【摘要】：目的由慢性大腦低灌注導致的皮層下缺血性血管性癡呆是一種常見的血管性癡呆,目前臨床上尚無切實有效的治療藥物。該疾病的主要病理改變?yōu)槟X白質損傷,包括少突膠質細胞丟失、髓鞘脫失等,其發(fā)生與小膠質細胞激活引起的炎癥反應密切相關。已有研究發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中可以抑制小膠質細胞的激活,因此本課題擬研究雷公藤甲素對慢性大腦低灌注引起的白質損傷的治療作用并初步探討其作用機制。方法動物實驗采用雄性8-10周齡C57BL/6J小鼠,分為假手術組、右側頸總動脈結扎(right unilateral common carotid artery occlusion,rUCCAO)模型組、雷公藤甲素低劑量給藥組(5μg/kg/d)、雷公藤甲素高劑量給藥組(20μg/kg/d)。給藥組在手術后腹腔注射雷公藤甲素21天后,各組進行新事物識別、水迷宮試驗。行為學實驗結束后,分別進行Western blot、免疫熒光染色、酶聯(lián)免疫吸附劑測定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、生化指標測定。離體細胞實驗采用小膠質細胞株BV2細胞和少突膠質細胞培養(yǎng),分別設正常對照組組、缺糖缺氧處理組、雷公藤甲素低劑量給藥組(0.001 nM)、雷公藤甲素中劑量給藥組(0.01 nM)、雷公藤甲素高劑量給藥組(0.1 nM),進行免疫熒光染色、ELISA、PI/Hoechst、乳酸脫氫酶測定。結果在慢性大腦低灌注后,雷公藤甲素高劑量給藥組較模型組在新事物識別試驗中的識別分數(shù)有顯著提高(P0.001),在水迷宮試驗的學習階段,雷公藤甲素高劑量給藥組在尋找平臺潛伏期上有明顯縮短(P0.05),而在記憶保持的測試階段中,目標象限的探索時間明顯延長(P0.001),而雷公藤甲素低劑量給藥組則無顯著性差異(P0.05)。髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein,MBP)反應髓鞘損傷情況,雷公藤甲素高劑量給藥組小鼠較模型組小鼠在MBP的免疫熒光強度和Western blot的表達水平上都有明顯上調(P0.01,P0.001),并且CC-1+少突膠質細胞數(shù)量明顯增多(P0.001)。此外,高劑量雷公藤甲素明顯抑制了小膠質細胞激活(P0.001)以及炎癥因子TNF-α、IL-6的表達(P0.05,P0.05)。雷公藤甲素低劑量給藥組在以上指標上有改善趨勢,但無顯著性差異(P0.05)。假手術組、模型組、雷公藤甲素高劑量給藥組小鼠血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、白蛋白、肌酐、血尿素氮等反應肝腎功能的生化指標水平均無顯著差異(P0.05)。在離體實驗中,通過MBP免疫熒光染色、PI/Hoechst、乳酸脫氫酶檢測發(fā)現(xiàn)缺糖缺氧后雷公藤甲素劑量依賴地減輕少突膠質細胞損傷,同時通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素還顯著抑制了小膠質細胞株BV2細胞TNF-α、IL-6的表達。結論雷公藤甲素可以改善慢性大腦低灌注引起的認知功能障礙和腦白質損傷,該作用可能是通過抑制小膠質細胞激活和TNF-α、IL-6表達,減少少突膠質細胞的丟失,從而改善脫髓鞘的情況,提示雷公藤甲素對慢性大腦低灌注引起的皮層下缺血性血管性癡呆有潛在的治療作用。
【學位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2687253