【摘要】：研究目的:1.研究肝纖維化中醫(yī)肝絡(luò)病理論;2.研究肝纖維化與康復(fù)新液“血瘀絡(luò)阻-通利血脈”證治關(guān)系理論;3.以CCl_4肝纖維化模型大鼠為對(duì)象研究康復(fù)新液抗肝纖維化作用及機(jī)制,一定程度上為肝纖維化中醫(yī)肝絡(luò)病的理論認(rèn)識(shí)和康復(fù)新液用于抗肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。研究方法:1.理論研究:(1)通過(guò)中醫(yī)肝絡(luò)病與肝纖維化相關(guān)性的研究,提出肝纖維化的中醫(yī)肝絡(luò)病理論認(rèn)識(shí);(2)通過(guò)復(fù)習(xí)康復(fù)新液研究進(jìn)展,提出肝纖維化與康復(fù)新液“血瘀絡(luò)阻-通利血脈”證治關(guān)系的理論認(rèn)識(shí)。2.實(shí)驗(yàn)研究:(1)采用大鼠腹腔注射CCl_4油劑(CCl_4∶橄欖油=2∶3)建立肝纖維化大鼠模型;(2)肉眼觀察大鼠一般體征;(3)HE染色法觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)改變,Masson染色法觀察肝臟組織膠原纖維改變;(4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)肝功能血清生化指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine transaminase,ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate transaminase,AST)與肝纖維化血清生物學(xué)標(biāo)志物透明質(zhì)酸(Hyaluronan,HA)、層粘連蛋白(Laminin,LN)、Ⅲ型前膠原氨基端肽(typeⅢprocollagen amino peptide,PⅢNP)、IV型膠原(Collagen IV,ColIV)和羥脯氨酸(hydroxyproline,Hyp);(5)免疫組化法檢測(cè)肝纖維化肝組織生物學(xué)標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅲ型膠原(typeⅢCollagen,ColⅢ)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑1(tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1);(6)Western Blot檢測(cè)肝組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、β-catenin、Axin和糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase3β,GSK-3β)。研究結(jié)果:1.康復(fù)新液抗肝纖維化作用評(píng)價(jià):(1)一般體征:正常對(duì)照組大鼠毛色光澤,體格健壯,精神狀態(tài)良好,食欲佳。其余造模組大鼠隨著造模時(shí)間推進(jìn),毛色萎黃欠光澤,精神狀態(tài)欠佳,喜靜蜷臥,飲食減少,時(shí)有大便溏泄。(2)肝組織病理學(xué):HE染色法結(jié)果顯示:正常對(duì)照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,小葉內(nèi)肝細(xì)胞索排列較整齊,肝細(xì)胞大小均勻,無(wú)變性、壞死,胞核與胞質(zhì)清晰可見(jiàn),匯管區(qū)未見(jiàn)纖維組織增生和小膽管增生;模型對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)不清,甚至破壞,肝細(xì)胞排列紊亂,肝細(xì)胞彌漫脂肪變性,匯管區(qū)結(jié)締組織增生,纖維間隔形成,纖維組織增生明顯,中央靜脈區(qū)可見(jiàn)明顯瘀血;與模型對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組上述病變改善。Masson染色法結(jié)果顯示:模型組肝小葉周邊、匯管區(qū)和中央靜脈周圍可見(jiàn)大量藍(lán)色膠原纖維;與模型對(duì)照組相比較,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組膠原纖維明顯減少。(3)肝功能血清生化指標(biāo):ELISA檢測(cè)血清AST、ALT,結(jié)果顯示:與模型對(duì)照組相比較,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組血清AST、ALT活性明顯降低;(4)肝纖維化血清生物學(xué)標(biāo)志物:ELISA檢測(cè)血清HA、LN、ColIV、PⅢNP、HyP,結(jié)果顯示:與模型對(duì)照組相比較,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組明顯降低;(5)肝纖維化肝組織生物學(xué)標(biāo)志物:免疫組化結(jié)果顯示:與模型對(duì)照組相比較,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組α-SMA、ColⅢ、TIMP-1明顯減少。2.康復(fù)新液抗肝纖維化機(jī)制:Western Blot檢測(cè)TGF-β1、Smad3、Axin、GSK-3β和β-catenin,結(jié)果顯示:與模型對(duì)照組相比較,陽(yáng)性對(duì)照組和康復(fù)新液各劑量組TGF-β1、Smad3和β-catenin表達(dá)明顯降低,Axin和GSK-3β表達(dá)明顯增加。研究結(jié)論:1.理論研究:肝纖維化的中醫(yī)病機(jī):濕熱疫毒入侵,正氣虧虛,氣虛血瘀,終致濕毒瘀互結(jié),入肝滯絡(luò),屬中醫(yī)肝絡(luò)病。2.實(shí)驗(yàn)研究:(1)CCl_4肝纖維化大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)、肝纖維化血清和肝組織生物學(xué)標(biāo)志物及信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白等病理學(xué)、生物學(xué)指標(biāo)一定程度上佐證肝纖維化中醫(yī)肝絡(luò)病的理論認(rèn)識(shí)。(2)康復(fù)新液可改善CCl_4肝纖維化模型肝小葉結(jié)構(gòu)不清甚至破壞,減輕纖維結(jié)締組織增生;降低肝功能血清生化指標(biāo)AST和ALT的活性;降低肝纖維化血清生物學(xué)標(biāo)志物HA、LN、ColIV、PⅢNP、HyP以及肝組織生物學(xué)標(biāo)志物α-SMA、ColⅢ、TIMP-1,改善CCl_4模型大鼠肝纖維化。(3)康復(fù)新液可能通過(guò)下調(diào)TGF-β1、Smad3和β-catenin,上調(diào)Axin和GSK-3β,發(fā)揮改善CCl_4模型大鼠肝纖維化的作用。
【圖文】：

圖 1 ALT、AST 標(biāo)準(zhǔn)曲線表 2 康復(fù)新液對(duì) CCl4肝纖維化模型大鼠血清 ALT、AST 活性的影響（mIU/mL）（ x ±s）組別 n ALT ASTControl 6 41.01±0.81 40.38±0.56Model 6 65.75±3.07 ** 69.47±2.41 **KFX-LD 6 53.89±2.94 **## 52.64±4.06 **##KFX-MD 6 56.09±4.69 **## 54.28±2.82 **##KFX-HD 6 53.72±2.30 **## 53.49±3.54 **##COL 6 54.57±2.84 **## 53.08±4.03 **##

圖 1 ALT、AST 標(biāo)準(zhǔn)曲線表 2 康復(fù)新液對(duì) CCl4肝纖維化模型大鼠血清 ALT、AST 活性的影響（mIU/mL）（ x ±s）組別 n ALT ASTControl 6 41.01±0.81 40.38±0.56Model 6 65.75±3.07 ** 69.47±2.41 **KFX-LD 6 53.89±2.94 **## 52.64±4.06 **##KFX-MD 6 56.09±4.69 **## 54.28±2.82 **##KFX-HD 6 53.72±2.30 **## 53.49±3.54 **##COL 6 54.57±2.84 **## 53.08±4.03 **##
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

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本文編號(hào)：2685063