【摘要】：全蝎作為中藥組分,在治療驚厥、抽搐痙攣、癲癇等癥方面歷史已久,但至今人們對其藥效組分及藥效機(jī)理仍知之甚少。又由于中藥地道性受特定自然條件和生態(tài)環(huán)境等因素影響,因此不同地理?xiàng)l件下所產(chǎn)之全蝎中所含的藥效組分種類及含量可能亦會有所不同。陜北黃土高原地理環(huán)境獨(dú)特,歷來為我省地道中藥產(chǎn)區(qū)之一�；诖�,本論文以全蝎不同組分含量、不同溶劑提取物促細(xì)胞融合效應(yīng)等為切入點(diǎn),通過對全蝎提取物促細(xì)胞融合作用及機(jī)制的研究,窺視中藥全蝎的部分細(xì)胞水平作用機(jī)制,為進(jìn)一步闡明其藥效機(jī)理提供有力的實(shí)驗(yàn)支撐。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)全蝎組分測定野生活全蝎經(jīng)凍殺,干燥,分部分組(全蝎、全蝎去尾、全蝎尾、雌蝎、雄蝎、雌雄混合)粉碎并稱重。結(jié)果顯示,全蝎尾部占全蝎總體重的質(zhì)量百分比約為7%,混合全蝎野生活蝎重量為11.987g,經(jīng)過清洗三次,冷凍干燥后,重量降低為4.959g。ICP-AES法測定全蝎中金屬元素含量結(jié)果表明,K元素含量最豐富,其中混合全蝎達(dá)0.095263mg/mg。Cu元素含量最少,其中混合全蝎去尾僅為0.000263mg/mg。推測全蝎體內(nèi)可能含有某種金屬蛋白酶,在金屬蛋白酶的作用下發(fā)揮一定的促進(jìn)細(xì)胞融合作用�？捡R斯亮藍(lán)法測定全蝎水溶性蛋白的含量,結(jié)果顯示,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中蛋白質(zhì)含量分別為14.98%、17.92%和13.04%。索氏提取法提取全蝎粗脂肪含量表明,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中粗脂肪含量分別為4.10%,4.32及1.83%,提示全蝎脂肪主要集中在其軀干部位。(2)全蝎水提物、醇提物促雞血細(xì)胞融合作用及機(jī)制不同濃度的全蝎水提物分別作用于急性分離的雞血細(xì)胞不同時(shí)間后,雌雄混合去尾組在高濃度(150μg/μl)下,7 min時(shí)出現(xiàn)了大量的三核細(xì)胞。雌雄混合全蝎尾組中可明顯看到,隨著給藥濃度的增加,雙核融合細(xì)胞數(shù)量達(dá)最高值的時(shí)間提前。雄性全蝎對雞血細(xì)胞的融合作用較為溫和,促融合效率沒有雌性組顯著。水提物作用下,死亡細(xì)胞較少。三核細(xì)胞主要在高濃度組20至30 min時(shí)出現(xiàn)。醇提物對雞血細(xì)胞的促融合作用實(shí)驗(yàn)表明,雌雄混合全蝎的醇提物促融作用較為緩慢,且隨著作用時(shí)間延長而出現(xiàn)死亡細(xì)胞。雌雄混合全蝎尾的醇提物促融合效率隨著作用時(shí)間及濃度的增加而提高,且其后期死亡細(xì)胞數(shù)量也較少。就雄蝎組而言,雄性全蝎去尾醇提物的促融合作用最為顯著。在雌蝎組中,雌性全蝎與雌性全蝎去尾醇提物均表現(xiàn)出較強(qiáng)的促血細(xì)胞融合作用,特別是低濃度雌性全蝎去尾醇提物即可促細(xì)胞融合為三核細(xì)胞。而雌性全蝎尾醇提物低濃度下作用血細(xì)胞10 min便可觀察到融合的三核細(xì)胞,表現(xiàn)出很強(qiáng)的促細(xì)胞融合作用。綜上認(rèn)為,全蝎水溶液提取物與50%乙醇溶液提取物對雞血細(xì)胞的促融合作用顯著,并且促融合速率與濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。(3)全蝎仿生酶解提取物促雞血細(xì)胞融合作用及機(jī)制全蝎胃蛋白酶酶解液提取物的促細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)表明,雌雄混合全蝎的胃蛋白酶酶解液作用于雞血細(xì)胞不同時(shí)間,混合全蝎去尾與混合全蝎(對應(yīng)各個(gè)濃度)相比,混合全蝎去尾促進(jìn)雞血細(xì)胞融合能力較強(qiáng)。并且混合全蝎去尾在中濃度和高濃度下,7至30 min時(shí),三核細(xì)胞數(shù)量要明顯高于混合全蝎全體。在混合全蝎尾中,各個(gè)濃度下促雞血細(xì)胞融合作用明顯,并且死亡細(xì)胞數(shù)量較少。雄性全體促雞血細(xì)胞的融合變化中,高濃度的變化較為明顯。雄性全蝎去尾中濃度在7 min時(shí)出現(xiàn)了較多的三核細(xì)胞。在雄性全蝎尾中,低濃度隨著時(shí)間的推移,融合率明顯增加。在雄性中,出現(xiàn)死亡細(xì)胞的數(shù)量較少。在雌性全蝎中,細(xì)胞融合率相比混合與雄性均較好。在雌性全蝎去尾中濃度10至30 min出現(xiàn)了三核細(xì)胞。在雌性全蝎尾低濃度20至30 min時(shí)出現(xiàn)了死亡細(xì)胞。全蝎胰蛋白酶酶解液提取物的促細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,全蝎的全體和全蝎去尾各個(gè)濃度及性別組在10至30 min時(shí)均出現(xiàn)了大量的死亡細(xì)胞。只有全蝎的尾部保留了良好的促細(xì)胞融合的作用。綜上認(rèn)為,全蝎胃蛋白酶酶解液提取物具有較強(qiáng)的促細(xì)胞融合作用,而其胰蛋白酶酶解液提取物中,只有全蝎尾提取物對雞血細(xì)胞具有促細(xì)胞融合作用。
【圖文】：

圖 2-1 全蝎按照不同性別及處理方法的分組2.3 全蝎金屬元素的測定測定全蝎的金屬元素采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICP-AES）法測2.3.1 全蝎粉末的濕消解法處理稱取上述各處理粉碎樣品 2g(稱取范圍 0.5~2g)于 200 mL 潔凈的帶塞磨瓶中，，加入 5 mL 濃硝酸，放置于電熱套蒸至近干。待冷卻后補(bǔ)加 5 mL 濃硝續(xù)于電熱套上消解，直至發(fā)生棕色煙霧，開始冒白煙為止。待其冷卻后加入 1鹽酸和 5 mL 濃硝酸液，再置于電熱套上加熱至呈白色并開始冒濃煙為止。卻后，加入 4 mL6N 鹽酸再繼續(xù)加熱 30 min。取下當(dāng)溫度降至室溫后移入 5量瓶中用 0.5%硝酸定容至刻度，混勻備用[33]。2.3.2 制備標(biāo)準(zhǔn)溶液并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)待測金屬的硫酸鹽分為重金屬和過渡金屬。重金屬包括Cu和Zn，過渡金屬包括Na，Mg和K。按照表1所示各自配置5個(gè)不同濃度梯

鈉、鉀含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2689329