【摘要】：1.高速逆流色譜分離純化百華花楸中的多酚化合物百華花楸(Sorbus pohuashanensis Hedl.)為薔薇科花楸屬植物,其果為花楸果。民間常以果實(shí)入藥,具有鎮(zhèn)咳、平喘、抗炎、抗氧化、抗輻射和抗癌等藥理活性,且花楸果中含有豐富的黃酮和酚類成分是其主要的活性成分。高速逆流色譜(HSCCC)是新型的液-液分配色譜,不以固體材料為載體,消除了固定相對樣品的不可逆吸附以及樣品分離過程中的污染、變性等問題,具有成本低、操作簡單、分離度高等優(yōu)點(diǎn)。本文首次采用高速色譜對百華花楸果中的多酚化合物進(jìn)行分離。本研究采用超聲提取,通過聚酰色譜柱梯度洗脫,得到50%和70%洗脫組分,利用優(yōu)化后的液相條件對花楸果中的成分進(jìn)行分析,對兩相體系進(jìn)行篩選。通過分配系數(shù)(K)、分配因子(α)及固定相保留率(S_F)確定最優(yōu)的兩相體系為乙酸乙酯-正丁醇-水3.5:1.5:5(50%組分)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水1:3:1:3.5(70%組分)。然后對高速逆流色譜進(jìn)行參數(shù)考察,結(jié)果顯示50%組分和70%組分在進(jìn)樣量150 mg、轉(zhuǎn)速850 r/min、流速2.0 mL/min時(shí)分離效果最好。本實(shí)驗(yàn)僅通過一步高速逆流色譜分離純化,成功得到了5種多酚化合物,分別為:新綠原酸(30.2 mg)、綠原酸(28.5 mg)、槲皮素-3-O-(6″-α-L-鼠李糖基-4'''-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷(7.5 mg)、3,5-O-雙咖啡�；鼘幩�(6.3 mg)和蘆丁(9.4mg),且樣品純度都在95%以上。這五種成分中除蘆丁外其余四種化合物是首次從百華花楸中分離得到的,其中綠原酸和新綠原酸是同分異構(gòu)體,而槲皮素-3-O-(6″-α-L-鼠李糖基-4'''-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷和3,5-O-雙咖啡�；鼘幩崾鞘状螐幕ㄩ睂俟麑�(shí)中分離鑒定的。本實(shí)驗(yàn)建立了一種快速分離百華花楸果中多酚化合物的有效方法,為花楸果中有效成分的深入研究和工業(yè)生產(chǎn)奠定基礎(chǔ),同時(shí)促進(jìn)其在食品、化妝品、藥品等領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用。2.幾種小分子化合物與人血清白蛋白相互作用研究款冬酮(Tussilagone)為款冬花的活性倍半萜,具有鎮(zhèn)咳平喘、抗炎、降脂、抗過敏等藥理活性�；诒菊n題組對款冬酮藥代動力學(xué)和體內(nèi)、體外代謝研究,為了使款冬酮的體內(nèi)過程研究更加全面科學(xué),本文首次開展款冬酮與人血清白蛋白(HSA)相互作用研究。作為具有相似藥理活性的金絲桃苷是一種重要的黃酮醇苷類化合物,具有鎮(zhèn)咳祛痰、抗炎、抗氧化、抗過敏、鎮(zhèn)痛、保肝、抗腫瘤等功效。本文研究了金絲桃苷與HSA的相互作用,并探討了維生素C(VC)存在下對金絲桃苷與HSA相互作用的影響。該研究通過對其猝滅類型、結(jié)合距離(r)、結(jié)合位點(diǎn)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)、結(jié)合常數(shù)(Ka)及蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化等方面進(jìn)行探究,有助于了解款冬酮、金絲桃苷在體內(nèi)的生物利用度及分布、代謝、排泄等過程,為款冬酮、金絲桃苷的藥代動力學(xué)和臨床用藥提供指導(dǎo)。更為探索復(fù)雜體系內(nèi)藥物-蛋白質(zhì)相互作用規(guī)律提供參考。本研究應(yīng)用紫外-可見光譜、熒光光譜、圓二色光譜及分子對接等技術(shù),通過Stern-Volmer方程、雙對數(shù)方程、F?rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論和Van’t Hoff方程研究款冬酮-HSA、金絲桃苷-HSA、金絲桃苷-VC-HSA的相互作用。結(jié)果顯示,款冬酮、金絲桃苷對HSA猝滅類型為靜態(tài)猝滅�？疃ㄟ^疏水作用力和氫鍵而金絲桃苷通過疏水作用力與HSA形成1:1的復(fù)合物,且都作用于HSA的Site I。而VC存在下,使金絲桃苷與HSA的作用力類型變?yōu)榉兜氯A力或氫鍵。此外VC存在時(shí)也會使金絲桃苷與HSA的結(jié)合常數(shù)降低,即VC與金絲桃苷共存時(shí),VC會降低金絲桃苷與HSA結(jié)合的穩(wěn)定性�？疃cHSA的結(jié)合距離為2.07 nm,金絲桃苷與HSA的結(jié)合距離為2.49 nm,說明款冬酮-HSA、金絲桃苷-HSA之間存在非輻射能力轉(zhuǎn)移。但當(dāng)VC存在時(shí)會使金絲桃苷-HSA的結(jié)合距離增大到2.75nm。采用三維熒光光譜、CD光譜檢測結(jié)果顯示,款冬酮、金絲桃苷誘導(dǎo)HSA的構(gòu)象發(fā)生了改變。VC的存在也會進(jìn)一步使金絲桃苷-HSA體系中HSA的構(gòu)象發(fā)生改變。利用分子對接模擬技術(shù),則從分子水平上獲得了款冬酮-HSA、金絲桃苷-HSA、金絲桃苷-VC-HSA結(jié)合的氨基酸殘基及與HSA的作用位點(diǎn),并對上述研究提供了佐證。
【圖文】：

