【摘要】：目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種以慢性復(fù)發(fā)性泄瀉為主要癥狀的胃腸道疾病,其特征是慢性炎癥、腹痛、直腸出血、腹瀉和營(yíng)養(yǎng)不良。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明細(xì)胞內(nèi)的Nod樣受體P3(NLRP3)是維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵,與UC的發(fā)病有關(guān)。前期本團(tuán)隊(duì)的研究表明,潰結(jié)靈對(duì)UC具有良好的療效。本研究以NLRP3為切入點(diǎn),進(jìn)一步研究潰結(jié)靈治療潰瘍性結(jié)腸大鼠所具有的作用。內(nèi)容:1.潰結(jié)靈對(duì)UC大鼠重量、結(jié)腸長(zhǎng)度、結(jié)腸質(zhì)量及病理學(xué)形態(tài)的影響炎性腸病主要有兩種類型:潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病,它是由于腸道免疫系統(tǒng)失調(diào)而造成的一種慢性、復(fù)發(fā)性、持續(xù)性炎癥性疾病。建立大鼠UC模型,采用潰結(jié)靈進(jìn)行治療,觀察大鼠在以下方面的變化:大鼠重量、結(jié)腸長(zhǎng)度、質(zhì)量、病理學(xué)形態(tài),評(píng)估潰結(jié)靈治療TNBS誘導(dǎo)的UC大鼠所具有的作用。方法:將60只SD大鼠隨機(jī)分為六組:正常組、模型組、潰結(jié)靈高劑量組、潰結(jié)靈中劑量組、潰結(jié)靈低劑量組和柳氮磺砒啶(SASP)組,每組10只。除正常組外,其余各組予三硝基苯磺酸灌腸構(gòu)建UC模型,并分別給予水,高、中、低劑量潰結(jié)靈和柳氮磺吡啶進(jìn)行灌胃10天。給藥結(jié)束后后觀察UC大鼠在以下方面的變化:大鼠體重、結(jié)腸長(zhǎng)度、質(zhì)量、及病理學(xué)形態(tài)。結(jié)果:潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短(P0.01),結(jié)腸質(zhì)量明顯增加(P0.01),體重減輕;與模型組比較,潰結(jié)靈治療組和柳氮磺砒啶組結(jié)腸長(zhǎng)度不同程度增加(P0.01),結(jié)腸質(zhì)量明顯下降(P0.05),體重增加。病理結(jié)果顯示模型組結(jié)腸組織固有層崩解,血液滲出、潰瘍形成,毛細(xì)血管管徑增大、血液充盈明顯,可見(jiàn)大量急慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)于肌層及外膜內(nèi)。潰結(jié)靈組和柳氮磺砒啶組以上變化較模型組減輕明顯(P0.05)。2.潰結(jié)靈對(duì)UC大鼠結(jié)腸黏膜NLRP3、caspase-1、ASCmRNA表達(dá)的影響NLRP3炎性體是一種信號(hào)復(fù)合物,此信號(hào)復(fù)合物是由NLRP3調(diào)節(jié)caspase-1的激活所形成的。NLRP3炎性體由NLRP3、ASC和caspase-1三部分組成。病原相關(guān)分子模式使NLRP3激活,促進(jìn)caspase-1依賴的pro-IL-1β、pro-IL-18、pro-IL-33的生成,從而使這些分子的活性形式得以分泌和釋放。方法:動(dòng)物造模、分組和給藥同實(shí)驗(yàn)一。采集大鼠結(jié)腸粘膜,進(jìn)行充分勻漿,柱式法提取總RNA。采用熒光定量PCR法檢測(cè)大鼠結(jié)腸黏膜中NLRP3、caspase-1、ASCmRNA的含量,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:模型組大鼠結(jié)腸粘膜中NLRP3、caspase-1、ASC的mRNA表達(dá)顯著增高(P0.01或0.05);潰結(jié)靈高、中、低劑量組和柳氮磺砒啶組NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表達(dá)均顯著減少(P0.01或0.05)。3.潰結(jié)靈對(duì)UC大鼠結(jié)腸黏膜NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表達(dá)所產(chǎn)生的影響通過(guò)觀察潰結(jié)靈對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸粘膜NLRP3相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,探討相關(guān)治療機(jī)制。方法:動(dòng)物造模、分組和給藥同實(shí)驗(yàn)一。提取結(jié)腸粘膜總蛋白,采用BCA法測(cè)定蛋白含量。隨后采用Western blot法檢測(cè)大鼠結(jié)腸黏膜中NLRP3、caspase-1、ASC蛋白的相對(duì)表達(dá)量,并將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:模型組大鼠結(jié)腸粘膜中NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表達(dá)高于正常組(P0.05)潰結(jié)靈高、中劑量組和柳氮磺吡啶組此種增高趨勢(shì)明顯改善(P0.05),潰結(jié)靈低劑組NLRP3、caspase-1、ASC蛋白相對(duì)表達(dá)量有下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(29)0.05)4.潰結(jié)靈對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜IL-1β、IL-18、IL-33含量的影響NLRP3激活后,其寡聚化結(jié)合了PYD結(jié)構(gòu)域與ASC的PYD結(jié)構(gòu)域,并通過(guò)CARD區(qū)域募集procaspase-1使得Caspase-1活化�；罨腸aspase-1能對(duì)pro-IL-1β、pro-IL-18、pro-IL-33進(jìn)行剪切,使其形成具有生物活性的成熟細(xì)胞因子從而參與腸道免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程,它們?cè)跐冃越Y(jié)腸炎的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。