【摘要】：目的:研究白頭翁皂苷有效成分α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌糖酵解的干預(yù)作用及其作用機制,以闡明α-常春藤皂苷抗腫瘤的作用機制,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。第一部分α-常春藤皂苷對人肺癌細(xì)胞增殖的影響方法:體外培養(yǎng)人肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460細(xì)胞、給α-常春藤皂苷進行干預(yù),采用CCK8細(xì)胞增殖-毒性實驗研究α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549、NCHI292、NCHI460細(xì)胞的增殖的影響;采用平板克隆形成實驗,研究白頭翁皂苷有效成分α-常春藤皂苷的對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:CCK8結(jié)果顯示α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460細(xì)胞具有較好的體外抑制作用,α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460細(xì)胞的半效抑制濃度(IC_(50))值分別為9.53μg/ml、12.52μg/ml、12.86μg/ml;平板克隆形成實驗結(jié)果顯示α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞良好的抑制作用,且呈現(xiàn)良好的劑量依賴關(guān)系。第二部分α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞糖酵解的干預(yù)作用及其機制研究方法:體外培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞,給予α-常春藤皂苷進行干預(yù),采用試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷(ATP)含量;采用Western Blot法檢測細(xì)胞中糖酵解關(guān)鍵酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4及糖酵解調(diào)控因子c-Myc、HIF-1α、p53、Akt表達量;c-Myc抑制劑聯(lián)合α-常春藤皂苷進行干預(yù)后,采用Western Blot法檢測細(xì)胞中糖酵解關(guān)鍵酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表達。結(jié)果:生化試劑盒測試結(jié)果顯示,與空白組相比,α-常春藤皂苷能顯著降低A549腫瘤細(xì)胞對葡萄糖的攝取(P0.05),增加乳酸的生成(P0.05),降低細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷的含量(P0.05);Western Blot結(jié)果顯示,α-常春藤皂苷顯著下調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4、c-Myc、HIF-1α等關(guān)鍵酶及調(diào)控因子的表達;c-Myc抑制劑聯(lián)合α-常春藤皂苷進行干預(yù)后糖酵解關(guān)鍵酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表達與單用c-Myc抑制劑及α-常春藤皂苷比較,出現(xiàn)一定程度的下調(diào)。第三部分α-常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其作用機制方法:建立人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞裸鼠異體移植瘤模型,α-常春藤皂苷干預(yù)后,通過測量瘤重及瘤體積觀察α-常春藤皂苷對腫瘤的抑制作用;采用生化試劑盒檢測腫瘤組織中葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷(ATP)含量;采用免疫組化的方法測定移植瘤中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4等關(guān)鍵酶及轉(zhuǎn)運蛋白的表達。結(jié)果:裸鼠異體移植瘤結(jié)果顯示,α-常春藤皂苷給藥組對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用顯著(P0.05);葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷(ATP)試劑盒結(jié)果顯示,α-常春藤皂苷5 mg/kg劑量組及10 mg/kg劑量組腫瘤組織中LD及ATP的含量顯著降低(P0.05),GLU含量顯著升高(P0.05);免疫組化結(jié)果顯示,α-常春藤皂苷給藥后,移植瘤中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4等關(guān)鍵酶及轉(zhuǎn)運蛋白表達顯著下調(diào)。結(jié)論:α-常春藤皂苷在體內(nèi)及體外通過抑制非小細(xì)胞肺癌A549糖酵解水平從而抑制其生長,其機制為α-常春藤皂苷可能通過抑制c-Myc及HIF-1α而抑制其下游GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表達,經(jīng)驗證,α-常春藤皂苷可通過作用于c-Myc而抑制腫瘤糖酵解,其通過影響HIF-1α而抑制腫瘤糖酵解的作用有待進一步驗證。
【圖文】：

圖 1。 1 α-常春藤皂苷對人肺癌細(xì)胞增殖的影響（ ± , n=5hibitory effect of α-Hederin on proliferation in human lung（ ± , n=5）濃度 A549 抑制率 NCI-H460 抑制率 NCI-H 100.00% ± 0.00% 100.00% ± 0.00% 100.00 95.33% ± 5.03% 86.25% ± 6.12% 85.64% 59.33% ± 7.64% 56.65% ± 7.24% 50.97% 54.00% ± 2.00% 38.54% ± 3.58% 38.74%42.00% ± 2.34% 25.65% ± 5.87% 28.32%37.33%±7.64% 24.53%±6.56% 20.750.00% ± 0.00% 0.00% ± 0.00% 0.00%

植瘤裸鼠瘤重及瘤體積結(jié)果顯示，與模型組比較，各給藥移植瘤瘤體積及瘤重抑制作用明顯（P<0.05），α-常春藤皂苷 5 mg/kg 抑瘤率分別為 40%，，24%，詳見表 2，圖 1，常春藤皂苷對非小細(xì)胞肺癌 A549 裸鼠異體移植瘤瘤體積 1 Effect of α-Hederin on Tumor Volume of Non-small Cell A549 Transplantable Tumorsmm3
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2684068