單、應(yīng)用范圍廣、分離量大、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，，特別適用于極性物的分離及純化[62,63]。其具體原理應(yīng)用等將在下一節(jié)中詳細(xì)介紹。速逆流色譜技術(shù)天然產(chǎn)物分離分析技術(shù)的發(fā)展，其豐富的研究成果被廣泛的應(yīng)用、食品、化工等領(lǐng)域�，F(xiàn)代產(chǎn)業(yè)的高速發(fā)展和人們對高質(zhì)量生活然產(chǎn)物的分離朝著高效率、快速、高通量的方向發(fā)展。速逆流色譜的構(gòu)造逆流色譜是目前國際上比較先進(jìn)的現(xiàn)代色譜分離純化技術(shù)，是由研發(fā)的一種新型液-液分配色譜技術(shù)。如圖 0-1 所示，HSCCC 一般、控溫系統(tǒng)、輸液泵、進(jìn)樣閥、主機(jī)、控制器、檢測器、組分接組成。

前 言主機(jī)的構(gòu)造示意圖如圖 0-2 所示[64]，是由兩個(gè)大小完全相同中心齒輪形狀組成，中心齒輪安裝在公轉(zhuǎn)軸上，行星齒輪裝在自轉(zhuǎn)軸上。公軸水平放置。HSCCC 色譜柱上的多層螺旋管，纏繞在位于自轉(zhuǎn)軸的鼓儀器中，為保證平衡，主機(jī)中一般在螺旋管的對稱位置安裝一個(gè)配個(gè)到兩個(gè)相同的螺旋管。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1;R285

【參考文獻(xiàn)】

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1 倪付勇;宋亞玲;劉露;趙yN武;洪奎;黃文哲;王振中;蕭偉;;中低壓制備色譜制備新綠原酸對照品的研究[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2015年09期

2 李艷芳;陳雪園;熊衛(wèi)艷;張如松;楊蘇蓓;;款冬酮抗過敏作用研究[J];中國新藥雜志;2015年13期

3 柴曉東;;百華花楸果實(shí)有效成分的研究[J];遼寧林業(yè)科技;2015年04期

4 柴軍紅;宛春雷;郝經(jīng)緯;孫雪芳;;百花花楸活性成分季節(jié)變化研究[J];中國林副特產(chǎn);2015年02期

5 李夢莎;;響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取黑果腺肋花楸花色苷工藝的研究[J];中國釀造;2014年09期

6 李雪梅;周雪;趙英福;劉世娟;沈廣志;吳宜艷;侯甲福;;百華花楸果實(shí)水提取液鎮(zhèn)咳平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國醫(yī)學(xué)裝備;2014年S1期

7 王鵬;;國外黑果腺肋花楸多酚類物質(zhì)功能性研究進(jìn)展[J];林業(yè)科技;2014年04期

8 王幻;唐輝;王國軍;闞萌萌;任涵蘭;徐鵬;李照雪;;HPLC測定天山花楸葉提取物中6種黃酮成分[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2014年15期

9 王琳;張國文;;光譜法結(jié)合原子力顯微鏡和分子對接技術(shù)研究金絲桃苷與人血清白蛋白的相互作用[J];分析科學(xué)學(xué)報(bào);2012年05期

10 趙明優(yōu);;黑果腺肋花楸的開發(fā)利用價(jià)值及栽培技術(shù)[J];陜西林業(yè)科技;2012年02期

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2 劉丹;親水性多酚分離純化技術(shù)研究[D];大連理工大學(xué);2010年

3 李穎;中藥有效成分與人血清白蛋白相互作用研究[D];蘭州大學(xué);2007年

4 唐江宏;有機(jī)小分子與人血清白蛋白的相互作用研究[D];蘭州大學(xué);2006年

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5 張倩;金絲桃苷對Nrf2-ARE途徑的影響及其對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[D];西南大學(xué);2014年

6 劉秋紅;幾種抗菌藥物與牛血清白蛋白相互作用的光譜法研究[D];南昌大學(xué);2011年

7 張曉玲;天山花楸有效部位提取工藝及指紋圖譜的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

8 郭靜;天山花楸化學(xué)成分研究（Ⅱ）[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

9 王先;芳樟葉黃酮和多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性研究[D];廈門大學(xué);2008年

10 楊玲玲;天山花楸化學(xué)成分的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號：2690801