發(fā)布時間：2020-05-26 15:54

【摘要】：重樓皂苷化合物具有抗病毒、抗炎、抗腫瘤活性,然而,其抗腫瘤機制尚有待進一步揭示。本研究中,我們以乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細胞為模型,對重樓皂苷中提取的皂苷類化合物進行了抗乳腺癌活性篩選,并選取其中活性最好的化合物XA-2開展了體外抗腫瘤作用機制研究。首先,我們通過MTT法檢測了XA-2對乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231的增殖的影響,采用Annexin-V/FITC染色并通過流式細胞術(shù)檢測了XA-2對MCF-7和MDA-MB-231細胞凋亡的影響;并且我們使用自噬抑制劑3-MA和BFA預(yù)處理乳腺癌細胞后再加入XA-2作用細胞,通過MTT實驗和流式凋亡實驗檢測兩株細胞的生存率和細胞凋亡情況;通過Western-blot法檢測了XA-2對凋亡相關(guān)蛋白Caspase3、Caspase9和PARP的影響,并檢測了對細胞凋亡和自噬具有重要調(diào)控作用的Akt/mTOR信號通路相關(guān)蛋白Akt、mTOR、P70S6k和4EBP1的活化以及自噬相關(guān)蛋白LC3和p62影響;進一步通過吖啶橙染色的方法以及透射電鏡拍攝檢測了XA-2對MCF-7和MDA-MB-231細胞自噬溶酶體和自噬小體的影響。研究結(jié)果顯示,重樓皂苷提取物XA-2對乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細胞增殖具有顯著的抑制效果,其IC50值分別為2.54μM和2.28μM,并且其作用具有濃度依賴性;XA-2能夠誘導(dǎo)MCF-7和MDA-MB-231細胞的凋亡,導(dǎo)致濃度依賴性的促進Caspase3、9以及PARP的切割活化;XA-2誘導(dǎo)兩株乳腺癌細胞發(fā)生自噬,促進自噬相關(guān)蛋白LC3-II/I比值顯著上升以及p62下調(diào);XA-2誘導(dǎo)的自噬作用細胞的凋亡具有明顯的促進作用;XA-2可呈濃度依賴性地抑制細胞凋亡和自噬的關(guān)鍵蛋白Akt、mTOR、P70S6k和4EBP1的活化,表明Akt/mTOR信號通路可能是XA-2發(fā)揮抗乳腺癌作用的一個關(guān)鍵途徑。
【圖文】：

重樓皂苷化合物的結(jié)構(gòu)式Fig.1.ChemicalstructuresofParissaponins

圖 2 重樓皂苷化和物對乳腺癌細胞體外生存活率的影響Fig. 2. Effect of XA-2 on the proliferation MCF-7 and MDA-MB-231 cells使用不同濃度（0、1.56、3.125、 6.25、12.5、25、50 μM）重樓化合物處理乳腺癌細胞 48h，細胞為 4 ×104/mL，通過 MTT 實驗檢測 MCF-7 和 MDA-MB-231 的生存率。設(shè)置三次獨立重復(fù)試驗，
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2682076