【摘要】：目的:利用高糖及H202建立應激高糖H9c2心肌細胞模型,探討應激性高糖對H9c2心肌細胞線粒體動力學相關蛋白表達、線粒體膜電位水平及細胞凋亡的影響,以及紅景天苷對應激性高糖H9c2心肌細胞的保護作用及其機制。方法:將正常培養(yǎng)的H9c2細胞隨機分為5組:①對照組(C組):用含5.5mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;②高糖組(G組):用含33.3mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;③H202組(H組):用含100 μ mol/1 H202的低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成低糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h;④高糖+H202組(G+H組):用含100 μ mol/1 H202的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h;⑤紅景天苷+高糖+H202組(S+G+H組):用含100 μ mol/lH202+0.4mg/ml紅景天苷的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成含0.4mg/ml紅景天苷的高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h。CCK-8法測定細胞活力,確定H202的作用濃度以及紅景天苷的最適實驗濃度及作用時間。心肌細胞分組培養(yǎng)后,利用流式細胞技術分析各組H9c2心肌細胞的凋亡率、Western blot分別檢測線粒體動力學相關蛋白Drp1、OPA1的表達水平、JC-1熒光染色法檢測各組心肌細胞的線粒體膜電位水平。結果:1.與C組比較,G組H9c2細胞Drp1蛋白表達水平明顯升高(P0.01);OPA1蛋白表達水平明顯降低(P0.01);線粒體膜電位下降(P0.05);細胞凋亡率升高(P0.05);與C組比較,H組及G+H組H9c2細胞Drp1蛋白表達水平明顯升高(P0.01);OPA1蛋白表達水平明顯降低(P0.01);線粒體膜電位明顯下降(P0.01);細胞凋亡率升高(P0.01)。2.與G+H組比較,S+G+H組Drp1蛋白表達水平明顯降低(P0.01);OPA1蛋白表達水平明顯升高(P0.01);線粒體膜電位升高(P0.01);細胞凋亡率降低(P0.01)。結論:1.應激性高糖通過抑制H9c2心肌細胞線粒體動力學平衡,降低線粒體膜電位,增加心肌細胞凋亡,從而損傷心肌細胞。2.紅景天苷可抑制應激性高糖引起的H9c2心肌細胞凋亡,其機制與增加線粒體OPA1蛋白表達、抑制Drp1蛋白表達從而改善線粒體動力學平衡,以及升高線粒體膜電位水平有關,對應激性高糖心肌細胞具有一定的保護作用。
【圖文】：

實驗結果顯示，０？４００ｕｍｏｌ／Ｌ邋Ｈ２０２作用于Ｈ９ｃ２細胞２ｈ后，細胞生存率隨著Ｈ２0２濃逡逑度升高降低，每組與對照組相比，均有明顯差異（Ｐ＜０．０１），處于ｌ00ｕｍｄ／Ｌ時，，細胞活逡逑力下降４９％左右，選用１００ｕｍｏｌ／Ｌ作為后續(xù)實驗的濃度。（見圖２－１、表２－１）逡逑邐表２－１不同濃度Ｈ２０２對Ｈ９ｃ２心肌細胞活力的影響邐逡逑Ｈ２０２邋濃度（ｔｉｍｏｌ／Ｌ）邐ｎ邐存活率邐逡逑０邐６邐１００％逡逑５０邐６邐８０．９６±２．１１％＊＊逡逑１００邐６邐４９．２２±１．４２％＊＊逡逑２００邐６邐３５．６７±０．５６％＊＊逡逑４００邐６邐３丨．０５±１．７５％＊＊逡逑注：與對照組組間比較，＊＊戶＜０．０１逡逑一邋１５0ｉ逡逑２逡逑芒逡逑８逡逑＾邋ｌｏｏ－逡逑１５Ｊ邋＿邋．逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋５０邐１００邐２００邐４００逡逑Ｈ２０２濃度（ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑圖２－１不同Ｈ２０２濃度對Ｈ９ｃ２心肌細胞活力的影響逡逑注：與對照組組間相比，＊＊戶＜0．0１逡逑３．２紅景天苷不同濃度及作用時間對Ｈ９ｃ２心肌細胞活力的影響逡逑實驗結果顯示，０、０．１、０．２、０．４、０．８濃度的紅景天苷對高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑環(huán)境的心肌細胞作用２４ｈ，顯示紅景天苷在０．４ｍｇ／ｍｌ，心肌細胞活力最高，與其余各組相逡逑比，具有顯著差異（Ｐ＜０．０１），選用此濃度作為最適合作用濃度；選用０．４ｍｇ／ｍｌ紅景天苷逡逑對高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ，２ｈ）環(huán)境的Ｈ９ｃ２心肌細胞分別作用１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ，結果顯逡逑示

ｒｍＭｍ逡逑０邐０．１邐０．２邐０．４邐０．８逡逑圖２－２不同紅景天苷濃度對應激高糖Ｈ９ｃ２心肌細胞活力的影響逡逑注：與其余各組組間相比，＊＊Ｐ＜０．０１逡逑0４１逡逑Ｌ．邋｛逡逑芒邐＊逡逑８邋３－邐丁邐－Ｉ－逡逑名邐ＳＳＳ５５５邋｜邐｜逡逑°０邐微微逡逑Ｉ２■~枺遅 逡逑＾邐＾邐■逡逑Ｓ邐一逡逑ｕ邋0邐ＲＳＳＳＳｇｇａｉ逡逑１２ｈ邐２４ｈ邐４８邋ｈ逡逑圖２－３紅景天苷（０．４ｍｇ／ｍｌ）作用不同時間對Ｈ９ｃ２心肌細胞活力的影響逡逑注：與１２ｈ組間相比，＊Ｐ＜０．０５逡逑３．３紅景天苷對應激性高糖Ｈ９ｃ２心肌細胞凋亡的影響逡逑流式細胞儀分析各組心肌細胞凋亡結果顯示：與對照組相比，高糖組心肌細胞凋亡率逡逑明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（尸＜０．０５）；與對照組相比，Ｈ２０２組、高糖＋Ｈ２０２組心肌逡逑細胞凋亡率明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０１）；與高糖＋Ｈ２0２組相比，紅景天苷＋逡逑高糖＋Ｈ２０２組心肌細胞凋亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（戶＜０．０１）（見表２－２
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2683226