【摘要】：全蝎作為中藥組分,在治療驚厥、抽搐痙攣、癲癇等癥方面歷史已久,但至今人們對其藥效組分及藥效機理仍知之甚少。又由于中藥地道性受特定自然條件和生態(tài)環(huán)境等因素影響,因此不同地理條件下所產(chǎn)之全蝎中所含的藥效組分種類及含量可能亦會有所不同。陜北黃土高原地理環(huán)境獨特,歷來為我省地道中藥產(chǎn)區(qū)之一�；诖�,本論文以全蝎不同組分含量、不同溶劑提取物促細胞融合效應(yīng)等為切入點,通過對全蝎提取物促細胞融合作用及機制的研究,窺視中藥全蝎的部分細胞水平作用機制,為進一步闡明其藥效機理提供有力的實驗支撐。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)全蝎組分測定野生活全蝎經(jīng)凍殺,干燥,分部分組(全蝎、全蝎去尾、全蝎尾、雌蝎、雄蝎、雌雄混合)粉碎并稱重。結(jié)果顯示,全蝎尾部占全蝎總體重的質(zhì)量百分比約為7%,混合全蝎野生活蝎重量為11.987g,經(jīng)過清洗三次,冷凍干燥后,重量降低為4.959g。ICP-AES法測定全蝎中金屬元素含量結(jié)果表明,K元素含量最豐富,其中混合全蝎達0.095263mg/mg。Cu元素含量最少,其中混合全蝎去尾僅為0.000263mg/mg。推測全蝎體內(nèi)可能含有某種金屬蛋白酶,在金屬蛋白酶的作用下發(fā)揮一定的促進細胞融合作用�？捡R斯亮藍法測定全蝎水溶性蛋白的含量,結(jié)果顯示,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中蛋白質(zhì)含量分別為14.98%、17.92%和13.04%。索氏提取法提取全蝎粗脂肪含量表明,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中粗脂肪含量分別為4.10%,4.32及1.83%,提示全蝎脂肪主要集中在其軀干部位。(2)全蝎水提物、醇提物促雞血細胞融合作用及機制不同濃度的全蝎水提物分別作用于急性分離的雞血細胞不同時間后,雌雄混合去尾組在高濃度(150μg/μl)下,7 min時出現(xiàn)了大量的三核細胞。雌雄混合全蝎尾組中可明顯看到,隨著給藥濃度的增加,雙核融合細胞數(shù)量達最高值的時間提前。雄性全蝎對雞血細胞的融合作用較為溫和,促融合效率沒有雌性組顯著。水提物作用下,死亡細胞較少。三核細胞主要在高濃度組20至30 min時出現(xiàn)。醇提物對雞血細胞的促融合作用實驗表明,雌雄混合全蝎的醇提物促融作用較為緩慢,且隨著作用時間延長而出現(xiàn)死亡細胞。雌雄混合全蝎尾的醇提物促融合效率隨著作用時間及濃度的增加而提高,且其后期死亡細胞數(shù)量也較少。就雄蝎組而言,雄性全蝎去尾醇提物的促融合作用最為顯著。在雌蝎組中,雌性全蝎與雌性全蝎去尾醇提物均表現(xiàn)出較強的促血細胞融合作用,特別是低濃度雌性全蝎去尾醇提物即可促細胞融合為三核細胞。而雌性全蝎尾醇提物低濃度下作用血細胞10 min便可觀察到融合的三核細胞,表現(xiàn)出很強的促細胞融合作用。綜上認為,全蝎水溶液提取物與50%乙醇溶液提取物對雞血細胞的促融合作用顯著,并且促融合速率與濃度和時間呈正相關(guān)。(3)全蝎仿生酶解提取物促雞血細胞融合作用及機制全蝎胃蛋白酶酶解液提取物的促細胞融合實驗表明,雌雄混合全蝎的胃蛋白酶酶解液作用于雞血細胞不同時間,混合全蝎去尾與混合全蝎(對應(yīng)各個濃度)相比,混合全蝎去尾促進雞血細胞融合能力較強。并且混合全蝎去尾在中濃度和高濃度下,7至30 min時,三核細胞數(shù)量要明顯高于混合全蝎全體。在混合全蝎尾中,各個濃度下促雞血細胞融合作用明顯,并且死亡細胞數(shù)量較少。雄性全體促雞血細胞的融合變化中,高濃度的變化較為明顯。雄性全蝎去尾中濃度在7 min時出現(xiàn)了較多的三核細胞。在雄性全蝎尾中,低濃度隨著時間的推移,融合率明顯增加。在雄性中,出現(xiàn)死亡細胞的數(shù)量較少。在雌性全蝎中,細胞融合率相比混合與雄性均較好。在雌性全蝎去尾中濃度10至30 min出現(xiàn)了三核細胞。在雌性全蝎尾低濃度20至30 min時出現(xiàn)了死亡細胞。全蝎胰蛋白酶酶解液提取物的促細胞融合實驗結(jié)果顯示,全蝎的全體和全蝎去尾各個濃度及性別組在10至30 min時均出現(xiàn)了大量的死亡細胞。只有全蝎的尾部保留了良好的促細胞融合的作用。綜上認為,全蝎胃蛋白酶酶解液提取物具有較強的促細胞融合作用,而其胰蛋白酶酶解液提取物中,只有全蝎尾提取物對雞血細胞具有促細胞融合作用。
【圖文】：

圖 2-1 全蝎按照不同性別及處理方法的分組2.3 全蝎金屬元素的測定測定全蝎的金屬元素采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICP-AES）法測2.3.1 全蝎粉末的濕消解法處理稱取上述各處理粉碎樣品 2g(稱取范圍 0.5~2g)于 200 mL 潔凈的帶塞磨瓶中，，加入 5 mL 濃硝酸，放置于電熱套蒸至近干。待冷卻后補加 5 mL 濃硝續(xù)于電熱套上消解，直至發(fā)生棕色煙霧，開始冒白煙為止。待其冷卻后加入 1鹽酸和 5 mL 濃硝酸液，再置于電熱套上加熱至呈白色并開始冒濃煙為止。卻后，加入 4 mL6N 鹽酸再繼續(xù)加熱 30 min。取下當(dāng)溫度降至室溫后移入 5量瓶中用 0.5%硝酸定容至刻度，混勻備用[33]。2.3.2 制備標準溶液并繪制標準曲線將準備好的標準待測金屬的硫酸鹽分為重金屬和過渡金屬。重金屬包括Cu和Zn，過渡金屬包括Na，Mg和K。按照表1所示各自配置5個不同濃度梯

鈉、鉀含量的標準曲線
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2689329