方法:動(dòng)物造模、分組和給藥同實(shí)驗(yàn)一。采集大鼠結(jié)腸黏膜樣本,檢測(cè)大鼠結(jié)腸粘膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量采用酶聯(lián)免疫吸附法。結(jié)果:模型組大鼠結(jié)腸粘膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量明顯高于正常組(P0.01),潰結(jié)靈高、中、低劑量組和SASP組結(jié)腸粘膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量明顯低于模型組(P0.05或P0.01);結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在TNBS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎大鼠中,炎癥的發(fā)展可能與大鼠結(jié)腸粘膜的NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白和mRNA的表達(dá)升高,NLPR3炎性體被激活,及其下游相關(guān)炎癥因子IL-1β、IL-18、IL-33的表達(dá)升高有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)以潰結(jié)靈對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎進(jìn)行給藥治療,大鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度和病理形態(tài)結(jié)果提示潰結(jié)靈能緩解TNBS所致的潰瘍性結(jié)腸炎。其作用機(jī)制可能與潰結(jié)靈下調(diào)大鼠結(jié)腸粘膜中NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白和mRNA的表達(dá),并抑制其下游相關(guān)炎癥因子IL-1β、IL-18、IL-33的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

24.2322.8819.78*26.02*27.61**柳氮磺吡啶10 0.5212.0014.39216.5018.19218.9020.65232.1033.45243．4036.27*與模型組比較*P㩳0.05， **P㩳0.012.1.3.2 結(jié)腸長(zhǎng)度及質(zhì)量由表 2 可見(jiàn)，與正常組比較，模型組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短(P<0.01)；與模型組比較，潰結(jié)靈高中低劑量組和柳氮磺砒啶組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯增加(P<0.01)。與正常組比較，模型組結(jié)腸質(zhì)量明顯增加(P<0.01)；與模型組比較，結(jié)靈潰結(jié)靈高中低劑量組和柳氮磺砒啶組結(jié)腸質(zhì)量下降(P<0.05)。表 2 潰結(jié)靈對(duì)結(jié)腸長(zhǎng)度和結(jié)腸質(zhì)量的影響( ±S)組別 n劑 量(g/kg) 結(jié)腸長(zhǎng)度 cm 單位結(jié)腸質(zhì)量（g/cm）正常組 10 - 15.40 0.77** 1.27 0.14**模型組 10 - 12.75 1.74 4.29 1.72潰結(jié)靈 10 18．3 14.69 1.01** 1.64 1.15**潰結(jié)靈 10 9.2 14.21 0.65** 2.58 2.19*潰結(jié)靈 10 4.6 14.05 1.36** 2.75 1.89*柳氮磺吡啶 10 0.5 14.07 0.53** 2.64 1.96*與模型組比較*P㩳0.05， **P㩳0.01

潰結(jié)靈中劑量組(9.2g/kg)潰結(jié)靈低劑量組(4.6g/kg)柳氮磺吡啶組(0.5g/kg)圖 2 潰結(jié)靈對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織病理組織學(xué)的影響（HE 100）2.1.4 討論潰瘍性結(jié)腸炎是一種消化道疾病，此疾病病因不明，主要侵犯直腸和乙狀結(jié)腸（可延伸至降結(jié)腸、橫結(jié)腸、少數(shù)可累及全結(jié)腸），粘膜和粘膜下層的淺表性、非特異性炎癥。近年來(lái)隨著社會(huì)的進(jìn)步，經(jīng)濟(jì)水平的不斷提高，UC 在我國(guó)和世界范圍內(nèi)的發(fā)病率均顯示出了上升的趨勢(shì)。因尚未研究出疾病發(fā)生的確切病因和機(jī)制，而治療的關(guān)鍵是闡明疾病發(fā)生的分子機(jī)制。由于應(yīng)用人體作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)象有著諸多方面的局限，研究并成功制備與人類疾病相似或等同的潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型尤為重要，也是研究該病病因、發(fā)病機(jī)理、開(kāi)發(fā)有限藥物和采取各種治療手段的前提。目前國(guó)內(nèi)外研究潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型，大致包括四類：免疫法誘導(dǎo)的動(dòng)物模型、化學(xué)法誘導(dǎo)的動(dòng)物模型、人類β 微球蛋白轉(zhuǎn)基因模型和小鼠 HLA-B27、根據(jù)中醫(yī)證型建立的動(dòng)物模型。隨著對(duì)免疫學(xué)的深入研究，目前該病較公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制是免疫的異常，，采用免疫法制備的潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型，在發(fā)病機(jī)制上更加接近本病的發(fā)病原
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2685887