【摘要】：背景黃酮醇糖苷(代號GDH),是在中藥提取物3,3',4'-三羥基黃酮的基礎上進行結構修飾得到的人工合成的候選新藥,具有改善血液循環(huán),降低膽固醇的作用,有很好的降血脂活性,目前處于臨床研發(fā)階段。目的建立快速、靈敏的LC-MS/MS法同時測定大鼠血漿中的黃酮醇糖苷(M0)、苷元(M1)和葡萄糖醛酸結合物(M2),并將驗證后的方法應用于黃酮醇糖苷的大鼠藥代動力學研究,為黃酮醇糖苷的臨床試驗設計提供依據。方法大鼠血漿樣品經甲醇(含0.2%甲酸)沉淀蛋白后,以去離子水(含0.2%甲酸)-甲醇為流動相進行梯度洗脫,色譜柱為XDB C_(18)(50×4.6 mm,1.8μm),色譜運行時間為4.5min。質譜檢測采用電噴霧電離源(ESI),正離子模式進行多重反應監(jiān)測(MRM)。用于定量分析的離子對分別為m/z 461.3→m/z 299.1(黃酮醇糖苷,M0),m/z 299.1→m/z 283.1(苷元,M1),m/z 475.0→m/z 299.1(葡萄糖醛酸結合物,M2)和m/z 467.3→m/z 305.1(d_6-黃酮醇糖苷,IS)。結果測定大鼠血漿中黃酮醇糖苷標準曲線的線性范圍為2.00ng·mL~(-1)~400 ng·mL~(-1),苷元的線性范圍為2.00 ng·mL~(-1)~400 ng·mL~(-1),葡萄糖醛酸結合物的線性范圍為5.00 ng·mL~(-1)~1000 ng·mL~(-1)。待測物低、中、高質控樣品的日內和日間的精密度和準確度均符合生物樣品測定相關要求�？疾齑笫笕獦悠肥覝胤胖�2 h,血漿樣品室溫放置6 h,血漿樣品經沉淀蛋白處理后室溫放置6 h,自動進樣器放置24 h,血漿樣品-20°C放置50天,血漿樣品-70°C放置50天,-20°C經歷3次冷凍-解凍循環(huán),-70°C經歷3次冷凍-解凍循環(huán)等條件下的穩(wěn)定性,結果表明:黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結合物的大鼠血漿及全血樣品在上述儲存條件下均穩(wěn)定。SD大鼠經灌胃給予黃酮醇糖苷30 mg·kg~(-1)后,M0的C_(max)為(341±106)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)為(1960±725)h·ng·mL~(-1);M1在血漿中的含量低于分析方法的定量下限2 ng·mL~(-1),無法測定相應濃度計算C_(max)和AUC_(0-t);M2的C_(max)為(1720±843)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)為(8510±2920)h·ng·mL~(-1)。其中M2的C_(max)為M0的5.0倍,AUC_(0-t)為M0的4.3倍。結論本實驗建立了準確、靈敏的LC-MS/MS法同時測定大鼠血漿中的黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結合物,并進行了完整的方法驗證,最后將驗證后的方法成功應用于黃酮醇糖苷的大鼠藥代動力學研究。實驗結果表明,在SD大鼠血漿中,黃酮醇糖苷主要以原形和葡萄糖醛酸結合物這兩種形式存在,且M2的暴露量顯著高于M0,推測黃酮醇糖苷經口服給藥后在體內經腸菌群水解成苷元形式被吸收,經歷較強的首過代謝后,苷元進一步生成葡萄糖醛酸結合物。本文首次測定了黃酮醇糖苷在大鼠血漿中的主要代謝物,為臨床藥動學試驗設計提供了依據。對于黃酮類化合物的藥動學研究,不僅要關注原形藥物,而且更要關注其代謝物,后者在血漿中的暴露量通常遠高于前者。
【圖文】：

I II圖 2-3 d3-黃酮醇糖苷、d6-黃酮醇糖苷的化學結構Figure 2-3 Structures of d3-flavonol glycoside and d6-flavonol glycoside液的配制精密稱取黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結合物對照品各兩份，用并用甲醇定容，，獲得質量濃度均為 1.00 mg·mL-1的 M0、M1、M2，分別用于配制標準系列樣品和質控樣品。醇-水（50:50，v/v）稀釋 M0、M1、M2 儲備液及質控儲備液，M2 質量濃度為 40.0/40.0/100、80.0/80.0/200、200/200/500、400/400/100/2500、2000/2000/5000、4000/4000/10000、8000/8000/20000 ng準系列溶液，分別取上述混合標準系列溶液 10 μL，加入大鼠空白獲得 M0/M1/M2 濃度為 2.00/2.00/5.00、4.00/4.00/10.0、10.0/10.0/2
【學位授予單位】：浙江工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2682537