發(fā)布時(shí)間：2020-05-26 23:06

【摘要】：背景黃酮醇糖苷(代號(hào)GDH),是在中藥提取物3,3',4'-三羥基黃酮的基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到的人工合成的候選新藥,具有改善血液循環(huán),降低膽固醇的作用,有很好的降血脂活性,目前處于臨床研發(fā)階段。目的建立快速、靈敏的LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中的黃酮醇糖苷(M0)、苷元(M1)和葡萄糖醛酸結(jié)合物(M2),并將驗(yàn)證后的方法應(yīng)用于黃酮醇糖苷的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究,為黃酮醇糖苷的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。方法大鼠血漿樣品經(jīng)甲醇(含0.2%甲酸)沉淀蛋白后,以去離子水(含0.2%甲酸)-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,色譜柱為XDB C_(18)(50×4.6 mm,1.8μm),色譜運(yùn)行時(shí)間為4.5min。質(zhì)譜檢測(cè)采用電噴霧電離源(ESI),正離子模式進(jìn)行多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 461.3→m/z 299.1(黃酮醇糖苷,M0),m/z 299.1→m/z 283.1(苷元,M1),m/z 475.0→m/z 299.1(葡萄糖醛酸結(jié)合物,M2)和m/z 467.3→m/z 305.1(d_6-黃酮醇糖苷,IS)。結(jié)果測(cè)定大鼠血漿中黃酮醇糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為2.00ng·mL~(-1)~400 ng·mL~(-1),苷元的線性范圍為2.00 ng·mL~(-1)~400 ng·mL~(-1),葡萄糖醛酸結(jié)合物的線性范圍為5.00 ng·mL~(-1)~1000 ng·mL~(-1)。待測(cè)物低、中、高質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間的精密度和準(zhǔn)確度均符合生物樣品測(cè)定相關(guān)要求�？疾齑笫笕獦悠肥覝胤胖�2 h,血漿樣品室溫放置6 h,血漿樣品經(jīng)沉淀蛋白處理后室溫放置6 h,自動(dòng)進(jìn)樣器放置24 h,血漿樣品-20°C放置50天,血漿樣品-70°C放置50天,-20°C經(jīng)歷3次冷凍-解凍循環(huán),-70°C經(jīng)歷3次冷凍-解凍循環(huán)等條件下的穩(wěn)定性,結(jié)果表明:黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結(jié)合物的大鼠血漿及全血樣品在上述儲(chǔ)存條件下均穩(wěn)定。SD大鼠經(jīng)灌胃給予黃酮醇糖苷30 mg·kg~(-1)后,M0的C_(max)為(341±106)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)為(1960±725)h·ng·mL~(-1);M1在血漿中的含量低于分析方法的定量下限2 ng·mL~(-1),無法測(cè)定相應(yīng)濃度計(jì)算C_(max)和AUC_(0-t);M2的C_(max)為(1720±843)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)為(8510±2920)h·ng·mL~(-1)。其中M2的C_(max)為M0的5.0倍,AUC_(0-t)為M0的4.3倍。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)建立了準(zhǔn)確、靈敏的LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中的黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結(jié)合物,并進(jìn)行了完整的方法驗(yàn)證,最后將驗(yàn)證后的方法成功應(yīng)用于黃酮醇糖苷的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在SD大鼠血漿中,黃酮醇糖苷主要以原形和葡萄糖醛酸結(jié)合物這兩種形式存在,且M2的暴露量顯著高于M0,推測(cè)黃酮醇糖苷經(jīng)口服給藥后在體內(nèi)經(jīng)腸菌群水解成苷元形式被吸收,經(jīng)歷較強(qiáng)的首過代謝后,苷元進(jìn)一步生成葡萄糖醛酸結(jié)合物。本文首次測(cè)定了黃酮醇糖苷在大鼠血漿中的主要代謝物,為臨床藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了依據(jù)。對(duì)于黃酮類化合物的藥動(dòng)學(xué)研究,不僅要關(guān)注原形藥物,而且更要關(guān)注其代謝物,后者在血漿中的暴露量通常遠(yuǎn)高于前者。
【圖文】：

I II圖 2-3 d3-黃酮醇糖苷、d6-黃酮醇糖苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 2-3 Structures of d3-flavonol glycoside and d6-flavonol glycoside液的配制精密稱取黃酮醇糖苷、苷元和葡萄糖醛酸結(jié)合物對(duì)照品各兩份，用并用甲醇定容，，獲得質(zhì)量濃度均為 1.00 mg·mL-1的 M0、M1、M2，分別用于配制標(biāo)準(zhǔn)系列樣品和質(zhì)控樣品。醇-水（50:50，v/v）稀釋 M0、M1、M2 儲(chǔ)備液及質(zhì)控儲(chǔ)備液，M2 質(zhì)量濃度為 40.0/40.0/100、80.0/80.0/200、200/200/500、400/400/100/2500、2000/2000/5000、4000/4000/10000、8000/8000/20000 ng準(zhǔn)系列溶液，分別取上述混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 10 μL，加入大鼠空白獲得 M0/M1/M2 濃度為 2.00/2.00/5.00、4.00/4.00/10.0、10.0/10.0/2
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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