增加,疾病活動(dòng)指數(shù)高、中、低與對(duì)照組有顯著性差異,P0.01,高、中、低劑量組之間無(wú)差異,P0.05。5.葛仙湯各治療組血中白細(xì)胞、血小板數(shù)量減少,高、中、低治療組與對(duì)照組之間均有顯著性差異,P0.01,各治療組對(duì)于降低白細(xì)胞方面無(wú)差異,高劑量組降低血小板與中低劑量組之間均有差異,P0.05。高、低劑量對(duì)紅細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯升高作用,與對(duì)照組無(wú)差異。中劑量組紅細(xì)胞數(shù)量增高與對(duì)照組有差異,但與正常組差異顯著。6.葛仙湯各治療組大鼠血清IL-6含量減少,IL-10的含量增加,高、中、低劑量治療組與對(duì)照組之間均有顯著性差異,P0.01,高劑量升高IL-10的含量的作用與中、低劑量組有差異,P0.05;中劑量降低IL-6含量的作用與高、低劑量有差異,P0.05。7.葛仙湯各治療組大鼠結(jié)腸組織中i NOS、TNF-α陽(yáng)性表達(dá)積分值降低,高、中、低劑量組與對(duì)照組之間均有顯著性差異,P0.01,高、中劑量組與低劑量組之間有差異,P0.05,高、中劑量組之間無(wú)差異。8.葛仙湯高、中、低治療組血清中SCr、BUN、AST、ALT與正常組、對(duì)照組之間均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。結(jié)論1.滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸免疫復(fù)合法建立的潰瘍性結(jié)腸炎模型,病變更類(lèi)似人UC,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),是較理想的造模方法。2.葛仙湯對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎具有減少炎癥細(xì)胞、血小板數(shù)量。抑制炎癥因子釋放,抗凝血,促進(jìn)抗炎因子生成等作用。3.葛仙湯能夠促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎粘膜的修復(fù)。4.葛仙湯對(duì)肝腎功能無(wú)明顯損傷�？傊�,實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,葛仙湯通過(guò)對(duì)炎性細(xì)胞、炎癥因子、血小板、結(jié)腸病理組織改變的影響,對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎有一定的治療作用。
【圖文】：

）大鼠結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分 結(jié)腸組織大體表現(xiàn)見(jiàn)圖 1，HE 染色，光鏡下 2-5。1w 時(shí)第 1、3 組粘膜炎癥程度較重，病變深及粘膜下層或肌層，偶爾層，基底隱窩部分破壞或全部破壞，上皮部分或全部破壞 ，第 2 組結(jié)腸粘血、水沖，輕度糜爛，無(wú)潰瘍形成；結(jié)腸粘膜輕度炎癥，病變局限于粘膜層 1 /3 隱窩被破壞，第 1、3 組與第 2、4 各組之間均有顯著性差異( P<0.01),第 4 組之間無(wú)差異，P>0.05；2w 時(shí)第 1 組粘膜炎癥程度基本同前，第 3 組開(kāi)始愈合，，伴瘢痕形成，第 2 組粘膜充血水腫較前加重，無(wú)潰瘍形成，第 1、4 組之間有顯著性差異，P<0.01，第 2 組與第 4 組之間有差異，P<0.05； 組粘膜呈中度或重度炎癥，病變深及粘膜下層或肌層，仍有單個(gè)或多處陳舊基底隱窩部分破壞，上皮部分破壞，第 2 組粘膜充血水腫明顯，無(wú)糜爛或輕無(wú)潰瘍形成，第 3 組潰瘍基本愈合，病變局限于粘膜下層，基底 1 /3 隱窩 組與第 2、4 組之間均有顯著性差異（ P<0.01），第 2、3 組與第 4 組之間無(wú)>O.05），結(jié)果見(jiàn)表 6。

1w 時(shí) 2w 時(shí) 3w 時(shí)圖 2 第 1 組不同時(shí)期結(jié)腸 HE 染色圖片（1×10 倍光鏡下）1w 時(shí) 2w 時(shí) 3w 時(shí)圖 3 第 2 組 1、2、3w 時(shí)結(jié)腸 HE 染色圖片（1×10 倍光鏡下）
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2691572